Aβ3-10重组质粒的构建及其免疫幼年鼠产生抗反应的研究

目的构建DNA疫苗p(Aβ3-10)_(10)-MT,探讨其免疫双转基因鼠APPswe/PSEN1dE9后产生抗Aβ抗体的滴度及免疫反应类型。方法肌肉注射该质粒免疫双转基因鼠,Aβ42肽及pcDNA3.1分别作为阳性和阴性对照组。ELISA方法测抗Aβ抗体的滴度、分型及免疫组化测定该抗体的血清抗性。结果疫苗p(Aβ3-10)_(10)-MT成功构建并测序正确。Aβ42组产生了广度的抗体类型(IgG1, IgG2a和IgG2b),但p(Aβ3-10)_(10)-MT组以IgG1为主。p(Aβ3-10)_(10)-MT组IgG1/IgG2a比率为Aβ42组的4倍。血清能够较强地与Aβ单倍体,三聚体,四聚体结合,而不能与Aβ多聚体很好地结合,免疫后的血清能够很好地与AD转基因鼠脑内老年斑相结合。结论构建的疫苗能够诱导Th2型免疫反应,有效地避免了不良免疫反应的发生。     

接种无细胞百白破疫苗的不良症状及处理措施分析规范化疫苗

目的探讨接种无细胞百白破疫苗的不良症状及处理措施分析规范化疫苗。方法选取笔者所在辖区(2014年10月~2016年10月)接受无细胞百白破疫苗接种的600例3个月以上儿童(600位家长),观察600例接受无细胞百白破疫苗接种的儿童临床症状,再实施相应的预防护理工作。分析600例婴幼儿的不良反应发生率、婴幼儿家长对护理工作总满意度(采取问卷调查表)、不同年龄阶段(3个月、4个月、5个月、18~24个月)异常反应发生率等参数指标。结果 600例接受无细胞百白破疫苗接种的婴儿中有20例出现不良反应,占3.33%(20/600),未出现不良反应者占96.67%(580/600);20例不良反应中3个月婴儿异常反应发生率为5.00%(1/20)、4个月婴儿异常反应发生率为10.00%(2/20)、5个月婴儿异常反应发生率为50.00%(10/20)、18~24个月幼儿异常反应发生率为35.00%(7/20),不同年龄阶段不良反应发生率比较,差异有统计学意义(P<0.05);采取针对性的护理措施后,婴幼儿家长对护理工作总满意率达99.67%(598/600)、不满意率为0.33%(2/600),两组数据比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论接种无细胞百白破疫苗的不良反应发生率比较高,在对婴幼儿进行疫苗接种时要严格规范好操作方法。     

成都金牛区2015-2016年疑似预防接种异常反应分析

目前疫苗产业链中新产品层出不穷,加之疫苗接种针次数量的逐年增加,疫苗接种后出现疑似预防接种异常反应的风险提高.在山东疫苗事件发生以后,公众和社会愈发关注疫苗使用的安全性和疑似预防接种异常反应(adverse events following immunization,AEFI)的发生情况,党和国家领导人高度重视预防接种,进一步规范并强化了AEFI监测处置和疫苗安全性评价工作[1-3].为今后更加规范地开展全区范围内的AEFI监测处置工作,有效分析其发生的原因及相关薄弱环节,为改进疫苗品质、保障接种安全和提高服务质量提供依据[4],金牛区疾病预防控制中心于2015-2016年度开展了AEFI监测处置工作,现将结果分析如下.     

融合防龋DNA疫苗pGLUA-P的构建及其细胞表达研究

目的 将变形链球菌（Streptococcus mutans)表面蛋白PAc编码A区和P区（A－P）的序列克隆到真核载体pGLU中，构建出GTF－PAc融合防龋DNA疫苗，并检测其在原核细胞和真核细胞中的表达。方法 将pCIA-P质粒中A－P片段序列与pGLU质粒连接，构建出GTF－PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P。将pGLUA-P转化大肠杆菌BL21（DE3），以SDS－PAGE电泳鉴定目的蛋白GLUA－P的表达。通过脂质体将pGLUA-P转染大鼠原代肌母细胞，以免疫组织化学检测GLUA－P的表达。结果 GTF－PAc融合防龋DNA疫苗pGLUA-P经酶切分析证实携带GLU和A－P片段。pGLUA-P转化的大肠杆菌BL21（DE3）经IPTG诱导能够表达完整的融合蛋白。pGLUA-P转染的大鼠原代肌母细胞中可检测到融合蛋白的表达。结论 成功地构建了融合防龋DNA疫苗pGLUA-P，所携带的基因序列正确，能够在原核和真核细胞中表达正确的融合蛋白。     

靶向融合防龋DNA疫苗研究(Ⅱ)-编码人Ig基因的质粒pJIg的构建

目的:构建编码人免疫球蛋白Igγ1铰链区和恒定区基因的质粒pJIg,为进一步研制靶向融合防龋DNA疫苗做准备.方法:从人外周淋巴细胞中获得细胞总RNA并合成cDNA第一链,利用半巢式PCR扩增Igγ1恒定区序列,进行T-A克隆,构建pJIg质粒,酶切电泳,并测序鉴定.结果:RT-PCR获得了目的基因,质粒pJIg携带有Igγ1目的片段基因.结论:成功构建编码人免疫球蛋白Igγ1恒定区基因的质粒pJIg.     

协同信号分子在DNA疫苗免疫中的作用

DNA疫苗接种后抗原提呈和T细胞活化所涉及的细胞和分子成分尚不清楚，协同信号分子在其中起重要的作用。采用共传递编码协同信号分子和编码特异抗原的基因，是一种有效的增强DNA疫苗免疫效果的方法。深入了解协同信号分子在DNA疫苗免疫中的作用，对揭示DNA疫苗作用机制和免疫佐剂增强免疫反应的作用机制有重要意义。     

基因重组乳链球菌防龋疫苗口服免疫孕兔的实验研究

作者研究了重组链球菌ＨＬ１０７口服免疫孕兔的效果，使用酶联免疫吸附法测定口服免疫前后血清，唾液和乳汁中抗表面蛋白抗原ＩｇＧ，ＩｇＡ抗体水平，结果表明口服免疫孕兔血清和乳汁中特异性抗表面蛋白抗原的ＩｇＧ水平明显升高，唾液和乳汁中抗表面蛋白抗原ＩｇＧ水平明显升高，提示重组乳链球菌ＨＬ１０７具有变形链球菌表面蛋白抗原的免疫原性，能够激发针对表面蛋白质抗原的系统免疫和局部粘膜的免疫反应。     

DNA防龋疫苗联合蛋白质疫苗诱导小鼠免疫应答的研究

目的:研究以一种新型免疫策略即追加相应蛋白质抗原来加强免疫DNA疫苗的免疫效果。方法:重组质粒pCIA-P经鼻腔滴注途径免疫小鼠,并以其相应抗原rPAc蛋白或rPAc蛋白及黏膜佐剂rCTB经鼻腔滴注加强免疫,ELISA法检测血清和唾液中特异性抗体水平。结果:以rPAc蛋白或rPAc蛋白及黏膜佐剂rCTB加强免疫可显著提高唾液中IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体水平。并且以rPAc蛋白和黏膜佐剂rCTB加强免疫组产生了最高水平的唾液IgA型特异性抗体和血清IgG型特异性抗体。结论:DNA防龋疫苗联合蛋白质疫苗可有效增强DNA防龋疫苗免疫效果。     

靶向融合防龋DNA疫苗pGJA-P免疫兔的实验研究

目的　体外检测靶向融合防龋DNA疫苗pGJA P的免疫反应性 ;与非靶向融合防龋DNA疫苗 pGLUA P进行比较 ,评价其增强疫苗免疫效能的能力。 方法　将 pGJA P转染CHO细胞 ,蛋白质免疫印迹实验检测重组蛋白抗体免疫反应性。分 5组免疫兔 :pGJA P经肌肉注射组 (A组 ) ;pGJA P经鼻黏膜免疫组 (B组 ) ;pGLUA P经肌肉注射 (C组 ) ;pGLUA P经鼻黏膜免疫组 (D组 )和pCI载体经股四头肌注射组 (E组 )。酶联免疫吸附实验检测血清及唾液中的特异性抗体。用收集的血清进行葡糖基转移酶 (GTF)合成水不溶性葡聚糖抑制实验。结果　pGJA P表达的重组蛋白可以与抗GTF抗体反应。A组血清特异性IgG抗体水平远高于C组 (P <0 0 1) ;B组唾液特异性IgA抗体水平显著高于D组 (P <0 0 1) ;A组同样诱导了高水平的唾液特异性IgA抗体。A组的免疫血清抑制GTF活性的能力最强。结论　pGJA P具备GTF的免疫反应性 ;并较pGLUA P有更强的诱导系统和黏膜免疫反应及抑制GTF的能力。     

壳聚糖-防龋DNA疫苗微粒的制备和体外表达研究

壳聚糖 (chitosan ,CS)是新开发的黏膜载体系统 ,具有良好的生物相容性和体内可降解性 ,并且安全无毒。我们将壳聚糖和防龋DNA疫苗制备成微粒 ,对微粒的大小、形态特征和体外转染进行了研究 ,探讨其作为防龋DNA疫苗黏膜递呈系统的可能。1.材料和方法 :①壳聚糖 DNA微粒的制备 :采用凝聚法制备 ,于恒温 5 5℃磁力搅拌器 (搅拌速度 5 0 0r/min)上将含质粒DNA( 10 0mg/L)、终浓度为 5 0mmol/L的硫酸钠溶液缓慢滴入 ( 1滴 /秒 )到等体积的 0 0 2 %壳聚糖溶液 ( 1%醋酸溶解 ,用NaOH调 pH值为 5 7)中 ,制备完后 ,于室温下静置 2h ,分装…