核因子κB受体活化因子配体和肿瘤坏死因子α经炎性牙周膜干细胞外泌体促进破骨细胞分化

目的　慢性牙周炎表现的病理性骨吸收非常常见，牙周膜干细胞（PDLSCs）的外泌体（Exo）对骨吸收的作用和影响尚不明确，本研究分析了该Exo蛋白组分对破骨细胞分化的影响。方法　分别从正畸前拔牙患者和慢性牙周炎患者的牙周膜组织中提取PDLSCs，通过流式细胞术检测表面标记物；通过差速离心分别提取2种细胞的Exo，即Exo-WT和Exo-CP，并通过Western blot、透射电子显微镜（TEM）、蛋白浓度检测、纳米粒径追踪检测Exo特征；通过蛋白质谱检测2种Exo的蛋白组分；通过酶联免疫吸附（ELISA）验证了差异表达蛋白肿瘤坏死因子α（TNF-α）、核因子κB受体活化因子配体（RANKL）、白细胞介素（IL）-1α、转化生长因子β（TGF-β）、骨形态发生蛋白2（BMP-2）表达水平；将10、100、1 000 μg·mL^-1的Exo-CP或Exo-WT加入RAW264.7培养基中并于5 d时通过实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）、Western blot、抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色检测破骨分化相关指标表达情况；采用SPSS 24.0软件对实验数据进行统计学分析。结果　Exo-CP富集的差异表达蛋白主要与破骨细胞分化的TNF信号通路、核转录因子κB（NF-κB）信号通路相关；ELISA实验证实了Exo-CP中高表达TNF-α、RANKL、IL-1α，低表达TGF-β1、BMP-2（P<0.05）；Exo-CP作用于RAW264.7，显著提高了细胞的破骨分化相关基因及蛋白的表达水平，TRAP染色可见分化的破骨细胞，且呈现浓度依赖性，100、1 000 μg·mL^-1浓度Exo-CP对破骨细胞分化的促进作用显著高于10 μg·mL^-1浓度组（P<0.05）。结论　慢性牙周炎的病理性骨吸收可能由炎性PDLSCs所分泌的Exo通过促进破骨细胞分化引起，Exo中主要的作用蛋白可能为RANKL和TNF-α，本研究为慢性牙周炎骨吸收的发病机制提供了新视角。     

意向性牙再植的临床考量

当根管治疗和根尖手术难以治疗患牙根尖周病损时，意向性牙再植作为一项有着较久历史的临床技术，可作为保存天然牙的治疗手段之一。与牙种植术相比，有着更好的美学性能、经济效益，并保存了患牙的本体感受是意向性再植特有的优势。文章就意向性再植的适应证与非适应证、与牙种植术的比较及临床治疗程序做一综述。     

整合素α5β1在苯妥英钠促进大鼠PDLSCs和BMMSCs黏附于牙骨质中的作用

目的 探讨在苯妥英钠(Phenytoin,PHT)促进大鼠牙周膜干细胞(Rat periodontal ligament stem cells,rPDLSCs)、大鼠骨髓间充质干细胞(Rat Bone Marrow Mesenchymal Stem Cells,rBMMSCs)黏附于牙骨质过程中,整合素α5β1(Integrin α5β1)起到的作用。方法 提取大鼠BMMSCs和PDLSCs,培养并纯化。通过细胞鉴定后,将获得的两种细胞各分为4组:40 mg/L PHT处理组、40 mg/L PHT+整合素α5抗体处理组、40 mg/L PHT+整合素β1抗体处理组、PBS处理组,每组细胞放入置有牙骨质片的96孔板处理4 h后,检测黏附于牙骨质片上的细胞量并做以比较。最后,利用qRT-PCR和Western blot检测40 mg/L PHT组与对照组细胞的整合素α5、β1亚基的mRNA与蛋白表达量。结果 40 mg/L PHT可促进rBMMSCs及rPDLSCs黏附于牙骨质片,加入整合素α5、β1抗体后,均明显抑制了40 mg/L PHT对rBMMSCs、rPDLSCs黏附于牙骨质的促进作用(P＜0.01)。qRT-PCR、Western-blot结果显示PHT处理组的整合素α5、β1亚基表达量高于空白对照组(P＜0.05)。结论 40 mg/L PHT能促进rBMMSCs、rPDLSCs黏附于牙骨质,该作用与整合素α5β1的表达上调密切相关。     

高迁移率族蛋白B1对人牙周膜干细胞增殖、分化影响的体外研究

目的:探讨高迁移率族蛋白B1(HMGB1)对于人牙周膜干细胞(hPDLSCs)增殖、分化的影响。方法:选取年轻患者拔除的健康第三磨牙,采用胶原酶消化组织块培养得到牙周膜细胞,并利用有限稀释法筛选获得纯化的hPDLSCs。分别以浓度为0、100、200ng/ml的HMGB1作用于hPDLSCs,于第3、5天采用MTT法检测细胞数目增殖情况;于第7天采用RT-PCR法检测细胞因子:增殖细胞核抗原(PCNA)、白细胞介素-1b(IL-1b)、肿瘤坏死因子α(TNFα)和抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)的基因表达。结果:HMGB1在100、200ng/ml浓度时,在第3天和第5天hPDLSCs的OD值有明显升高,在第7天PCNA、IL-1 b、TNFα和TRAP的基因表达明显升高。结论:HMGB1对hPDLSCs的增殖具有促进作用,同时使其破骨功能加强,与牙周炎的发展有关。     

正畸力调控牙周膜干细胞成骨分化的动物实验研究

目的 研究不同正畸力值对牙周膜干细胞(periodontal ligament stem cells,PDLSCs)分化的作用及机制.方法 分别用50 g、150 g力值建立大鼠牙齿移动模型,加力7d后分离培养PDLSCs,检测其生物学功能和分子信号通路.结果 相比对照组,加力7d后,50 g力值组大鼠第一磨牙近中移动,150 g力值组移动距离大于50 g力值组.分离培养不同组PDLSCs,50 g力值组PDLSCs成骨和成脂分化能力均高于对照组;150 g力值组PDLSCs成骨分化能力小于对照组,而成脂分化能力大于对照组.机制研究显示50 g力值组PDLSCs的active-β-catenin表达水平高于对照组,而150 g力值组PDLSCs的active-β-catenin表达水平低于对照组.结论 不同正畸力值对PDLSCs作用不同,50 g力值促进PDLSCs成骨和成脂分化,而150 g力值抑制其成骨分化.     

Effectiveness and Safety of Computer-controlled Periodontal Ligament Injection System in Endodontic Access to the Mandibular Posterior Teeth

Objective To evaluate the effectiveness and safety of a computer-controlled periodontal ligament （PDL） injection system to the local soft tissues as the primary technique in endodontic access to mandibular posterior teeth in patients with irreversible pulpitis. Methods A total of 162 Chinese patients who had been diagnosed with irreversible pulpitis in their mandibular posterior teeth without acute infection or inflammation in the periodontal tissues were enrolled in this clinical study. The patients were divided into 3 groups according to the position of the involved tooth： the premolar group （PM, z2=38）, first molar group （FM, n=66）, and second molar group （SM, n=58）. All the patients received computer-controlled PDL injection with 4% articaine and 1 ＇ 100 000 epinephrine. Immediately after the injection, endodontic access was performed, and the degree of pain during the treatment was evaluated by the patients using Visual Analogue Scale for pain. The success rates were compared among the 3 groups. The responses of local soft tissues were evaluated 3-8 days and 3 weeks after the procedure. Results The overall success rate was 76.5%. There was a significant difference in success rates among the PM, FM, and SM groups （92.1%, 53.0%, 93.1%, respectively; 2 X =34.3, P〈0.01）. Both the PM and SM groups showed higher success rates than that of the FM group （v=l, f=16.73, P〈0.01, v=l, Z = 4.5, X2 2 P〈0.01）. No irreversible adverse effects on the periodontal soft tissues at the injection sites were observed in the follow-up visits in any of the groups. Conclusion The computer-controlled PDL injection system demonstrates both satisfactory anesthetic effects and safety in local soft tissues as primary anesthetic technique in endodontic access to the mandibular posterior teeth in patients with irreversible pulpitis.     

雌激素对牙周膜细胞生物学性质的影响

目的：明确雌激素对体外牙周膜成纤维细胞迁移、增殖和碱性磷酸酶的影响，以探讨雌激素对牙周组织改建的影响。方法：SD大鼠来源的牙周膜成纤维细胞经传代培养至第四代，建立体外创伤模型，分别在普通培养基和含雌激素的培养基中培养，观察测量细胞迁移情况，运用MTT、酶联检测仪测定细胞的增殖速度，对细胞的ALP进行提取和测定。结果：MTT结果硅示加入雌激素对该细胞的增殖无明显影响；在含雌激素的培养基中成纤维细胞的迁移速度加快；同时牙周膜成纤维细胞的ALP表达娃著提高。结论：雌激素能明显促进牙周膜成纤维细胞的迁移，促进其分化。