泛素特异性蛋白酶4对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的 探讨泛素特异性蛋白酶4(USP4)对增生性瘢痕(HS)成纤维细胞增殖的影响.方法 体外培养人HS成纤维细胞(HSFB),并取第4代细胞用于试验.利用Vialinin A(USP4抑制剂)干预HS成纤维细胞,Western blot检测干预细胞中不同时间段(0、12、24、48 h)USP4、TβRI及Smad7蛋白的表达,四甲基偶氮唑蓝比色(MTT)法检测Vialinin A对HS成纤维细胞增殖的影响,分为试验组和对照组(不作干预).结果 Vialinin A作用后,随着时间推移,HSFB中的USP4蛋白表达逐渐减低,TβRI的蛋白也逐渐减低,在作用12 h后明显降低(P<0.05);Smad7的蛋白表达则逐渐升高(P<0.05).Vialinin A同一浓度作用后,随着时间推移,HSFB增殖活性逐渐受到抑制,试验组与对照组同一时间段比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 USP4可能通过调控TGF-β/Smad信号通路影响瘢痕细胞增殖,抑制其表达可使HS成纤维细胞增殖减慢.     

Effects of IL-17 on expression of GRO-α and IL-8 in fibroblasts from nasal polyps

Recent studies indicated that interleukin（IL）-17, growth-related oncogene（GRO）-α and IL-8 play an important role in the pathogenesis of nasal polyps. However, the effects of the increased amount of IL-17 and the production of GRO-α and IL-8 in human nasal polyp fibroblasts are not completely understood. This study aimed to determine the effects of the increased IL-17 on the changes of GRO-α and IL-8 expression in human nasal polyp fibroblasts and further investigate the mechanism of neutrophil infiltration in nasal polyps. Nasal polyp fibroblasts were isolated from six cases of human nasal polyps, and the cells were stimulated with five different concentrations of IL-17. Real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction（RT-PCR） was used to detect the mRNA expression of GRO-α and IL-8. The mRNA of GRO-α and IL-8 was expressed in unstimulated controls and remarkably increased by stimulation with IL-17. Moreover, the levels of GRO-α and IL-8 produced by fibroblasts were increased gradually with the increases in IL-17 concentrations. The present study showed that nasal fibroblasts can produce GRO-α and IL-8, and their production is remarkably enhanced by IL-17 stimulation, thereby clarifying the mechanism of the IL-17 mediated neutrophil infiltration in nasal polyps. These findings might provide a rationale for using IL-17 inhibitors as a treatment for nasal inflammatory diseases such as nasal polyps.     

绞股蓝皂苷对人衰老皮肤成纤维细胞抗氧化酶活性的影响简

目的 在细胞水平研究绞股蓝皂苷对抗氧化酶活性的影响.方法 原代培养并建立人衰老皮肤成纤维细胞系,0、5、10、15 mg/L绞股蓝皂苷处理细胞,24、72、96 h后,四甲基偶氮唑盐（MTr）比色法检测细胞增殖;72 h后检测超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）活性.结果 药物作用24、72 h后,10、15 mg/L绞股蓝皂苷可以促进人衰老成纤维细胞增殖,增殖效应呈时间和浓度依赖（P＜0.05）.与0 mg/L比较,10、15 mg/L绞股蓝皂苷可以增强细胞SOD、CAT、GSH-Px活性（P＜0.05）,且与10 mg/L绞股蓝皂苷比较,15 mg/L绞股蓝皂苷能够显著提高SOD和GSH-Px活性（P＜0.05）.结论 绞股蓝皂苷可以通过提高SOD、CAT、GSH-Px活性,削弱氧化应激反应对细胞的损伤,使细胞增殖能力增强,延缓细胞衰老.     

优化贴壁法人皮肤成纤维细胞的原代培养

目的:优化贴壁法原代培养人皮肤成纤维细胞的条件,建立稳定?经济?高效可行的人皮肤成纤维细胞培养方法?方法:采用包皮环切术后皮肤组织,剪成均匀组织块后贴壁,皮肤边缘长出薄层致密细胞团后胰酶消化?传代,并对所培养的细胞进行形态学观察及细胞免疫荧光鉴定?此方法与酶消化法相对照?结果:优化贴壁法成功率100%,取得组织后2 d沿皮肤边缘均开始生长高密度类圆形细胞层,在1周内可获得高质量?高数量的细胞,传代贴壁后经镜下形态观察及细胞免疫荧光染色确定为皮肤成纤维细胞?结论:较之酶消化法,优化贴壁法细胞存活率高,活性及纯度好?该方法可稳定?经济地获得足够数量的细胞?     

大鼠肺动脉和主动脉成纤维细胞的原代培养及生物学行为研究

目的 建立大鼠肺动脉和主动脉外膜成纤维细胞的体外分离、培养及鉴定的方法,并对其细胞形态和成纤维细胞转化成肌成纤维细胞的特征进行观察.方法 通过精分肺动脉和主动脉,剥取外膜,用10％的胎牛血清低糖DMEM培养基诱导细胞爬出生长.倒置显微镜下观察成纤维细胞形态,并对细胞进行免疫荧光鉴定.通过对α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的观察确定传代细胞是否转化为肌成纤维细胞.结果 成纤维细胞能够迅速从剥取的外膜中爬出生长,波形蛋白细胞免疫荧光染色为阳性.主动脉成纤维细胞和肺动脉成纤维细胞形态差别大,前者为铺路石状,后者呈细长梭形.2种成纤维细胞经传代皆能转化为肌成纤维细胞,免疫荧光染色可见α-SMA大量表达,前者包围着细胞核呈条索状非定向分布,后者平行于细胞长轴呈细丝状表达.结论 该方法所获得的成纤维细胞纯度高,可在体外稳定培养.本研究首次发现了肺动脉和主动脉成纤维细胞形态学及生物行为上的差别,为细胞水平研究主动脉和肺动脉血管重塑,胶原沉积等相同或不同的病理机制提供了充足可靠的靶细胞模型.     

胆汁酸对人肝内胆管瘢痕成纤维细胞生长的影响

目的：探讨胆汁酸对人肝内胆管瘢痕成纤维细胞生长的影响。方法原代培养人肝内胆管瘢痕组织成纤维细胞。倒置显微镜下观察细胞生长的形态变化，采用噻唑蓝（ MTT ）法、细胞计数细胞和划痕实验检测胆汁酸对瘢痕成纤维细胞生长的影响。结果（1）成功原代培养人肝内胆管瘢痕成纤维细胞。（2） MTT显示在72 h，浓度0.5、1.0、2.5、5μmol／L的胆酸（CA）和脱氧胆酸（DCA）促进瘢痕成纤维细胞活力（P＜0.05），其他胆汁酸对瘢痕成纤维细胞的生长无明显影响（P＞0.05）；浓度在10、20、50、100、250、500μmol／L，游离胆汁酸和结合胆汁酸抑制瘢痕成纤维细胞的活力（P＜0.05）。同时，单独使用CA（2．5μmol／L）或DCA（5μmol／L）或联合使用CA （2．5μmol／L）和DCA（5μmol／L），与未添加胆汁酸比较，细胞数量、活力明显增加，愈合距离明显缩小（P＜0.05）；联合使用与单独使用比较，细胞数量、活力和愈合距离差异无统计学意义（P＞0.05）。结论游离胆汁酸（ CA、DCA）在肝内胆管瘢痕的形成过程中可能扮演重要角色。     

肥大细胞对特发性眼眶炎性假瘤纤维化的作用研究

目的：探讨肥大细胞在特发性眼眶炎性假瘤纤维化中的作用。方法：将分离纯化的大鼠骨髓肥大细胞和同源大鼠眼眶成纤维细胞，分别进行单独和共育培养。观察肥大细胞和成纤维细胞共育对成纤维细胞在形态和数量上的影响。结果：肥大细胞和成纤维细胞共育能够显著增强成纤维细胞的增殖活性，共育组中单位面积内的成纤维细胞数较对照组显著增加，差异具有统计学意义P﹤0.01）。结论：肥大细胞对眼眶成纤维细胞的增殖具有显著的促进作用，提示其在特发性眼眶炎性假瘤纤维化过程中发挥着重要作用。     

转化生长因子-β1噬菌体模拟肽促进成纤维细胞增殖的效果

目的从噬菌体随机12肽库中筛选获得转化生长因子β1(TGF-β1)噬菌体模拟肽,评估其促进人正常皮肤成纤维细胞增殖的效果。方法以人TGF-β1单克隆抗体为靶,生物淘选噬菌体模拟肽。选择其中一组与TGF-β1基因序列相似度最高的噬菌体模拟肽,设定4组,阴性对照组、噬菌体M13对照组、TGF-β1对照组和噬菌体模拟肽组。噻唑蓝(MTT)比色法定量测定活细胞数量以检测细胞的增殖。免疫荧光方法检测噬菌体模拟肽与成纤维细胞的亲和力。实时定量PCR分析方法检测成纤维细胞I型胶原蛋白(COL1)、Ⅲ型胶原蛋白(COL3)和结缔组织生长因子(CTGF)的mRNA表达水平。结果共获得10种噬菌体模拟肽,选择与TGF-β1基因序列相似度最高的第一组噬菌体模拟肽进行实验。MTT结果显示,噬菌体模拟肽组能够促进成纤维细胞增殖(P<0.05)。免疫荧光结果显示,噬菌体上的模拟肽,而非噬菌体本身,能够与成纤维细胞结合;实时定量PCR的结果显示,48 h噬菌体模拟肽组COL1和COL3 mRNA的表达水平较阴性对照组和噬菌体M13对照组均明显增高(P<0.05),而CTGF的mRNA表达水平较阴性对照组和噬菌体M13对照组2 d时明显增高(P<0.05),3 d时表达有所降低(P<0.05)。结论噬菌体模拟肽可能是通过调节CTGF的表达,调节成纤维细胞的增殖。     

断层皮片成纤维细胞原代培养法

目的　在人成纤维细胞的生物学特性观察研究中 ,进行成纤维细胞的原代培养 ,必须获得足够量的成纤维细胞。方法　我们采用整形外科断层取皮技术 ,使用细胞刮刀 ,可相对简单获取有活力的成纤维细胞 ,并应用台盼蓝细胞活力染色排除法进行检测。结果　使用该方法可简单、经济获取足够量的成纤维细胞 ,使得短期内即可获得大量的传代细胞。1× 2cm2 的断层皮片可达到的细胞的数量级 10 6的左右。结论　断层皮片成纤维细胞培养方法 ,结合整形外科的技术 ,是一种新的、经济和快速原代成纤维细胞培养方法 ,较胰酶消化法和组织块贴壁法有明显的优越性 ,对于进行成纤维细胞移植 ,更值得加以推广和应用。