结核分枝杆菌蛋白Rv0315的克隆表达及其抗原性研究

目的评价结核分枝杆菌重组蛋白Rv0315在结核病血清学诊断中的价值。方法采用常规分子克隆方法获得重组Rv0315蛋白,酶联免疫吸附试验（ELISA）检测84份确诊结核病人血清和48份健康人血清中相应的抗结核抗体水平,并与结核分泌蛋白ESAT-6的检测结果进行比较。结果成功构建了重组蛋白Rv0315,其在E.coli BL21plysS（DE3）中主要以可溶性形式表达,分子量（30.3kDa）与预期相符,ELISA血清学活性评估显示其特异性和敏感性分别为94.0%（45/48）和35.7%（30/84）。结论重组蛋白Rv0315有望成为新的结核病血清学诊断候选抗原。     

XTT/mPMS组合显色系统用于抗分枝杆菌药物筛选的性能评估

目的评估一种用于抗分枝杆菌药物高通量筛选的XTT/mPMS组合显色系统。方法评估XTT/mPMS系统的检测限、稳定性、细胞毒性、培养基组分干扰作用以及药物筛选试验的信噪比、Z’因子等性能指标,进行常用抗分枝杆菌药物最低抑菌浓度(MIC)测定,与刃天青显色法(resazurin microtitre assay,REMA)结果比较。结果 XTT/mPMS对分枝杆菌的检测下限为2.4×107CFU/mL,检测上限不同菌种在1.8×108～7.5×108CFU/mL之间。XTT/mPMS和7H9培养基37℃恒温共培养时至少在7 d内保持相对稳定。XTT/mPMS能与7H9-S培养基组分的营养添加剂(OADC)发生非细胞还原反应;其工作浓度(XTT 0.2 mmol/L,mPMS 0.04 mmol/L)对分枝杆菌具有低细胞毒性;XTT/mPMS检测的Z’因子均大于0.8,信噪比较低;分枝杆菌7H9-S液体培养MIC检测5～7 d(快生菌36～48 h)即可获得结果;MIC结果除M.tuberculosis的乙胺丁醇(EMB)有差异外基本与REMA法一致。结论 XTT/mPMS组合显色系统反应快速、稳定、低毒,适合于抗分枝杆菌药物高通量快速筛选。