G4PAMAM/VEGFASODN抗乳腺癌血管生成的体外实验研究

目的：探讨G4PAMAM／VEGFASODN复合物体外对乳腺癌细胞MDA—MB-231VEGF、VEGF mRNA表达的影响及血管内皮细胞生长的抑制作用。方法：用透射电镜观测G4PAMAM／VEGFASODN的粒径，在不同的酸碱度下观察G4PAMAM／VEGFASODN的稳定性；将G4PAMAM／VEGFASODN进行体外转染，流式细胞仪测定其转染率，激光共聚焦检测转染阳性细胞，MTT法检测转染后细胞的存活率；免疫组化检测VEGF蛋白的表达，RT—PCR检测VEGFmRNA的表达，MTT法测定此复合物对血管内皮细胞生长的抑制作用。结果：G4PAMAM／VEGFASODN的直径约10nm，呈较均匀的网状排列；酸碱度在5到10的范围内具有较高的稳定性，不同电荷比的G4PAMAM／VEGFASODN均没有出现被解离的现象；48h时G4PAMAM／VEGFASODN组在1：40的条件下转染率明显高于脂质体组；各组转染物均对细胞无明显毒性；VEGF蛋白在G4PAMAM／VEGFASODN转染后的MDA—MB-231细胞胞浆中的染色强度明显减弱，阳性表达率显著降低，VEGFmRNA的表达也受到有效的抑制。结论：G4PAMAM／VEGFAsODN复合物稳定性好、转染率高，是一种有良好应用前景的新型纳米载体基因转移系统；G4PAMAM／VEGFASODN复合物能够高效特异地抑制目的基因VEGF的表达，为进一步进行体内动物实验提供了依据。     

miR-31调控PAX9对肺癌细胞增殖和侵袭能力的影响

目的 研究miR-31调控配对盒基因9(PAX9)对肺癌细胞侵袭和增殖能力的影响.方法 运用免疫组织化学检测肺癌组织和癌旁正常组织PAX9蛋白的表达;运用荧光定量PCR检测肺癌组织、癌旁正常组织和肺癌细胞株M14中miR-31的表达.通过转染miR-31-inhibitor下调M14细胞中miR-31的表达,双荧光素酶活性检测miR-31对PAX9转录活性的影响;Transwell侵袭实验检测miR-31对M14细胞的侵袭能力的影响;平板克隆实验检测miR-31对M14细胞的增殖能力的影响.结果 与癌旁正常组织比较,PAX9蛋白在肺癌组织中表达降低,miR-31在肺癌组织中表达明显升高(P<0.05);双荧光素酶活性检测结果显示,miR-31可以直接调控PAX9的转录活性;抑制miR-31的表达后,肺癌细胞株M14的PAX9蛋白表达水平上调,侵袭和转移能力明显降低(P<0.05).结论 miR-31靶向PAX9的表达,从而调控肺癌细胞的侵袭和增殖能力.     

吉西他滨联合顺铂治疗晚期肺鳞癌的疗效及生存情况分析

目的 研究吉西他滨联合顺铂(GP)治疗肺鳞状细胞癌的临床疗效和患者的生存情况.方法 回顾性分析96例肺鳞状细胞癌患者的临床资料,其中48例经GP治疗,作为观察组;48例经紫杉醇联合顺铂(TP)治疗,作为对照组.分析两组患者的近期疗效、不良反应发生情况和生存情况.评价GP治疗肺鳞状细胞癌的临床意义.结果 观察组患者的临床疗效如完全缓解(CR)、部分缓解(PR)、稳定(SD)、进展(PD)与对照组比较,差异有统计学意义(Z=2.171,P=0.030).观察组患者的疾病控制率(77.1％)高于对照组(52.1％),差异有统计学意义(χ2=6.558,P﹤0.05);观察组周围神经毒性的发生率2.1％低于对照组16.7％,差异有统计学意义(P﹤0.05);观察组中位生存时间35个月(95％CI:33.326～36.674)优于对照组25个月(95％CI:18.216～31.784),差异有统计学意义(χ2=4.136,P=0.042).结论 GP治疗肺鳞状细胞癌的不良反应轻、疾病控制率高,对延长患者生存时间有重要单位作用,值得临床应用和推广.     

多层动态容积CT胰腺癌灌注成像的临床应用研究

目的:结合病理及免疫组化结果,探讨多层容积CT灌注成像在胰腺癌术前分化程度评估中的应用价值,进一步探讨其在胰腺癌靶向治疗中的应用前景。方法:回顾性分析40例病理确诊的胰腺癌患者的灌注图像,分别利用最大斜率法及Patlak法获得动脉血流量（artery blood flow,AF）、等效血容量（equivalent blood volume, Equiv BV）及血流萃取 (blood flow extraction,FE)值,比较低分化及高分化胰腺癌灌注值之间的差异,运用ROC曲线评估AF值及Equiv BV值的诊断效能;另对40例胰腺癌标本进行PFKFB3 免疫组化染色,并分析胰腺癌灌注参数与PFKFB3表达的相关性。结果:低分化胰腺癌组织AF值、Equiv BV值低于高分化胰腺癌组织,差异有统计学意义（P＜0.05）,FE值之间差异没有统计学意义（P＞0.05）;AF值对癌组织分化程度的预测效能较高,AUC 为0.715,临界值46.88 mL/（min·100 mL）,敏感性77.0%,特异性86.0%;PFKFB3表达与AF及Equiv BV值呈负相关(r=-0.744,P=0.00＜0.05;r=-0.518,P=0.028<0.05),与FE值没有相关性(r=0.066 ,P=0.082＞0.05)。结论:640层容积CT灌注成像可以用于胰腺癌术前分化程度的初步预测,并有望用于PFKFB3靶点的药物疗效观察。     

肿瘤相关巨噬细胞对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响

目的观察肿瘤相关巨噬细胞(tumor-associated macrophages,TAMs)对乳腺癌MCF-7细胞侵袭迁移能力的影响,并初步探索其机制。方法选取人单核细胞系THP-1,体外经佛波酯(PMA)、人白细胞介素-4(IL-4)诱导获得TAMs细胞模型;通过流式细胞术(FCM)检测TAMs表面标记分子CD206表达水平;MCF-7细胞与TAMs共培养后,光学倒置显微镜观察细胞形态;利用Transwell小室分别检测MCF-7细胞的侵袭和迁移能力;蛋白印记法(Western blotting)检测E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)及波形纤维蛋白(Vimentin)的表达;采用酶联免疫吸附法(ELISA)测定细胞培养上清中转化生长因子-β(TGF-β)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和血管内皮生长因子(VEGF)的浓度。结果与TAMs共培养后的MCF-7细胞伪足增多,细胞排列更松散。通过FCM检测到TAMs表面标记物CD206显著表达。Transwell实验结果显示,与TAMs共培养后的MCF-7细胞迁移能力增强,对照组穿过Transwell小室细胞数为(54±2)个,实验组为(110±6)个,差异有统计学意义(P<0.001);其侵袭能力显著增强,对照组穿透基质膜的细胞数为(41±1)个,实验组为(77±4)个,差异亦有统计学意义(P<0.001)。Western blotting检测结果显示,MCF-7细胞与TAMs共培养后,E-cadherin、Occludin蛋白表达较对照组显著降低,而N-cadherin和Vimentin蛋白表达量显著升高(P均<0.05)。ELISA法检测TAMs与MCF-7细胞共培养上清中的TGF-β、TNF-α、VEGF浓度均较对照组升高(P均<0.05)。结论TAMs与乳腺癌MCF-7细胞的浸润转移过程密切相关,TAMs可通过促进MCF-7细胞发生上皮间质转化(EMT)进而促进乳腺癌的浸润转移。     

晚期恶性肿瘤基因突变状态二代测序临床意义分析

目的 靶向治疗是晚期恶性肿瘤的重要治疗方法,二代测序能够准确、高通量地检测基因突变情况,对恶性肿瘤治疗有重要意义.本研究运用二代基因测序(next-generation sequencing,NGS)技术检测晚期恶性肿瘤的基因突变情况,并初步分析错义突变的临床意义.方法 2011-09-01-2016-09-30收集陕西省人民医院肿瘤内科93例晚期恶性肿瘤患者病理组织石蜡标本,利用离子个体化基因检测仪(Ion Personal Genome Machine,Ion Torrent PGM)平台检测标本16个肿瘤相关基因428个常见的突变位点的突变状态,并查询临床试验(Clinical Trails)与美国食品与药物管理局(Food and Drug Administration,FDA)官网数据资料.结果 共发现119个错义突变,其中TP53发生频率最高为34.5％(41/119);除TP53突变在各瘤种中均占较大比例外,肺癌突变频率最高为表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR) 25.7％(9/35),结直肠癌为KRAS 31.6％ (6/19),胃癌为KDR 3/6,卵巢癌为KRAS 2/7,宫颈癌为KDR 3/5.70例(75.3％,70/93)检测发现＞1个的错义突变位点;93.8％(15/16)的被检测基因有正在研发中的小分子抑制剂和(或)单抗类制剂,75.0％(12/16)的被检测基因已有FDA批准用于特定瘤种的靶向药物,68.8％(11/16)的被检测基因有尚未被FDA批准的靶向药物.结论 晚期恶性肿瘤基因错义突变发生率较高,且不同瘤种的突变谱不同,目前基于NGS指导的恶性肿瘤个体化靶向治疗有广阔的应用前景.     

免疫检查点抑制剂联合抗血管生成药物治疗晚期衰竭卵巢癌1例

卵巢癌是妇科三大恶性肿瘤之一,死亡率位居妇科恶性肿瘤首位,由于较难早期发现,很多卵巢癌患者初次就诊时已达Ⅲ期或Ⅳ期,因而预后差,死亡率高.铂类联合紫杉醇是晚期卵巢癌一线首选化疗方案,对约80％的患者有效[1-2].然而,绝大多数复发患者会产生化疗耐药,从而导致治疗效果欠佳,并且不良反应也很严重.因此,迫切需要更多新的治...     

EGCG对辐射治疗食管癌及ROS的影响

目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯((-)-epigallocatechin gallate, EGCG)是否影响了辐射对食管癌Eca-109细胞的作用及活性氧(reactive oxygen species, ROS)的变化。方法 将Eca-109细胞分为4组：对照组(control组)、辐射组(2 Gy, 24 h)、EGCG组(20μmol/L,24 h)和辐射+EGCG组。流式细胞仪检测细胞周期、细胞凋亡比例和ROS变化。Western blot检测Caspase-3和Bcl-2蛋白表达。克隆形成实验检测放射敏感性指标平均致死剂量(D0)、准阈剂量(Dq)及靶数值变化。结果 与control组和EGCG组相比，辐射组与辐射+EGCG组G2/M期细胞比例降低(P<0.05);其余组间差异无统计学意义(P>0.05)。与control组和EGCG组相比，辐射组与辐射+EGCG组细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达增多(P<0.05);与辐射组相比，辐射+EGCG组细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达增多(P<0.05);其余组间差异无统计学意义(P>...     

Apatinib联合5-Fu协同抑制乳腺癌MCF-7细胞的体外研究

目的 探讨阿帕替尼(Apatinib)联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对乳腺癌MCF-7细胞的抑制作用.方法 采用人乳腺癌细胞株MCF-7,首先采用MTr法及应用流式细胞仪测定不同浓度apatinib作用后对其细胞增殖和周期的影响,其次将MCF-7细胞分为4组,即对照组、Apatinib单药组、5-Fu单药组、Apanitib+ 5-Fu联合组.对各组细胞给予相应药物处理,48 h后分别应用流式细胞仪检测各组药物对MCF-7细胞株凋亡的作用.结果 Apatinib单药对MCF-7细胞有增殖抑制作用,且存在时间剂量依赖关系,而对其细胞周期影响不大.与对照组相比,Apatinib联合5-Fu作用后有协同诱导凋亡作用,经流式细胞仪检测,Apatinib组诱导的细胞凋亡率为12.05％,5-Fu组为25.76％.与单药组比,Apatinib+5-Fu联合组凋亡率升高更为明显,达34.90％ (P＜ 0.05).结论 Apatinib和5-Fu的联合应用在体外协同抑制乳腺癌MCF-7细胞并诱导凋亡,使抗肿瘤活性显著增强.     

CisoDGR 多肽对乳腺癌 MCF －7细胞增殖、凋亡的影响及其机制探讨

目的：探讨 CisoDGR 多肽对乳腺癌 MFC －7细胞增殖和凋亡的影响及可能机制。方法：采用 MTT 法检测 CisoDGR 多肽对乳腺癌 MCF －7细胞的抑制率;流式细胞术检测 CisoDGR 多肽对 MCF －7细胞凋亡的影响;Western blot 法检测 Caspase －3、Bcl －2蛋白的表达。结果：CisoDGR 多肽能明显抑制乳腺癌 MCF －7细胞的增殖,诱导细胞凋亡,并存在一定的时－效及量－效关系。其对凋亡的诱导作用可能与 Caspase －3蛋白表达增加及 Bcl －2蛋白表达下降有关。结论：CisoDGR 多肽具有抑制 MCF －7细胞增殖,诱导 MCF －7细胞凋亡的作用,其作用机制可能与 Caspase －3、Bcl －2蛋白的表达变化有关。