大肠杆菌O157：H7 OI115岛的多态性分析

目的研究大肠杆菌0157：H7测序菌株EDL933的OI115岛在肠杆菌科细菌中的分布。方法用PCR和杂交方法检测OI115岛的21个基因，同时进行该岛序列测定。结果OI115岛和SPI-1毒力岛的分布特点相似，具有种属局限性。仅在大肠杆菌中存在，在EPEC、CTEC、EAggEC均可检测到该岛的缺失形式，在沙门菌、志贺菌、耶尔森、摩根菌等其他肠杆菌科细菌中未发现该岛的存在。在不同类别的致泻性大肠杆菌中，Oi115岛也各有特点，共检测到该岛的3种存在形式。产生志贺毒素的大肠杆菌O157：H7菌株、2株EAggEC和2株不典型大肠杆菌均具有完整的OI115岛。在不产生志贺毒素的大肠杆菌O157中具有H5、H12、H29、H42、H11、H19、H26、H10、H21鞭毛型的菌株缺失了第3基因簇，具有H16鞭毛型的菌株第2、第3基因簇同时缺失。结论本研究发现，OI115岛在致泻性大肠杆菌中分布广泛，可能和病原菌的进化有关。     

志贺菌福氏2a301菌株torA基因改变的研究

目的探讨志贺菌福氏2a301菌株torA基因的改变以及与TorA(trimethylamine N-oxide TMAO reduetase，三甲胺N-氧化物还原酶)转运相关的TAT分泌系统的存在。方法利用酶活性检测和Western blot方法来验证志贺菌福氏2a301测序菌株torA基因发生的碱基置换，并且利用正常大肠杆菌中torA基因的克隆转化来研究TAT分泌系统的存在。结果实验表明志贺菌福氏2a301菌株不具有TorA酶活性，不表达TorA蛋白，和序列分析的结果相符；但是，将torA基因克隆子转化入301菌株后，转化子获得了TorA酶活性，表达了TorA蛋白。结论在志贺菌福氏2a301菌株中torA基因发生了改变，但具有完整的TAT分泌途径，可以转运蛋白。     

Survey of O-islands in Escherichia coli O157 and Other Enteric Pathogens——O-islands of E.coli O157∶H7

The presence of virulence genes, of which distinguishpathogenic and nonpathogenic strains of a species, are of ten clustered in pathogenicity islands. The term“Pathogenicity Island”(PAI)was first coined in 1994 andwas used to describe a region that can encode hostile ele ment[1]. Horizontal transfer of PAI represents a key ge netic mechanism in the emerging of microbial pathogens,which allow once harmless bacteria become infectious[2].The number of Escherichia coli O15…     

鉴定五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法

目的 建立一种快速鉴定和鉴别五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的多重PCR方法.方法 利用五类致泻性大肠埃希菌和志贺菌的毒力基因stx1、stx2、eaeA、lt、stIb、aggR、ipaH及16S rRNA基因rrs,建立8重PCR反应体系,并对PCR引物、反应体系和循环条件进行优化.结果 8对PCR引物均能特异地扩增相...     

肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7质粒 pO157 上毒力因子的研究进展

肠出血性大肠埃希菌O157 ∶ H7是一种重要的致病菌,可以引起不同程度人类疾病。目前已知的O157 ∶ H7的致病因子有3个,志贺毒素、粘附抹平效应毒力岛和特异性质粒pO157。其中pO157在致病过程中的作用并不十分清楚。本文结合近年来的研究进展,介绍了pO157上与细菌致病性有关的毒力因子。     

基于病原学的临床症状及流行病学信息查询系统的开发及应用

目的 建立病原体临床症状及流行病学信息数据库系统,为传染病病原的初筛提供参考。 方法 收集病原体的概述、病原学特征、临床症状、实验室检测、流行病学等信息;利用先进的J2EE技术开发设计数据库系统平台。 结果 构建了病原体临床症状及流行病学信息数据库系统,并实现在该系统下前台Web展示及后台管理功能。 结论 该系统的开发与应用,可为疾控、科研人员在短时间内确定可能的传染病病原提供线索、参考。     

阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR 检测方法的研究

目的 建立阪崎肠杆菌的TaqMan PCR检测方法。 方法 将阪崎肠杆菌的菌悬液连续10倍稀释后与健康人新鲜粪便混匀,制备成1.2100 ~ 1.2108 cfu/ml梯度浓度的粪便模拟标本并提取DNA,用以评价阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法对临床模拟标本检测的灵敏度、特异性和稳定性。 结果 实时荧光TaqMan PCR法对阪崎肠杆菌粪便模拟标本的检测灵敏度为1.2103 cfu/ml; 其线性检测范围为:1.2103 ~ 1.2108 cfu/ml;在稳定性评价中,对含菌量为1.2108、1.2106和1.2104 cfu/ml的粪便模拟标本进行实时荧光TaqMan PCR法重复检测10次,结果显示扩增反应Ct 值的变异系数(CV)为0.65%~1.47%;在特异性评价中,除了阳性对照其余样本均未见特异性扩增曲线。 结论 本研究建立了阪崎肠杆菌实时荧光TaqMan PCR法。     

37株枸橼酸杆菌的耐药性及PFGE分型分析

目的了解食品及患者来源的37株枸橼酸杆菌的耐药性、毒力基因携带及PFGE的分型情况。方法运用K-B法选择15种抗生素进行药敏试验;以PCR方法检测志贺样毒素（Istx1/I和Istx2/I）、紧密素基因（Ieae/I）及溶血素（Ihly/I）4种毒力基因;用脉冲场凝胶电泳（pulse field gel electrophoresis,PFGE）方法进行同源性分析。结果37株枸橼酸杆菌中,25株为杨氏枸橼酸杆菌,11株为弗劳地枸橼酸杆菌,1株为布雷克氏枸橼酸杆菌。分离菌株对大多数抗生素敏感,但对头孢噻吩100%耐药。其毒力基因检测均为阴性。PFGE结果发现不同菌株带型差异较大。其中5株食品来源,1株为人来源的杨氏枸橼酸杆菌同为MAS007型,具有流行病学相关性。 结论该地区枸橼酸杆菌主要以杨氏枸橼酸杆菌为主;部分菌株具有多重耐药,应加强菌株的耐药性监测;脉冲场凝胶电泳对枸橼酸杆菌有较好的分型能力,有助于分析追踪疫情和来源;患者可能存在食源性感染,应引起疾控部门的重视。     

婴幼儿腹泻粪便标本菌群的16S rDNA PCR-DGGE分析

目的探讨DGGE技术对常见肠道病原菌的区分能力及腹泻病人粪便标本中的菌群组成和变化情况。方法采用细菌的16S rDNAV3区通用引物,以常见肠道病原菌的染色体和腹泻病人粪便标本中的总DNA为模板,PCR扩增后进行DGGE分析及优势条带的序列分析。结果6份粪便标本的DGGE图谱均表现为高度多态性,不同标本之间优势带型存在很大的差异。序列分析显示每份粪便标本中的DGGE优势带型由不同的细菌组成,而且其中非可培养细菌占较大比例,恢复期病人的粪便标本中双歧杆菌和/或乳杆菌成为优势菌型。结论PCR-DGGE能够有效区分不同种属的常见肠道病原菌,技术可为常规的病原菌分离培养方法提供补充,用于腹泻粪便标本的菌群分析,为疾病诊断提供线索。     

多交叉置换扩增技术在单增李斯特菌检测中的应用及评价

目的 应用多交叉置换扩增(MCDA)技术建立单增李斯特菌的简单、快速、敏感且特异的诊断方法, 并对该方法进行敏感度、特异性及实际应用评价。方法 根据单增李斯特菌的种特异性基因lmo0733设计引物,采用荧光染料颜色变化、实时浊度检测及琼脂糖凝胶电泳三种方法确认MCDA产物,对MCDA引物进行最佳反应条件、敏感度、特异性评估,并对实际样本进行检测。结果 单增李斯特菌MCDA检测方法的最佳反应温度为61 ℃。单增李斯特菌MCDA检测方法的敏感度为10 fg/反应,分别是环介导等温扩增(LAMP)技术和交叉引物恒温扩增(CPA)技术的25倍和250倍。对153份鼠粪便标本2次增菌培养物的检测结果证实,本研究建立的单增李斯特菌MCDA检测方法的检测能力与分离培养方法(ISO 11290-1)相同,且优于LAMP、CPA和PCR方法。结论 MCDA方法作为一种快速、敏感和高效的检测方法可以应用于食品行业及临床标本中单增李斯特菌的检测。