基于药动学与药效学相关联的养阴通脑颗粒主要有效部位正交配伍研究

目的探讨养阴通脑颗粒主要有效部位(总生物碱、总黄酮、总皂苷、总酚酸)配伍后在脑缺血再灌注模型大鼠体内药物浓度及其药动学与药效学变化。方法采用正交试验法组成上述主要有效部位用量配比不同的9个组方,供脑缺血再灌注模型大鼠ig给药,高效液相色谱-二极管阵列检测器(HPLC-DAD)测定不同时间点血浆中的葛根素、阿魏酸和川芎嗪血浆药物浓度。DAS 3.2.6软件以非房室模型拟合药动学参数,并运用总量统计矩法和综合评分法对整体药动学特征进行评价。同时采用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定大鼠血浆中超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的含量。最后进行药动学-药效学(PK-PD)模型研究,获得各药物浓度与药效之间的定量方程。结果葛根素、阿魏酸和川芎嗪在模型大鼠体内的药动学特征有所差异。总量统计矩和综合评分研究表明不同配伍对总量零阶矩、总量平均滞留时间、综合评分等参数影响不一。主要有效部位正交配伍给药后,一定程度上会抑制脑缺血再灌注大鼠血浆中SOD和CAT的降低。各PK-PD模型均采用Sigmoid-Emax模型,拟合结果与实测数据之间相关性良好,R值均大于0.85。结论养阴通脑颗粒主要有效部位配伍对模型大鼠体内的药动学行为和抗氧化指标具有一定影响;中药复方多成分药物代谢动力学可采用总量统计矩和综合评分法进行研究;PK-PD结合模型可用于中药复方多成分药动学与药效学之间相关性的评价与预测。     

葛根素通过NF-кB信号通路调节破骨细胞的分化

目的探索葛根素抑制破骨细胞分化的实验研究。方法 RAW264.7细胞经sRANKL+M-CSF诱导7 d后向破骨细胞分化;WST-1检测不同浓度的葛根素对破骨细胞增殖活性的影响;TRAP染色检测葛根素对破骨细胞分化的影响;Osteoassay surface Mltiple well plate检测破骨细胞吸收活性;免疫荧光检测葛根素对NF-кB通路核心蛋白p65细胞核内转移的影响;Western blot检测葛根素对p65表达的影响。结果葛根素(10~(-8)mol/L)作用3 h后破骨细胞的增殖活性明显抑制,葛根素抑制破骨细胞的分化和吸收活性,免疫荧光检测显示葛根素抑制p65的细胞核内转位及p65的磷酸化。结论葛根素通过NF-кB信号通路抑制破骨细胞的分化。     

复方葛根素水飞蓟宾固体分散体的制备及表征

目的筛选复方葛根素水飞蓟宾固体分散体的制剂处方。方法以体外速释性为考察指标,优选药物在固体分散体中的存在形式以及药物与辅料配比;以热分析法、红外色谱法、X单晶衍射法对药物在制剂处方中的物相进行鉴定。结果优选的制剂处方为:将水飞蓟宾与聚乙烯吡咯烷酮k30以1∶3比例制成固体分散体,再加入与水飞蓟宾等量的葛根素,与水飞蓟宾固体分散体混匀。结论该中间体制剂处方可用于进一步复方制剂。     

葛根素在抗卵巢抗体阳性卵巢早衰患者中的应用价值与安全性研究

目的研究葛根素对AoAb阳性POF患者的治疗效果和应用经验,并探索葛根素对于POF患者AoAb的调节机制。方法将确诊为AoAb阳性的POF患者80例随机分为治疗组和对照组各40例,对照组采用雌激素-安宫黄体酮替代治疗,治疗组采用葛根素-安宫黄体酮序贯治疗,比较两组的临床疗效、激素水平、AoAb变化。结果两组治疗后的Kupperman评分与治疗前比较,差异有统计学意义(P<0.05);两组间治疗前后的Kupperman评分均无统计学差异(P>0.05)。两组的治疗效果比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与治疗前比较,两组治疗后的FSH、LH水平均有显著降低(P<0.05);治疗组治疗后的E_2无明显变化(P>0.05),对照组治疗后E_2水平显著升高(P<0.05)。治疗组治疗后的AoAb浓度显著低于对照组和治疗前(P<0.05)。未发现葛根素诱发雌激素相关性肿瘤的发生。结论葛根素-安宫黄体酮序贯疗法是治疗POF的一种安全有效的方法,可降低血液AoAb浓度,甚至转阴,进而发挥保护卵巢的作用。     

葛根素对小鼠胚胎干细胞源的心肌细胞T管发育的影响

目的:探讨葛根素(puerarin)对小鼠胚胎干细胞分化的心肌细胞横管(T管)发育的影响。方法:采用经典的悬滴法诱导小鼠D3系胚胎干细胞向心肌细胞分化,在分化过程中持续使用葛根素(100μmol/L)处理;应用Di-8-ANEPPS活细胞染色观察T管的形成;Real-time PCR测定T管发育相关蛋白的mRNA表达情况。结果:⑴在分化16 d和20 d,葛根素组中有T管的心肌细胞百分比分别为(39.56±1.02)%和(39.93±2.35)%,明显高于对照组(25.28±1.27)%和(29.57±1.54)%,(P<0.01);⑵葛根素显著上调T管发育相关基因caveolin-3、amphiphysin-2和junctophinlin-2的转录水平。结论:葛根素能促进小鼠胚胎干细胞源的心肌细胞中T管的发育,该作用可能与上调T管发育相关基因表达有关。     

HPLC法测定清凉含片中葛根素的含量

目的建立HPLC法测定清凉含片中葛根素含量的方法。方法色谱柱为Waters VP-ODS-C18(250mm×4.6mm),流动相为甲醇-水(20∶80),流速为1.0m L/min,检测波长250nm。结果葛根素的进样量在4.019~200.9ng(r=0.9995)范围内呈良好的线性关系(r=0.9995),平均加样回收率为99.30%,RSD为0.7%(n=6)。结论本方法简单,灵敏,重现性好,可用于清凉含片中葛根素的含量测定。     

葛根素预处理对大鼠血栓栓塞性脑缺血急性期的保护作用

目的:采用核磁共振技术、TTC染色方法检测葛根素预处理对脑缺血急性期的保护作用。方法:48只SD大鼠随机分为6组,每组8只。假手术组和模型对照组给予生理盐水,受试药给予葛根素注射液(21、42、84 mg/kg),阳性对照组给予灯盏细辛注射液(18 mg/kg)。尾静脉注射给药7天预防治疗后进行血栓栓塞性脑缺血手术。术后6 h行神经功能评分,采用核磁共振技术进行大鼠脑SE-T2WI以及弥散加权成像(DWI)序列扫描,测量脑病变范围;术后24 h评分后取脑进行TTC染色,测量脑梗死范围;取血清检测SOD、MDA。结果:葛根素42mg/kg预处理组大鼠缺血6 h和24 h行为障碍分别改善17.8%、33.3%;6 h脑病变范围和24 h梗死范围缩小29.4%、31.6%,血清MDA含量降低16.0%,SOD活力升高21.1%;葛根素84mg/kg较42mg/kg效果稍好,葛根素21mg/kg未见明显效果。结论:葛根素预处理能改善大鼠脑缺血急性期受损神经功能,缩小脑病变范围,具脑保护作用。     

葛根素诱导人骨髓间充质干细胞成骨分化的研究

目的通过体外实验探讨不同浓度的葛根素诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow-mesenchymal stem cells,BMSCs)骨组织分化的作用以及与Notch信号通路之间的关系。方法根据葛根素的浓度,实验分为6组。取3周的SD大鼠分离培养BMSCs,传至第3代后接种细胞,改用不同分组的培养基。继续培养2~4周,测定碱性磷酸酶(ALP)与骨钙素(OC)的含量,评价葛根素的体外诱导成骨能力。用Elisa试剂盒测定Delta样配体4(DLL4)的含量,评估葛根素的促成骨作用与Notch信号通路的关系。结果不同浓度组的细胞出现与典型成骨细胞相似的形态特征和生物学特性,ALP、OC和DLL4含量增加,但以1×10-5mol/L组显著高于对照组,比其他浓度组要高,但是差异无统计学意义。结论葛根素能有效促进BMSCs向成骨方向分化,以10-5mol/L浓度效果最佳,其作用机制可能与Notch信号通路有关。     

脑得生片中10种成分的定量研究

目的建立HPLC法,对脑得生片中3′-羟基葛根素、葛根素、葛根素芹菜糖苷、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、染料木苷、三七皂苷Rb_1、人参皂苷Rg_1、大豆苷元和人参皂苷Rb_1 10种有效成分进行定量分析。方法色谱条件:色谱柱为Kromasil C_(18)柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相为乙腈-2.0 g·L~(-1)磷酸水溶液,梯度洗脱;流速为0.8 mL·min~(-1);检测波长为250和203 nm;柱温为35℃。结果 10个成分的峰具有良好的分离度;3′-羟基葛根素、葛根素、葛根素芹菜糖苷、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、染料木苷、三七皂苷Rb_1、人参皂苷Rg_1、大豆苷元和人参皂苷Rb_1的线性范围分别为14.99～299.88,15.00～300.03,8.26～165.13,10.24～204.82,10.01～200.13,6.40～128.00,15.75～314.93,21.00～419.97,7.01～140.14和17.50～349.97μg·mL~(-1),相关系数分别为0.999 5,0.999 8,0.999 9,0.999 5,0.999 6,0.999 5,0.999 6,0.999 8,0.999 6和0.999 6;精密度、稳定性与重复性实验的RSD值均小于1.60%;10个对照品的加样回收率均在97.10%～98.48%之间,RSD值均在0.76%～1.56%之间;10批制剂中3′-羟基葛根素、葛根素、葛根素芹菜糖苷、3′-甲氧基葛根素、大豆苷、染料木苷、三七皂苷Rb_1、人参皂苷Rg_1、大豆苷元和人参皂苷Rb_1的平均含量分别为7.43,13.33,8.29,10.64,9.35,1.04,2.21,8.44,1.73和2.97 mg·g~(-1),RSD值分别为1.23%,0.82%,1.11%,1.24%,1.07%,1.58%,1.28%,0.86%,1.45%和1.28%。结论脑得生片中10种主要有效成分的含量检测方法操作简便、准确、可靠、稳定且重复性好,为该制剂的质量控制提供了有效的评价方法。