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1.
目的: 观察补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在成骨- 破骨细胞共同培养体系中对大鼠破骨细胞(OC) 骨吸收功能的影响。方法: 取1 d 龄SD 大鼠的胎鼠颅骨与四肢骨分别分离、培养成骨细胞和破骨细胞, 建立细胞上清相通但细胞间不相互混杂的平面式成骨- 破骨细胞共育体系,实验分为不同浓度(低、中、高)的补肾方含药血清组和对照组进行比较,用重氮盐法检测抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP) 和光镜观察骨陷窝数。结果: 25%的补肾方含药血清组在48 h、72 h、96 h 成骨- 破骨细胞共育体系中OC 分泌TRAP 的活性明显降低于对照组;25%的补肾方含药血清组在48 h、72 h、120 h所形成骨吸收陷窝的数目明显低于对照组(P< 0.01)。结论: 补肾方抗骨松丹杞颗粒含药血清在共育体系中能够抑制OC 活性。  相似文献
2.
生物活性玻璃对鼠成骨细胞体外增殖的形态学研究   总被引:6,自引:0,他引:6  
通过在培养液内加入生物活性玻璃,观察生物活性玻璃对成骨细胞增殖的影响。将生物活性玻璃晶体溶于DMEM培养液内,测定其中的Na、Ca、P、Si 4种离子的浓度。以对照组培养液和实验组培养液分别培养鼠成骨细胞,观察成骨细胞生长形态,测定成骨细胞生长指数并绘制生长曲线,动态观察细胞内甲肷的形态,观察细胞超微结构。结果表明:Si离子的浓度在实验培养液内是对照培养液的26.12%(P<0.01),Ca是88.03%(P<0.01),P是73.23%(P<0.01),Na的浓度无差异(P>0.05)。大体细胞形态:开始2天内实验组细胞胞体较对照组大,随时间延长,实验组成骨细胞比对照组密度高。动态观察细胞内甲肷:实验组较对照组成骨细胞增殖活跃,其定量指标即细胞生长指数在培养第2天,即出现明显的差异(P<0.01),随时间延长差异越明显,两条生长曲线呈分离趋势。细胞超微结构:实验组成骨细胞内比对照组有较多的粗面内质网、线粒体和核糖体。说明生物活性玻璃可促进成骨细胞增殖。  相似文献
3.
目的:通过在体外条件下对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)实施干预诱导,探寻骨碎补总黄酮对BMSCs的成骨诱导分化能力及不同浓度下可能存在的剂量效应关系。方法: 应用全骨髓贴壁培养法对BMSCs进行分离、纯化,并通过流式细胞术对BMSCs进行鉴定,再通过设立含不同浓度骨碎补总黄酮条件培养基,分组对BMSCs进行干预,观察各组7 d和14 d碱性磷酸酶(ALP)的表达,同时通过ALP染色和矿化结节染色进行定性分析。 结果: 用全骨髓贴壁法成功分离获得了均一稳定的BMSCs,各浓度骨碎补总黄酮作用BMSCs 7 d和14 d后,诱导不同程度的ALP表达,经10-5 g/L骨碎补总黄酮诱导,ALP染色及矿化结节染色均阳性。结论: 低浓度骨碎补总黄酮能促进BMSCs向成骨细胞分化,其ALP生成量随着骨碎补总黄酮浓度的降低大致呈增加趋势。  相似文献
4.
深低温冻存时限对成骨细胞生物学特性影响的实验研究   总被引:3,自引:0,他引:3  
探讨深低温冻存不同时限后复苏对成骨细胞生物学特性的影响。取新生SD大鼠颅骨,胶原酶消化法培养成骨细胞。采用活细胞数、成骨细胞增殖功能、碱性磷酸酶(ALP)活性的测定等对深低温冻存1、3、6个月后复苏的成骨细胞和新鲜培养的细胞进行了比较。发现各组成骨细胞在细胞增殖功能、碱性磷酸酶活性方面均无显著性差异(P>0.05)。深低温冻存6个月后复苏组成骨细胞活细胞数与冻存1、3月后复苏组及新鲜培养的细胞组相比,活细胞数降低,有显著性差异(P<0.05),深低温冻存1、3个月后复苏组的活细胞数与新鲜培养的细胞组相比无显著性差异(P>0.05)。实验结果表明:较长时间深低温冻存能减少复苏后成骨细胞的活细胞数。但经深低温冻存后复苏的细胞仍保持成骨细胞原有的生物学特性。  相似文献
5.
目的以人成骨细胞(MG-63细胞)复合纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸[nano-hydroxyapatite/collagen/poly(L-lactic)acid,nHAC/PLA]支架材料进行体外培养,观察其早期附着生长情况。方法将MG-63细胞在nHAC/PLA支架材料上培养,通过倒置显微镜观察、HE染色、ALP染色、细胞增殖指数测定等方法对细胞在nHAC/PLA支架材料上的早期附着情况进行研究。结果细胞在nHAC/PLA上生长良好;ALP染色阳性度高,细胞增殖指数比空白对照组有显著提高。结论nHAC/PLA支架有利于MG-63细胞的早期黏附、生长,可以用作骨组织工程的支架材料。  相似文献
6.
目的: 探讨钙离子(Ca2+)超载在高糖诱导成骨细胞株MC3T3-E1凋亡中的作用以及活性氧簇(reactive oxygen species, ROS)的影响。方法: 培养小鼠颅骨源性成骨细胞株MC3T3-E1,给予高浓度D-葡萄糖诱导细胞凋亡。采用MTT法检测不同浓度D-葡萄糖处理24和48 h后MC3T3-E1细胞的增殖情况; D-葡萄糖(35 mmol/L)处理24 h后,Annexin V-FITC/PI检测细胞凋亡;Fura-2/AM荧光探针检测细胞内Ca2+浓度; DCFH-DA荧光探针检测ROS的生成。结果: MC3T3-E1高糖处理后,细胞增殖明显抑制呈剂量效应关系,早期凋亡率和总死亡率分别增加至(24.16±3.53)%和(63.74±4.32)%。高糖处理后细胞内ROS水平明显增加,抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸可以在降低ROS水平的同时抑制高糖所引起的成骨细胞凋亡。细胞内游离Ca2+水平也明显增加,并且通过膜通透性Ca2+螯合剂BAPTA-AM处理后,细胞内Ca2+浓度明显降低,同时成骨细胞凋亡率也明显降低。加入镧离子(La3+)离子抑制储量操纵性钙通道(store-operated Ca2+ channels,SOCC)可以降低细胞内Ca2+浓度,减低高糖所引起的成骨细胞凋亡。在高糖诱导成骨细胞凋亡中,细胞内ROS和Ca2+的增加呈相互促进的关系。结论: 高糖可以通过增加细胞内ROS水平,引起钙离子通过SOCC通道释放,造成细胞内Ca2+超载,从而诱导成骨细胞凋亡。  相似文献
7.
目的: 探讨转化生长因子β1(TGF-β1)在雷奈酸锶(Sr)促进大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)向成骨细胞分化 中的作用。方法: 应用试剂盒测定碱性磷酸酶(ALP)活性及钙结节数量;Western blotting法测定TGF-β1的表达水平。结果: 应用0.1、1、3、5、及7 mmol/L Sr分别处理rBMSCs 7 d,均能明显增加ALP活性,其中3 mmol/L Sr增加ALP活性的作用最大(P<0.01)。3 mmol/L Sr作用rBMSCs 21 d可明显增加钙结节数量。应用0.1~5 mmol/L Sr分别处理rBMSCs 7 d,可显著地上调TGF-β1的表达,其中浓度为1 mmol/L时,TGF-β1表达达到高峰。1~7 d,1 mmol/L Sr呈时间依赖性地促进TGF-β1表达。1 mmol/L Sr处理rBMSCs前2 h,给予TGF-β1抑制剂SB431542预处理,不仅可明显地抑制Sr对TGF-β1表达的上调作用,而且显著地减弱Sr对ALP活性及钙结节形成的促进作用。结论: Sr可通过上调TGF-β1表达促进rBMSCs向成骨细胞分化。  相似文献
8.
目的观察体外培养成骨细胞对自体骨髓间充质干细胞(BMSC)增殖和定向成骨分化的影响.探讨此诱导方法作为骨组织工程种子细胞来源方法的可行性。方法应用密度梯度离心联合贴壁筛选法从兔股骨骨髓中分离、纯化BMSC.取第3代BMSC常规培养设为空白对照组,利用含有钙化诱导剂的DMEM培养基诱导培养第3代BMSC.设为钙化对照组。取第3代成骨细胞,1:1的比例和第3代BMSC共同培养.设为实验组。碱性磷酸酶(ALP)染色及钙结节染色鉴定诱导结果.ALP定量测定观察共同培养中成骨细胞对BMSC诱导影响。总蛋白定量测定观测诱导成骨细胞的分化活性.结果成骨细胞与BMSC共同培养24h后.在倒置光学显微镜下可见两种细胞形态混杂生长.共同培养5d后.细胞形态趋于一致,多呈长梭形。诱导培养5d后.实验组与钙化对照组ALP染色均为阳性。诱导培养21d.两组钙结节茜素红染色均呈阳性.而BMSC空白对照组并未见钙结节形成。ALP定量测定,实验组于3、5、7、9d均低于钙化对照组,且差异均具有统计学意义。实验组与空白对照组ALP定量测定,在4个时间段差异也均具有统计学意义。总蛋白定量测定显示实验组于第3天.A值高于钙化对照组,差异具有显著统计学意义(P〈0.01),而第5天、第7天、第9天时却低于钙化对照组.差异具有显著统计学意义(P〈0.01)。实验组于各时间段均高于空白对照组.差异亦具有统计学意义。结论成骨细胞与BMSC共同培养应用于BMSC的成骨诱导.从诱导效率和诱导后成骨细胞的分化活性方面.都能证实该共同培养方法的有效性。但与钙化诱导方法相比.共同培养的诱导效果差于钙化诱导方法。  相似文献
9.
成骨细胞的数量对体外钙化结节形成的影响   总被引:2,自引:0,他引:2  
随着成骨细胞体外培养技术的发展,其体外培养已成为骨组织工程及骨替代材料研究的一个重要手段.成骨细胞的体外钙化是体外培养成骨细胞的一个重要生物学特征,对成骨细胞的鉴定、与材料的相容性及其材料的生物学效应的研究尤为重要.成骨细胞的接种浓度对其体外钙化有一定的影响,国内外文献未见关于这方面的报道.成骨细胞体外钙化形成条件的研究可望为骨替代材料的研究提供参考.  相似文献
10.
目的研究缺氧对体外培养成骨细胞血管内皮生长因子(VEGF)和骨形态发生蛋白2(BMP-2)表达的影响及意义。方法采用酶消化法获取人成骨细胞并进行原代培养,倒置显微镜下观察成骨细胞的生长形态;采用Gomori改良钙钴法和免疫组织化学SABC法分别检测原代培养成骨细胞碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)的表达,进行原代培养成骨细胞鉴定。细胞传至第2代时,按继续培养条件的不同将细胞分为缺氧组(氧分压〈4.8kPa、氧容积比〈5%)和常氧组,在传代培养24、48、72h时分别收集2组细胞,采用免疫组织化学SABC法检测VEGF和BMP-2的表达,应用图像分析系统进行半定量检测,结果以平均灰度值表示,平均灰度值低示表达水平高。结果原代培养成骨细胞可表达ALP和OCN,初步确定经体外培养获得了具有生物活性的成骨细胞。在培养24、48、72h时,缺氧组成骨细胞VEGF表达水平均明显高于常氧组(平均灰度值分别为123.53±7.38 vs 141.21±6.03、116.45±6.34 vs 138.37±5.04、108.11±5.37 vs 136.65±6.54,均P〈0.01),且缺氧组成骨细胞VEGF表达水平随缺氧时间延长而逐渐升高。缺氧组成骨细胞BMP-2表达水平在培养24h时明显高于常氧组(平均灰度值为143.28±2.82 vs 146.91±2.06,P〈0.01),而在培养48、72h时与常氧组比较,差异均无统计学意义。结论缺氧可诱导成骨细胞VEGF的表达上调;而缺氧延长则不利于成骨细胞BMP-2的表达。缺氧对VEGF和BMP的早期表达调控可能与骨修复的启动相关。  相似文献
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