免疫球蛋白降解酶IdeS在大肠杆菌中的表达、纯化及功能鉴定

病原链球菌为逃避宿主的免疫反应,分泌一种可特异地裂解免疫球蛋白G的降解酶(immunoglobulin G-degrading enzyme of Streptococcus pyogenes, IdeS)。IdeS既可作为工具酶用于IgG的指纹分析,又可用于治疗与自身免疫反应相关的疾病。本研究基于质粒pCold构建了两种重组IdeS的表达载体,并在大肠杆菌Shuffle T7中进行异源表达,经亲和色谱纯化后检测其蛋白活性。结果表明N-端含有His6-标签的重组IdeS产量为4 mg·L^-1,其与抗体IgG1以1∶200 (m/m)在37℃反应30 min即可完全酶解。而N-端含有His6-标签且C-端含有硅胶亲和标签(SiBP)的重组IdeS产量为1.5 mg·L^-1,其与抗体IgG1以1∶20 (m/m)在37℃反应30 min才可反应完全。C-端融合肽对于IdeS产量与活性都有较大的影响,使其活性降低,不利于后续应用于药物研发。上述结果表明,本系统所表达的N-端含有His6-标签的IdeS重组蛋白具有较高的活性,完全能满足抗体类药物研发...     

蛋白降解靶向嵌合体(PROTAC)的研究进展

蛋白降解靶向嵌合体(proteolytic targeting chimera,PROTAC)是一类能够通过诱导靶蛋白的多聚泛素化而导致靶蛋白降解的化合物。PROTAC作为双功能分子,具有非常广泛的应用与发展空间。PROTAC是药物研发领域的一个新兴方向,通过降解靶蛋白来调控体内蛋白含量的策略极大地拓展了潜在药物靶标的范围。本文主要简介PROTAC的结构、作用机制、最新研究成果、技术优势以及目前存在的问题。     

我国部分生活垃圾填埋场厌氧降解参数预测与探讨

依据我国住房和城乡建设部提出的生活垃圾分类方法,给出了生活垃圾填埋场厌氧降解参数预设值,包括厨余类、纸类、织物类和木竹类的甲烷产生潜力、降解速率和碳贮藏因子。并据此预测了我国不同城市生活垃圾填埋场的厌氧降解参数。依据预测结果的层次聚类分析,提出了我国不同区域部分城市生活垃圾填埋场的填埋气体收集、利用和处理设施的管理建议。     

添加氧化铝纤维和氧化铈对Y-TZP力学性能的影响

目的:探究氧化铝纤维和氧化铈对钇稳定四方相氧化锆陶瓷烧结体断裂韧性、抗弯强度和维氏硬度等力学性能的影响。方法:通过在钇稳定四方相氧化锆粉中添加不同质量分数的氧化铝纤维和氧化铈,采用二次烧结热处理方式烧结成型,制成标准规格试件,检测并比较对照组与试验组试件的断裂韧性和抗弯强度,对实验所得数据进行统计学分析。结果:氧化铝纤维和氧化铈均有改善氧化锆烧结体力学性能的作用,氧化铝纤维添加最佳质量分数为2.5%,氧化铈添加最佳质量分数为5%,氧化铝纤维与氧化铈具有协同增韧的作用。     

黑素小体在不同肤色皮肤类型角质形成细胞内的分布:黑素小体簇不是具有降解功能的细胞器

黑素小体是人体皮肤黑素细胞、视网膜色素上皮细胞和脉络膜黑素细胞内合成黑素的细胞器:虽然与溶酶体一样都有溶酶体膜蛋白和水解酶,但黑素小体是起源于胞吞途径的一种独立的细胞器类型,且不能通过胞吞示踪剂检测到,另外其pH值较高,因此被归类为溶酶体相关细胞器:在表皮内,将黑素小体转运至邻近的角质形成细胞至少存在3种机制:细胞吞噬作用、胞吐/胞吞作用,或经丝状伪足转移。     

基质降解酶u-PA 、PAI-1与人口腔鳞状细胞癌细胞侵袭转移的相关性研究

目的 探讨体外培养细胞系TSCCa和GNM细胞的u-PA及PAI-1活性和表达与口腔鳞状细胞癌侵袭转移的关系。方法 采用酶联免疫反应法和免疫组化法测定了两细胞系中u-PA及PAI-1的活性和表达，同时对GNM细胞在BALB／CA裸鼠皮下种植瘤组织的u-PA及PAI-l抗原表达进行了测定。结果 两细胞系均能产生u-PA及PAI-l，但u-PA在两细胞系中的表达不同，在GNM细胞u-PA为高表达，在TSCCa细胞中u-PA为低表达，PAI-1在两细胞系中均为高表达；种植瘤组织中u-PA呈阳性～强阳性表达，PAI-1为阴性表达。结论 u-PA可能是两细胞系高低不同的转移能力的重要机制之一。     

低温液相烧结纳米氧化锆增韧口腔全瓷材料的研究

目的探讨复合添加剂对烧结纳米氧化锆增韧氧化铝陶瓷烧结温度和显微结构的影响。方法将粉、液按一定比例混合,采用湿法球磨制备混合均匀的浆液,将浆液浇注在石膏模具中,置于离心机中高速离心成型。坯体干燥后,在1450℃下常压空气中烧结8h。试样打磨抛光后,测试其物理性能。扫描电镜下观察其显微结构。结果未加复合添加剂的对照组不能烧结;添加组的烧结体能够致密烧结。当复合添加剂为7%时,烧结体的三点抗弯曲强度为(433±19)MPa,断裂韧性达(7.50±0.56)MPa·m1/2。结论复合添加剂在烧结过程中产生液相,可降低烧结温度,诱导生成长柱状氧化铝晶型。     

纳米氧化锆的含量对纳米氧化锆增韧氧化铝陶瓷力学性能和显微结构的影响

目的 探讨纳米氧化锆的含量对纳米氧化锆增韧氧化铝陶瓷力学性能和显微结构的影响。方法 将纳米氧化锆、氧化铝、复合添加剂等粉料与一定比例的醇-水混合后，球磨制备浆液，采用离心渗透注浆法成坯，在1 450 ℃下烧结8 h。烧结体打磨抛光后，测试其物理性能和力学性能。通过扫描电镜观察烧结体表面和断面的微观结构。结果 不同实验组的三点抗弯曲强度、维氏硬度的差异均有统计学意义（P＜0.01）；20%氧化锆组的断裂韧性与另外两组差异有统计学意义（P＜0.05），10%氧化锆组和30%氧化锆组间的断裂韧性差异没有统计学意义（P＜0.05）。 当纳米氧化锆含量为20%时，其力学性能显著高于10%及30%组，三点抗弯曲强度为（433±19） MPa，断裂韧性达（7.50±0.56） MPa·m1/2 。显微结构观察到内晶-晶界复合型结构、晶间及穿晶断裂。结论 内晶-晶界复合型结构具有强烈的增韧效果，可提高陶瓷的强度和韧性。纳米氧化锆含量为20%时，具有较好的增韧效果，适合口腔修复材料。     

兔牙本质磷酸蛋白稳定性分析

目的：探讨兔牙本质磷酸蛋白（Dentin phosphoproteins,DPP）的稳定性机制。方法：通过钙离子沉淀法从兔切牙牙本质非胶原蛋白（Dentin non-collagenous proteins,NCP）中提取DPP，并应用凝胶过滤及离子交换层析技术纯化磷酸蛋白，同时观察多种蛋白酶抑制剂对DPP降解的抑制作用。结果：钙离子能够启动DPP的降解系统，而该作用可被巯基蛋白酶抑制剂N－顺丁烯二酰亚胺（NEM）抑制，从而阻止DPP分解。结论：提示NCPs中可能存在钙离子依赖性蛋白水解酶体系。