急性脑梗死患者血清AHRR基因甲基化及影响因素

目的分析芳香烃受体抑制因子(aryl hydrocarbon receptor repressor,AHRR)基因在急性脑梗死(acute cerebral infarct,ACI)患者中的甲基化水平及其相关影响因素。方法收集106例ACI患者和52例体检健康者血清标本,采用RT-PCR技术定量检测其AHRR甲基化水平,ROC曲线分析评价AHRR甲基化水平对ACI诊断的价值,并对ACI患者临床基本资料进行分析。结果 ACI组血清AHRR甲基化水平(0.460±0.02)明显高于对照组(0.138±0.01),差异有统计学意义(t=11.57,P0.01)。当cut off值为0.235时,血清中AHRR甲基化水平诊断ACI的ROC曲线下最大面积(AUCROC)、敏感性、特异性分别为0.907、85.8%和82.7%。对ACI患者血糖进行分组(血糖:3.6~6.1 mmol/L,血糖6.1 mmol/L),二者血清AHRR甲基化水平差异有统计学意义(t=7.075,P0.01)。结论血清AHRR甲基化水平升高可辅助诊断ACI,血糖浓度是影响ACI患者血清AHRR甲基化的重要因素。     

基于microRNA表达的肿瘤起源分类

摘要： 由于采用标准诊断方法难以识别癌变的原发部位,诊断新发的癌症中约有3%~5%来源于原发部位不明的肿瘤。MicroRNAs（miRNAs）近来被证实能够协助病理学家提高对原发部位不明肿瘤的诊断准确性。本文将着重讨论基于肿瘤诊断的miRNA最新研究进展,及该领域的未来发展方向。     

2009至2016年中国甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因进化分析及流行趋势预测

摘要:目的：分析2009至2016年中国甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因（NA）进化特征,预测其流行趋势,为流感疫苗评价提供依据。 方法：从全球共享禽流感数据倡议组织（GISAID）数据库及美国国家生物技术中心（NCBI）数据库下载甲型H1N1流感病毒NA基因序列1 141条。利用邻接法进行系统进化分析和遗传变异分析,利用Bayesian skyline Plot预测流行趋势。 结果：2009至2016年中国甲型H1N1毒株NA基因与参考毒株的同源性逐年降低。遗传进化分析显示同一年份的毒株在系统进化树上基本呈现集中分布。除2012年,其余各年份的毒株均通过不同模型得到正向压力选择位点。动力学分析显示2017年甲型H1N1可能达到一个流行高峰。 结论：甲型H1N1流感病毒NA基因所编码的氨基酸逐年变异,需进一步加强流感监测。     

海南地区1株携带blaNDM-5大肠埃希菌的分离及耐药基因分析

目的分析2014年海南地区临床分离的1株携带bla_(NDM-5)大肠埃希菌的耐药表型及耐药基因。方法收集临床分离耐碳青霉烯类药物大肠埃希菌1株,经Vitek 2 Compact和E-test条进行菌株鉴定及药敏复核试验;改良Hodge试验和EDTA协同试验筛选碳青霉烯酶表型;PCR扩增并测序筛查碳青霉烯酶基因(bla_(NDM)、bla_(KPC)、bla_(GES)、bla_(IMP)、bla_(VIM)、bla_(OXA-48)和其他β-内酰胺酶基因(bla_(TEM)、bla_(SHV)、bla_(CTX);多位点序列分型(MLST)进行序列分型;接合转移试验、S1酶切脉冲场凝胶电泳(S1-PFGE)、Southern印迹杂交方法分析其携带质粒的特征。结果该菌株对所检测的包括碳青霉烯类的β-内酰胺类药物全部耐药,对阿米卡星、庆大霉素、环丙沙星、左氧氟沙星、利福平、替加环素和多粘菌素B敏感;改良Hodge试验和EDTA协同增效试验阳性;基因扩增及序列比对显示与已报道的bla_(NDM-5)同源性100%,同时检出bla_(TEM-1)和bla_(CTX-M-55)基因;MLST测序分型为ST5131;S1-PFGE、Southern印迹杂交显示bla_(NDM-5)位于大小约50 000 bp的质粒上,并且为接合性质粒。结论海南地区发现携带bla_(NDM-5)的大肠埃希菌,该基因存在于可经接合传递的质粒上;该菌株同时携带bla_(TEM-1)、bla_(CTX-M-55)β-内酰胺酶基因。     

CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞在CIK细胞诱导中的表达及其功能

目的探讨肿瘤患者自体细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)诱导过程中CD4~+CD25~+Foxp3~+调节性T细胞的变化及其功能。方法应用血细胞分离机采集22例肿瘤患者外周血单个核细胞(PBMC),诱导培养CIK细胞,用流式细胞仪动态监测其CD4~+CD25~+Foxp3~+表型,并分析Tregs细胞负性调控分子转化生长因子-β1(TGF-β1)、细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和IL-10的表达水平,采用细胞增殖抑制试验测定Tregs细胞免疫学功能。结果诱导的CIK细胞中存在CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs,其表达量分别为第1天(0.30±0.15)%、第3天(4.48±1.72)%、第5天(3.83±2.12)%、第9天(2.37±1.17)%、第11天(1.65±0.99)%、第14天(1.04±0.76)%。诱导第14天时的Tregs细胞免疫调控负性分子TGF-β1的表达水平为(97.2±2.1)%、CTLA-4为(96.2±3.5)%、IL-10为(4.2±2.3)%。细胞增殖抑制试验中空白对照组、条件对照组以及实验组的增殖细胞表达量分别为(8.55±2.38)%、(42.66±7.32)%、(57.04±7.49)%。结论 CD4~+CD25~+Foxp3~+Tregs细胞可作为潜在的CIK细胞质量评价指标。     

美国CLSI M52商品化微生物鉴定和药敏试验系统的验证后质量保证

全面的质量保证活动有助于确保系统性能,提供高质量的检测结果。尽管商品化微生物鉴定和药敏试验系统的验证过程所建立的系统性能参数令人满意,但实验室还需执行质量保证活动以保证系统在一段时间内的性能。美国临床和实验室标准化协会(CLSI)文件M52为商品化微生物鉴定及药敏试验系统的验证后质量保证活动提供了指导性的建议,保证系统可接受水平的质量保证活动包括:不间断的质控、能力验证、人员培训及仪器软件维护、异常结果复查,以及与临床疗效相关的结果及意见调查。现介绍以上内容,为制定商品化微生物鉴定及药敏试验系统验证后质量保证计划提供一些参考。     

磁性纳米颗粒Fe34@SiO2的制备及在全血DNA提取中的应用

摘要：目的：自制Fe₃₄@SiO₂磁性纳米颗粒并评价在全血样本中DNA提取效果,进一步研究开发磁珠法检测HBV DNA的技术。 方法：采用溶剂热法自制Fe₃₄磁性纳米颗粒,并用表面化学修饰法制备Fe₃₄@SiO₂磁性复合颗粒;利用该颗粒经吸附、洗涤、洗脱等步骤提取全血样本中DNA,并通过电泳、PCR扩增等传统技术检测DNA提取效果,与煮沸法提取血清DNA样本的效果进行对比。 结果：成功制备出直径约550 nm的Fe₃₄@SiO₂磁性纳米颗粒,该颗粒分散均匀;自制的磁性纳米颗粒可用于全血DNA提取与纯化,实验操作简便。自制磁性纳米颗粒提取全血DNA浓度为150.56 ng/μL,纯度为1.53;该提取方法与传统煮沸裂解法对96份样本进行对照研究,证实其灵敏度有较大提高。 结论：利用自制的Fe₃₄@SiO₂磁性纳米颗粒和合适的缓冲液体系,可成功地提取纯度较高的DNA,通过PCR扩增及对比实验表明,该磁性纳米颗粒及其提取工艺经优化后,可用于传染病的体外分子诊断研究。     

骨折后深静脉血栓形成患者的内源性抗凝能力评价

目的观察骨折后下肢深静脉血栓形成(DVT)患者的内源性抗凝能力及其在DVT形成中的作用。方法选择北京积水潭医院骨折后下肢DVT患者95例作为DVT组,体检健康者100例作为健康人对照组。收集患者术后第3天枸橼酸钠抗凝血浆标本,检测纤维蛋白降解产物(FDP)和D-二聚体(DD);用Thrombopath发色底物显色法检测内源性抗凝能力指标Protac凝血抑制率(PICI);收集患者血清检测高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)。结果 DVT组FDP、DD均高于健康人对照组,差异均有统计学意义(P均0.01),DVT组PICI(%)低于健康人对照组(82.8±7.2 vs 87.8±3.6,P0.01);DVT组≥65岁患者较65岁患者PICI下降约4.8%(P0.05);当PICI的cut-off值为84.2%时,卡方检验显示,DVT与健康人对照组PICI阳性率差异有统计学意义(P0.01);相关性分析显示PICI与FDP、DD呈负相关,与HDL-C呈正相关(r分别为-0.318、-0.336和0.284,P均0.01);Logistic回归分析显示PICI是静脉血栓的危险因素,OR值为1.243(P0.01)。结论骨折后血栓患者的内源性抗凝能力降低。     

同一患者不同部位分离耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌耐药机制研究及同源性分析

目的对临床分离自同一患者不同部位的3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌进行耐药机制研究及同源性分析。方法对某严重烧伤患者的股静脉导管尖端、创面分泌物及痰液标本中分离到的3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌,采用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶,双纸片协同及增效试验检测金属β-内酰胺酶;PCR筛查耐药基因;肠杆菌科基因间重复序列-聚合酶链反应(ERIC-PCR)进行同源性分析,多位点序列分型技术(MLST)对肺炎克雷伯菌进行分子生物学分型。结果 3株耐碳青霉烯类肺炎克雷伯菌的改良Hodge试验均为阴性,双纸片协同及增效试验均为阳性;3株菌均检出blaNDM-1基因,而未检出bla_(KPC)、bla_(GES)、bla_(IMP)、bla_(SPM)、bla_(VIM)、bla_(GIM)及bla_(OXA-48)等耐药基因;ERIC-PCR显示3株菌为同一型别,MLST分型结果显示3株菌均属于ST17型。结论 3株肺炎克雷伯菌对碳青霉烯类抗生素耐药的主要机制为携带bla_(NDM-1)基因,且这3株菌为同一克隆。     

血浆凝血和纤溶标志物在肿瘤治疗与预后中的研究进展

血浆凝血与纤溶标志物通常被视为血栓性疾病的实验室检查项目,但越来越多的研究显示,除了上述功能,其对肿瘤的发生、预后及治疗均有一定影响,提示其在肿瘤中可能具有重要作用。该文主要综述血浆凝血与纤溶标志物在肿瘤治疗与预后中的研究进展。