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1.
葡萄糖脱氢酶连续监测法的研究   总被引:6,自引:2,他引:4  
目的建立葡萄糖脱氢酶连续监测法,优化其检测条件。方法按酶连续监测法测定要求,对克隆的枯草芽孢杆菌葡萄糖脱氢酶表达酶液进行测定,确定反应体系的底物浓度、最适pH、反应温度、延滞时间、测定时间、检测范围等。结果以葡萄糖和NAD 为底物时,用连续监测法检测葡萄糖脱氢酶是可行的。当葡萄糖、NAD 的终浓度分别为100mmol/L和2mmol/L时,在反应pH74,37℃,延滞时间30s,测定时间60s等条件下,检测上限可达10000U/L。结论连续监测法能用于测定葡萄糖脱氢酶,快速简便,结果可靠。  相似文献   
2.
毛细管电泳(capillary electrophoresis,CE)又称高效毛细管电泳(high.performance capillary electrophresis,HPCE),是20世纪80年代问世的一种高效液相分离法,是经典电泳技术和现代微柱分离相结合的产物。由于HPCE技术具有分析速度快、分离效率高、操作模式多、实验成本低消耗少、仪器结构简单可实现自动化等特点,在生物化学、分子生物学等生命科学领域的应用越来越广泛,在蛋白质、核酸、糖等生物分子的分离分析等方面具有很大的发展潜力。近年来,HPCE在检测技术、操作模式、与其他技术的联合及其在生物分子研究中的应用等都取得了很大进展。  相似文献   
3.
随着计算机、多媒体教学的普及与网络教育的逐步推行,教学方式发生了很大的变革。同时,教材的建设趋于立体化[1]。《临床生物化学检验》是高等医学检验专业的一门主干课程,在全国高等医药院校医学检验专业规划教材建设委员会和中国医药科技出版社的大力支持下,全国28所高等院校组  相似文献   
4.
猪软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取纯化与鉴定   总被引:2,自引:1,他引:2  
目的:从猪关节软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白,并对其进行鉴定。方法:选择猪关节软骨为提取原料,用盐酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶消化、氯化钠盐析、DE22纤维树脂处理等步骤,提取纯化Ⅱ型胶原蛋白。采用SDS-PAGE、吸收光谱分析、氨基酸成分分析等方法对Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定。结果:4mol/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖;分步加入胃蛋白酶的限制性酶解结果满意;氯化钠盐析浓度为2.4mol/L时最佳。SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的Ⅱ型胶原蛋白与Sigma公司的产品一致。Ⅱ型胶原最大吸收峰为230nm,氨基酸成分分析显示甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高。结论:实验结果提示从猪关节软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高,符合Ⅱ型胶原的特征。提取材料广泛、实验条件简便。结果可靠。  相似文献   
5.
可溶性Ⅱ型胶原蛋白提取纯化条件的研究   总被引:5,自引:1,他引:4  
目的 优化实验条件,建立提取纯化可溶性Ⅱ型胶原蛋白(soluble collagen typeⅡ,SCⅡ)的可靠方法.方法 选择鸡胸箭突软骨为提取原料,用盐酸胍去除蛋白多糖,对胃蛋白酶的消化方式、氯化钠盐析浓度、DEAE阴离子树脂种类进行研究.采用SDS-PAGE、吸收光谱分析、氨基酸成分分析对SCⅡ进行鉴定.结果 4 mol/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖,分二步加入胃蛋白酶的消化结果满意,氯化钠盐析浓度为2.4 mol/L时最佳.SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的SCⅡ与Sigma公司的产品一致,SCⅡ最大吸收峰为230 nm,在检出的15种氨基酸中甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高.结论 改进后的方法具有材料广泛、实验条件简便、结果可靠等优点,适用于科研、临床各种规模SCⅡ的提取.所得产品纯度高、符合Ⅱ型胶原的特征.  相似文献   
6.
Ⅱ型胶原蛋白抗血清的制备和检测   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的:探讨Ⅱ型胶原蛋白(collagen protein type Ⅱ, CⅡ)抗体产生规律,制备CⅡ抗血清.方法:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔,每隔10 d收集血清,以改良间接ELISA法检测抗CⅡ抗体效价.结果:鸡CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天抗体效价为1∶ 3 200,第20天升至1∶ 204 800;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别达到1∶ 409 600和1∶ 819 200.猪CⅡ免疫新西兰白兔后,第10天血清中未能检测出抗体,第20天血清抗体效价为1∶ 3 200;加强免疫后,第30天和第40天抗体效价分别为1∶ 51 200和1∶ 102 400.结论:采用纯化的鸡和猪CⅡ免疫新西兰白兔后,经一定潜伏期血清中出现抗体,可以获得高效价抗CⅡ抗体血清.抗体产生情况符合机体初次及再次免疫应答的有关规律,但血清抗体产生的潜伏期和效价与不同种属来源的胶原蛋白有关.  相似文献   
7.
血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体检测法的建立与应用   总被引:2,自引:0,他引:2  
目的 建立血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的ELISA法,探讨其在类风湿关节炎(RA)患者中的应用价值.方法 以自提可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白(soluble chicken collagen type Ⅱ,SCC Ⅱ)作为包被抗原,优化实验条件,建立抗Ⅱ型胶原蛋白抗体间接ELISA法.对124例RA病人和54例健康人血清抗II型胶原蛋白抗体进行检测.结果 血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体的检测条件为:SCCⅡ包被浓度为20 μg/ml;以含10%羊血清的缓冲液进行封闭、稀释血清和酶标抗体;采用双波长(450nm/630 nm)进行测定.RA患者和健康人血清抗Ⅱ型胶原蛋白抗体阳性率分别为19.35%(24/124)和1.85%(1/54),两组有明显的统计学差异(P<0.01).结论 以SCCⅡ为包被抗原检测抗Ⅱ型胶原蛋白抗体可作为判断RA患者病情的一个辅助诊断指标.  相似文献   
8.
目的:观察消化酶在体内和体外对天然Ⅱ型胶原蛋白(native type Ⅱ collagen,N-C Ⅱ)和变性Ⅱ型胶原蛋白(denatured type Ⅱcollagen,D-C Ⅱ)的酶解作用,探讨口服Ⅱ型胶原蛋白(type Ⅱ collagen,CⅡ)治疗类风湿性关节炎的机制.方法:在体外将胃蛋白酶、胰蛋白酶和...  相似文献   
9.
临床生物化学及其检验课程的教学改革与实践   总被引:1,自引:0,他引:1  
姜旭淦  郑铁生  徐顺高  马洁  许文荣 《现代医药卫生》2004,20(23):2596-2596,F003
临床生物化学及其检验是医学检验专业的核心课程,是在人体正常的生物化学代谢基础上,研究疾病状态下,生物化学病理性变化的基础理论和相关代谢物的质与量的改变,从而为疾病的临床实验诊断、治疗监测、药物疗效和预后判断、疾病预防等方面提供信息和决策依据的一门学科。随着科学技术的快速发展,该学科涉及的领域不断扩大,检验项目日益增多,检  相似文献   
10.
可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白的理化特性研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
摘要:目的:研究可溶性鸡Ⅱ型胶原蛋白(SCCⅡ)的物理化学特性。 方法:用光谱法测定吸收峰和等电点,HPLC法检测氨基酸组成,乌氏黏度计测定不同条件下溶液的增比黏度。用SDS-PAGE测定相对分子量(Mr),结合免疫印迹法分析胃蛋白酶、胰蛋白酶、α-糜蛋白酶和Ⅱ型胶原酶作用于SCCⅡ和热变性后的SCCⅡ(D-SCCⅡ)的酶解产物。 结果:SDSPAGE显示SCCⅡ亚基的Mr约为120×103,能与抗SCCⅡ抗体反应;D-SCCⅡ含有10多条免疫印迹呈阳性反应的片段。SCCⅡ溶液的最大吸收峰为230 nm,等电点pH约6.25。氨基酸组成中,Gly、Pro、Glu和Ala含量高,芳香族氨基酸低。SCCⅡ溶液的增比黏度随浓度的增加而增加,在25~45 ℃范围内随着温度的升高逐渐下降。在胃蛋白酶和糜蛋白酶作用下SCCⅡ的电泳和免疫印迹图谱无变化,Ⅱ型胶原酶可使SCCⅡ快速水解,胰蛋白酶作用后出现10条免疫印迹阳性条带;D-SCCⅡ经酶解后免疫印迹无阳性条带。 结论:SCCⅡ具有独特的物理化学性质,对消化酶有一定抵抗作用,胰蛋白酶作用后可出现多条活性片段。  相似文献   
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