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构建了一种DC靶向适配体修饰的铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa,PA)DNA疫苗递送系统。采用乙醇注入法制备阳离子脂质体,静电吸附法制备载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Lip-pOprF-VP22),探讨不同DOTAP/pDNA质量比的Lip-pOprF-VP22对pVAX1-OprF-VP22的包封效果、对DC2.4的细胞毒性及转染率,筛选最佳质量比的Lip-pOprF-VP22测定其粒径及Zeta电位;后插法制备DC靶向适配体修饰的载pVAX1-OprF-VP22的阳离子脂质体(Apt-Lip-pOprF-VP22),检测其转染DC2.4后OprF蛋白的表达量及对小鼠骨髓来源树突状细胞(bone marrow-derived dendritic cells,BMDCs)成熟的影响。结果表明,Lip-pOprF-VP22随着DOTAP/pDNA质量比增加包封率逐渐增加,当质量比为5∶1时即能很好的包封pVAX1-OprF-VP22;当Lip-pOprF-VP22作用于DC2.4 24 h或48 h后,不同质量比的Lip-pOprF-VP22对DC2.4的存活率均在80%以上;当DOTAP/pDNA质量比由2∶1增加到10∶1,转染率表现为先增加、后降低的趋势,其中DOTAP/pDNA质量比为4∶1、5∶1时转染率相对较高;当DOTAP/pDNA质量比为5∶1时,Lip-pOprF-VP22粒径为(171.67±1.27)nm,Zeta电位为(11.30±0.57)mV;Apt-Lip-pOprF-VP22转染DC2.4后可表达更多OprF蛋白且可明显促进BMDCs的成熟。 相似文献
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构建一种pH响应性细胞穿膜肽（cell-penetrating peptides,CPPs）修饰的载抑癌基因第10号染色体同源缺失性磷酸酯酶-张力蛋白（PTEN）质粒DNA的纳米粒PTEN/PLGA-（HE）10-MAP,探讨其基因递送和体外靶向抗肿瘤作用。采用双乳化-溶剂挥发法制备载PTEN质粒DNA的聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）纳米粒PTEN/PLGA;利用酰胺缩合反应将pH响应性组氨酸-谷氨酸（HE）重复寡肽与模型两亲性多肽（MAP）的重组体（HE）10-MAP偶联至PLGA纳米粒表面,得到纳米粒PTEN/PLGA-（HE）10-MAP。以粒径、Zeta电位以及包封率与载药量为指标对其进行表征分析;通过考察其细胞毒性、细胞摄取,以及靶向转染真核表达质粒和抗肿瘤细胞增殖的能力,分析其作为目的基因靶向递送系统的可行性。结果显示,制备的纳米粒粒径为（266.5 ± 2.86） nm,包封率为（80.6 ± 6.11）%,在pH 7.4、7.0和6.5条件下Zeta电位分别为-（6.7 ± 0.26） mV、 +（0.7 ± 0.22） mV和+（37.5 ± 0.85） mV;未载质粒DNA的空载体纳米粒PLGA-（HE）10-MAP在肿瘤和正常细胞中的细胞毒性试验显示细胞存活率均在80%以上,制备的纳米粒可以被细胞摄取表达,且具有pH靶向抑制肿瘤细胞增殖的作用,在肿瘤的基因治疗中具有一定的应用前景。 相似文献
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构建载铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa,PA） DNA疫苗的PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶系统,评价该系统的体内免疫效力。通过简单物理混合法制备PA DNA疫苗的PLGA-PEG-PLGA温敏水凝胶,测量其胶凝温度;评价其体外毒性、体外累计释放率;通过凝胶体积变化评价水凝胶的体内降解;将小鼠分为对照组（PBS）、水凝胶组（Hydrogel）、in vivo-jetPEI/质粒DNA组（in vivo-jetPEI/pDNA）、水凝胶+in vivo-jetPEI/质粒DNA组（Gel+in vivo-jetPEI/pDNA）,免疫3次,每次间隔10 d,末次免疫2周后处死小鼠,检测血清特异性IgG抗体、脾淋巴细胞增殖情况及细胞上清液中IFN-γ水平。结果显示,PLGA-PEG-PLGA水凝胶具有温敏性,相变温度为（32 ± 0.5） ℃;体外对DC 2.4细胞无明显毒性;体外释放7 d时约释放80%的质粒DNA;PLGA-PEG-PLGA在体内具有可降解性,大约15 d几乎完全降解;体内免疫实验表明in vivo-jetPEI/pDNA及Gel+in vivo-jetPEI/pDNA组小鼠脾淋巴细胞明显增殖、特异性IgG抗体及IFN-γ水平升高,且水凝胶可增强DNA疫苗诱导的免疫反应水平。结果表明,载PA DNA疫苗的温敏水凝胶系统是研发PA疫苗有前景的一种新策略。 相似文献
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