一测多评法同时测定不同采收期杜仲叶中4种黄酮

目的建立一测多评法同时测定不同采收期杜仲叶中槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、芦丁、异槲皮苷和紫云英苷的含有量。方法杜仲叶50%甲醇提取物的分析采用Thermo BDS HYPERSIL C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%磷酸溶液,梯度洗脱;体积流量1.0 mL/min;柱温30℃;检测波长360 nm。以槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷为内标,计算芦丁、异槲皮苷、紫云英苷的相对校正因子,计算其他3种成分的相对校正因子,再测定其含有量。结果槲皮素-3-O-α-L-阿拉伯糖-(1→2)-β-D-葡萄糖苷、芦丁、异槲皮苷、紫云英苷分别在5.37~161.00(r=0.999 9)、0.43~12.84(r=0.999 9)、1.58~47.33(r=0.999 8)、0.42~12.65(r=0.999 7)μg/mL范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为97.27%、96.10%、95.30%、96.72%,RSD分别为1.90%、1.12%、1.07%、1.37%。一测多评法所得结果接近于外标法。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于杜仲叶的质量控制。     

MTDH基因和ATG7基因在结直肠癌中的表达及临床意义

目的探讨异黏蛋白(MTDH)基因和自噬相关基因7 (ATG7)在结直肠癌(CRC)中的表达及临床意义。方法选取66例CRC患者的CRC组织及癌旁组织,比较CRC组织及癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7mRNA的相对表达量;比较不同临床特征CRC患者的CRC组织/癌旁组织MTDH mRNA、ATG7 mRNA的相对表达量;采用受试者工作特征(ROC)曲线分析CRC组织/癌旁组织中MTODH mRNA和ATG7 mRNA对结直肠癌的诊断价值,并分析MTDH mRNA与ATG7 mRNA的相关性。结果 CRC组织中MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量显著高于癌旁组织(P <0.01);TNM分期为Ⅲ~Ⅳ和有肝转移的CRC患者中,CRC组织/癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量均显著高于Ⅰ~Ⅱ期和无肝转移的CRC患者,低分化程度的CRC患者中CRC组织/癌旁组织中的MTDH mRNA和ATG7 mRNA相对表达量最高(P <0.01)。ROC曲线分析结果 CRC组织/癌旁组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA的AUC面积分别是0.934、0.900,诊断敏感度分别为90.91%、89.39%,特异度分别为86.37%、84.35%。Pearson分析结果表明CRC中MTDH的表达与ATG7的表达呈正相关(r=0.372,P=0.002)。结论 CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA的表达高于癌旁组织。CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA与TNM分期、分化程度、伴肝转移相关。CRC组织中MTDH mRNA、ATG7 mRNA具有诊断价值且两者具有正相关。     

粉防己碱调控miR-21表达抑制卵巢癌上皮间质转化的实验研究

目的研究粉防己碱(TET)调控miR-21表达抑制卵巢癌上皮间质转化(EMT)的作用。方法以人卵巢癌细胞(A2780细胞)、人卵巢透明癌细胞(ES-2细胞)和正常人卵巢上皮细胞(IOSE80细胞)作为研究对象,采用MTT法测定0、1.0、2.0、5.0、10.0、20.0μmol/L的TET对上述3种细胞增殖的影响。实验分为IOSE80细胞对照组、A2780细胞对照组、ES-2细胞对照组、A2780细胞TET组、ES-2细胞TET组,采用实时荧光定量PCR法(RT-qPCR)测定各组细胞miR-21表达水平;迁移实验和侵袭实验考察TET对细胞迁移和侵袭的影响;蛋白印迹法(Western blot)测定各组细胞GSK3β、p-GSK3β、β-catenin、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平。结果①与对照组相比,TET浓度在1.0～20.0μmol/L时,A2780细胞和ES-2细胞存活率随着TET浓度的增加显著降低(P0.05);为减少TET药物对细胞的毒性,采用TET对A2780细胞和ES-2细胞的处理浓度分别为5.0μmol/L和3.0μmol/L进行后续实验。②与IOSE80细胞组相比,A2780细胞对照组和ES-2细胞对照组miR-21表达水平显著升高(P0.05);与A2780细胞对照组和ES-2细胞对照组相比,A2780细胞5.0μmol/L TET组和ES-2细胞3.0μmol/L TET组miR-21表达水平、迁移能力、侵袭能力、GSK3蛋白磷酸化水平、β-catenin蛋白表达水平、N-cadherin蛋白表达水平、Vimentin蛋白表达水平明显降低(P0.05),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P0.05)。结论 TET可能通过下调miR-21表达水平,从而阻断Wnt/β-catenin信号通路抑制卵巢癌EMT。     

麦枣怡神颗粒的指纹图谱研究

目的:建立麦枣怡神颗粒的指纹图谱,为其后续开发提供科学依据。方法:以10批麦枣怡神颗粒为样品,采用高效液相色谱(HPLC)法建立指纹图谱。色谱柱为Venusil XBP C_(18)(L);流动相为乙腈-0.2%磷酸(梯度洗脱);流速在7～10 min时为1→0.7mL/min,10～15 min时为0.7→1 mL/min,其余时间为1 mL/min;检测波长分别为284 nm(0～7 min)、330 nm(7～32 min)、360 nm(32～45 min);柱温为25℃;进样量为10μL。采用"中药色谱指纹图谱相似度评价系统"(2004 A版)软件生成指纹图谱并进行相似度评价,然后通过对照药材及对照品对各共有峰进行归属和指认。结果:在方法学考察中,精密度、稳定性(24 h)、重复性均良好[各共有峰的相对峰面积和相对保留时间的RSD均<3%(n=6)]。10批样品的相似度均在0.900以上。共确定了17个共有峰,其中共有峰1、6来自莱菔子,共有峰7、9、14、15、16来自陈皮,共有峰5、10、11、12、13来自甘草,共有峰2来自陈皮、甘草、酸枣仁,共有峰3来自甘草、莱菔子,共有峰8来自大麦、莱菔子,共有峰4、17均来自陈皮、甘草。并指认了其中共有峰1为橙皮苷,共有峰9为芥子碱。结论:该方法建立的麦枣怡神颗粒指纹图谱准确、可靠,可以用于麦枣怡神颗粒的质量控制。     

异补骨脂素不同时间给药对大鼠肝脏功能和转运体的影响

目的探讨补骨脂活性成分异补骨脂素不同时间灌胃给药对大鼠肝脏功能和胆汁酸转运体的影响。方法 SD大鼠随机分为对照组、异补骨脂素60 mg·kg~(-1)灌胃给药1 d组、3 d组以及7 d组。实验结束后,检测大鼠的体质量和肝重;试剂盒检测大鼠血清中ALT、AST、ALP、TBA、TC、TG、TBIL的含量;real-time PCR法检测大鼠肝脏组织中胆汁酸转运体BSEP、NTCP、MRP2、MRP4、MDR1、ABCG5、ABCG8、OSTα的水平。结果与对照组相比,异补骨脂素能明显增加肝脏的重量,不同给药时间均能引起肝脏系数的增加;异补骨脂素给药后,大鼠血清中ALT、 AST、TBA、TG、TBIL的含量明显增加,ALP没有明显变化,TC明显降低,且AST的水平在异补骨脂素灌胃给药1 d之后即有明显升高;异补骨脂素灌胃给药后,肝脏中BSEP、NTCP、MRP2、MDR1、ABCG5、ABCG8、OSTαmRNA的水平明显下降,MRP4 mRNA的水平没有明显变化。结论异补骨脂素灌胃给药1～3 d即造成肝脏的损伤作用,其作用机制可能与干扰胆汁酸转运体有关。     

荷叶总碱对酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用

目的探讨荷叶总碱(TAL)对酒精诱导小鼠肝损伤的保护作用及可能机理。方法将40只小鼠随机分为正常组、肝损伤模型组、TAL低剂量组(30 mg/kg)和TAL高剂量组(100 mg/kg)。每组10只小鼠。造模给药结束后,检测各组小鼠相关生理生化指标(ALT、AST、TG),氧化应激指标(GSH、MDA)和炎症因子指标(TNF-α、IL-1β、IL-6)。采用HE染色法观察各组小鼠肝脏的显微形态。采用免疫印迹与荧光定量PCR法检测各组小鼠肝脏细胞核内的Nrf2蛋白水平与肝脏中Nrf2下游基因的表达水平。结果与正常组相比,模型组小鼠发生肝损伤和肝脏TG积累(P 0.01),肝脏内发生氧化应激和炎症反应(P 0.01),肝脏显微结构明显改变。TAL有效地缓解了这些病变。进一步研究发现,TAL对模型小鼠肝脏中的Nrf2通路具有明显的激活作用。结论 TAL对酒精诱导的小鼠肝损伤具有明显的保护作用。其机制与激活肝脏中Nrf2通路有关。[营养学报,2019,41(3):281-286]     

伊贝母异甾体生物碱通过Wnt/β-catenin信号通路调节哮喘大鼠气道炎症和气道重塑机制的研究

目的 探讨伊贝母异甾体生物碱对哮喘大鼠气道炎症、气道重塑及Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法 本研究采用吸入卵清蛋白（OVA）致敏和激发的方法建立大鼠哮喘模型，连续给予药物7天；抽取支气管肺泡灌洗液（BALF）进行白细胞分类计数，酶联免疫吸附法（ELISA）检测BALF中白介素4（IL-4）、白介素5（IL-5）和白介素13（IL-13）的水平；取肺组织进行苏木精-伊红（HE）染色，观察药物对哮喘大鼠气道重塑的影响；采用Western blot技术考察异甾体生物碱对Wnt/β-catenin信号通路上Wnt5a、Wnt7b和β-catenin蛋白的调节作用。结果 与模型组比较，异甾体生物碱组大鼠肺泡间质炎性细胞浸润和支气管管腔狭窄均显著改善，支气管壁厚度和平滑肌厚度均明显降低；Western blot结果显示异甾体生物碱对于哮喘大鼠Wnt/β-catenin通路上的Wnt5a、Wnt7b和β-catenin蛋白表达均有显著的调节作用。结论 异甾体生物碱对于哮喘相关的病理变化-炎症和气道重塑均有一定的治疗作用，且该治疗作用与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

乳腺专用伽马显像中99Tcm-甲氧基异丁基异腈的摄取与乳腺浸润性导管癌患者临床病理特征的关系

目的分析乳腺浸润性导管癌患者的临床病理特征与乳腺专用伽玛显像(BSGI)中⁹⁹Tc^m-甲氧基异丁基异腈(MIBI)摄取之间的关系。 方法回顾性分析2014年3月至2018年3月就诊于威海市立医院行BSGI检查、未接受新辅助治疗及穿刺活组织检查及术前无肿瘤远处转移的浸润性导管癌患者244例的临床资料。分析患者的BSGI数据，计算病灶的放射性计数与正常组织的比值(T/N)，从而评估肿瘤对⁹⁹Tc^m-MIBI的摄取量。T/N为偏态分布数据，用M(P₂₅～P₇₅)表示。用Wilcoxon秩和检验分析患者临床病理特征与T/N之间的关系，用多元线性回归模型分析患者临床病理特征对T/N的影响。 结果全部244例患者BSGI中的T/N范围为1.0～7.5。Wilcoxon秩和检验结果显示T/N与T分期、N分期、组织学分级及Ki67表达有关(Z＝－6.852、5.198、－3.931，P均<0.001；Z＝－3.059, P＝0.002)，而与ER、PR、HER-2、P53、EGFR表达及三阴性乳腺癌无关(Z＝ －0.730、－1.526、－1.137、－1.175、－1.224、－1.556, P均>0.050)。多元线性回归分析表明T分期及N分期是T/N的影响因素(t＝5.100, 95%CI：0.414～0.935, P<0.001；t＝ 2.819, 95%CI：0.118～0.668, P＝0.005)。 结论乳腺浸润性导管癌的T分期和N分期可能影响BSGI中肿瘤对⁹⁹Tc^m-MIBI的摄取，因此，可以通过术前测定BSGI的T/N，对肿瘤的恶性程度进行初步评估。     

小檗碱对皮肤鳞状细胞癌裸鼠模型的抑制作用及其机制研究

【摘要】 目的 研究小檗碱对皮肤鳞状细胞癌（cSCC）-A431裸鼠移植瘤的体积、重量、细胞增殖及凋亡的影响，探索小檗碱抑制cSCC的可能机制。方法 培养A431细胞，于20只裸鼠背部皮下注射A431细胞悬液建立cSCC移植瘤裸鼠模型。接种第15天，将荷瘤裸鼠随机平均分为4组：低、中、高剂量组裸鼠腹腔分别注射10、20、25 mg/kg小檗碱溶液，对照组腹腔注射生理氯化钠溶液，每日1次，连续给药35 d。分别于给药前、给药第7、14、21、28、35天检测移植瘤体积。实验结束后，处死裸鼠并随即剥离瘤块称重，计算肿瘤生长抑制率。移植瘤行组织病理检查，免疫组化检测Ki67表达水平，TUNNEL染色检测移植瘤组织中凋亡细胞数，荧光定量PCR和Western印迹法分别检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、caspase-3和Ezrin mRNA和蛋白的表达。多组间比较采用单因素方差分析，各组与对照组比较采用Dunnett-t检验。结果 随小檗碱剂量升高和作用时间延长，肿瘤生长曲线逐渐变平缓，各小檗碱组肿瘤生长受到不同程度的抑制，其中高剂量组肿瘤生长抑制作用最明显。小檗碱低、中、高剂量组肿瘤生长抑制率分别为31.05%、66.68%、76.49%，瘤重均显著低于对照组（t = 4.07、6.33、7.26，均P < 0.01）。移植瘤组织病理检查显示，随小檗碱剂量的增加，肿瘤细胞坏死程度和范围增加。免疫组化显示，随小檗碱剂量的增加，Ki67阳性细胞逐渐减少。此外，低、中、高剂量组Ki67阳性细胞数均显著低于对照组（均P < 0.01），而凋亡细胞数均显著高于对照组（P < 0.05或 < 0.01）。4组Bax、Bcl-2、caspase-3、Ezrin mRNA及蛋白表达差异均有统计学意义（均P < 0.01）。其中，小檗碱低、中、高剂量组Bcl-2 mRNA的表达均显著低于对照组（均P < 0.01），中、高剂量组Bcl-2蛋白表达显著低于对照组（均P < 0.01）；高剂量组Bax mRNA及中、高剂量组caspase-3 mRNA的表达均显著高于对照组（P < 0.05或 < 0.01），而低、中、高剂量组Bax、caspase-3蛋白表达量均显著高于对照组（均P < 0.01）；仅高剂量组Ezrin mRNA表达显著高于对照组（均P < 0.01），而低、中、高剂量组Ezrin蛋白表达均显著低于对照组（均P < 0.01）。结论 小檗碱可抑制cSCC-A431裸鼠移植瘤细胞的增殖并促进凋亡，从而一定程度抑制cSCC-A431裸鼠移植瘤的生长，其机制可能与小檗碱上调Bax、caspase-3的表达，同时下调Bcl-2、Ezrin的表达有关。     

荷叶标准汤剂质量评价方法的建立

中药饮片标准汤剂的质量评价方法是中药配方颗粒和经典名方中药复方制剂(汤剂)质量评价的基础。该研究建立荷叶的槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸的含量测定方法,建立荷叶标准汤剂的质量评价方法,为荷叶及其汤剂的质量控制提供参考。收集有代表性的荷叶15批制备标准汤剂,计算出膏率、指标成分转移率和溶液pH等参数,采用HPLC建立荷叶及标准汤剂中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸的含量测定方法。荷叶标准汤剂中槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸的质量浓度为1.09~3.06 g·L-1,而荷叶碱的质量浓度为0.01~0.17 g·L-1。荷叶标准汤剂平均出膏率为(14.4±2.6)%,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸的平均转移率为(70.7±18.6)%,荷叶碱的平均转移率为(9.6±5.4)%。与荷叶碱相比,槲皮素-3-O-葡萄糖醛酸在荷叶标准汤剂中含量高、转移率稳定,建议作为荷叶标准汤剂的质量控制标志物。该文建立了荷叶标准汤剂的质量评价方法,为所有源于荷叶水煎液的制剂的质量控制方法的制定提供参考。