DNA探针在牙周病相关厌氧菌鉴定中的应用初探

本研究用＾３２Ｐ标中间普氏菌（ＰｉＡＴＣＣ２５２６１）、产黑普氏菌（ＰｍＡＴＣＣ２５８４５）全染色体ＤＮＡ探针对牙周病可疑病原菌及临床牙周脓肿脓液标本直接杂交，放射自显影判断结果。结果与传统鉴定法的一致，显示出很高的特异性和敏感性，并具有快速简便的优点。     

榆树皮中三萜类化学成分的研究

[目的]研究榆树Ulmus pumila L.皮中的三萜类化学成分.[方法]采用硅胶柱色谱和Sephadex LH-20凝胶柱色谱等方法进行分离纯化,通过理化性质、波谱分析(~1H-NMR与~(13)C-NMR)及相关文献的佐证确定所得单体化合物的化学结构.[结果]从榆树皮的乙酸乙酯提取物中分离得到7种三萜类化合物,分别为齐墩果酸(1)、桦木酸(2)、熊果酸(3)、camaldulenic acid(4)、马斯里酸(5)、委陵菜酸(6)和阿江榄仁酸(7).[结论]榆树皮中三萜类化学成分含量丰富,其中化合物3为首次从该植物中分离得到.     

肠球菌API、VITEK 2、23SrRNA鉴定结果的比较与分析

随着分子生物学技术的发展,核酸分析在细菌鉴定中已得到广泛应用.我们于2004年4月至2005年1月采用API、VITEK 2、23SrRNA PCR方法对临床分离的11株肠球菌的鉴定结果进行比较,旨在探讨不同的细菌鉴定方法在细菌分类学上的价值和应用,报告如下.     

菟丝子rDNA ITS序列的测定及分析

目的研究菟丝子rDNA-ITS序列特征。方法分别采用PCR产物直接测序法和克隆测序法,对菟丝子属7个种rDNA的ITS区(包括ITS-1,5.8S rDNA和ITS-2)进行序列测定。结果菟丝子属植物ITS序列总长度约为612 bp,GC含量分别为:ITS-1区53%~63%,5.8S rDNA 48%~55%,ITS-2区46%~56%;苜蓿菟丝子种内的3个地理种发现了3个变异位点。用NJ法构建系统发育树显示:含日本菟丝子Cuscuta.japonica的分支处于系统树靠近基部位置,与之亲缘关系较近的依次为中国菟丝子C.chinensis和杯花菟丝子C.cupulata;余下5个种的分支中田野菟丝子C.campestris和五角菟丝子C.pentagona合为一支,南方菟丝子C.australis和苜蓿菟丝子C.approximata合为一支。结论NJ法建立的发育树与形态学分类基本相符,为菟丝子属植物分类鉴定提供了重要的分子依据。     

中药材茯苓PCR鉴定与特征

目的:建立针对真菌类中药材茯苓的聚合酶链式反应(polymerase chain reaction, PCR)鉴定技术,从分子生物学角度出发,对茯苓的真伪进行鉴定。方法:对经典十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法进行改良,提取样品基因组DNA,以茯苓内转录间隔区(internal transcribed space, ITS)为目的序列,设计特异性引物,优化PCR反应体系,建立茯苓PCR鉴定方法,同时克隆特异性扩增的目的条带,测序鉴定其准确性,最后进行方法学验证。结果:提取的基因组DNA浓度较高、纯度较好、完整度良好。琼脂糖凝胶电泳结果表明正品茯苓可以在199 bp处出现单一明亮的特异性扩增条带,而伪品不出现扩增条带,引物的特异性为100%,克隆后的目的片段电泳图谱清晰明亮,克隆片段与Genbank数据库中已登记的茯苓物种序列相似性高达100%。在操作人员不知样品真伪的情况对样本检测,目标条带出现位置与预期一致;灵敏度检测结果表明,DNA检测下限可达1 ng·μL^-1;挑选3位实验室人员进行茯苓真伪检测,结果相同且和预期一致,建立的茯苓PCR鉴定方法特异性良好,准确...     

粉防己中轮环藤酚碱的分离、纯化及鉴定

目的 分离纯化粉防己中的轮环藤酚碱。方法 采用乙醇回流提取粉防己总生物碱,利用酸溶碱沉法、正丁醇萃取法分离其水溶性生物碱;采用TLC、HPLC法跟踪鉴定生物碱;采用中性氧化铝柱层析色谱,分离水溶性生物碱,合并相同组分并重结晶;利用HPLC、质谱、核磁共振波谱对分离纯化所得轮环藤酚碱进行结构鉴定。结果 粉防己中的轮环藤酚碱主要分布于正丁醇萃取部位的二氯甲烷-甲醇10:1、10:2洗脱部位中,HPLC纯度为98.17%;该析晶物紫外光谱存在轮环藤酚碱苯环的E、B带吸收峰,其分子离子峰m/z 342[M+H]⁺与轮环藤酚碱分子式C₂₀H₂₄NO₄一致;该析晶物的¹HNMR及¹³CNMR化学位移特征与文献中轮环藤酚碱结构信息一致。结论 所用方法简便易行,可用于粉防己药材中轮环藤酚碱的分离纯化。     

质谱导向的肾指海绵Reniochalina sp.中环肽类成分研究

目的 以质谱为导向对肾指海绵Reniochalina sp.中的环肽类成分进行研究。方法 采用质谱引导的程序性分离手段定向追踪并分离纯化海绵中的环肽类成分;通过理化常数测定、波谱数据比对确定化合物结构;利用CCK-8法对化合物进行初步细胞毒活性评价。结果 从肾指海绵Reniochalina sp.中分离获得3个环肽类化合物,分别鉴定为stylopeptide 1 (1)、hymenamide D (2)、axinastatin 2 (3)。化合物1对6种人肿瘤细胞株具有细胞毒性,IC₅₀值范围为6.09 ~ 17.26 μmol/L。结论 化合物1 ~ 3首次分离自Reniochalina属海绵,化合物1是细胞毒性环七肽。     

白花蛇舌草化学成分及其抗结肠癌活性初探

目的 分析中药白花蛇舌草40%乙酸乙酯部位的化学成分,并初步探讨其抗结肠癌活性。方法 采用中压制备色谱、制备型高效液相色谱对白花蛇舌草40%乙酸乙酯部位进行分离纯化;根据理化性质及波谱数据鉴定化合物结构。采用MTT法检测化合物对结肠癌细胞HT-29和SW480的生长抑制作用。结果 共分离得到9个化合物,分别鉴定为齐墩果酸（1）、白桦脂酸（2）、熊果酸（3）、山柰酚（4）、槲皮素（5）、大黄素（6）、大黄酸（7）、芦荟大黄素（8）、大黄酚（9）,其中化合物1,2（半数抑制浓度≥100.4,26.5μmol/L）对HT-29和SW480细胞的生长抑制作用较强。结论 化合物2,6,7,8为首次从该植物中分离得到,化合物1,2为白花蛇舌草的抗结肠癌活性成分。     

水蛭真伪鉴定和质量评价方法研究进展

目的 通过进一步完善水蛭的真伪鉴别与质量评价方法,为保障水蛭临床用药安全有效提供参考。方法 以“水蛭”、“鉴定”、“鉴别”以及“质量评价”等为关键字,在中国知网、维普网、万方数据、PubMed、Science Direct、Web of science等数据库中查询2000年1月—2022年8月发表的相关研究论文,并以“真伪鉴定”和“质量评价”为主旨进行文献综述。结果 水蛭真伪鉴别方法包括性状鉴别、理化鉴别、分子鉴别、蛋白质电泳鉴别和毛细管电泳鉴别等多种方法,其中分子鉴别和蛋白质电泳鉴别两种方法客观性强、准确性高,应用广泛;而质量评价方法较为丰富,包括抗凝血酶评价法、高效液相色谱法、蛋白质电泳法、红外光谱分析法、气相色谱质谱联用技术、指纹图谱技术等。结论 分子鉴别是水蛭目前最准确的鉴别方法,在中药材及中成药中均可适用;由于药效物质并不十分明确,因此以抗凝血酶评价法的生物评价技术和宏观评价的指纹图谱技术在质量评价中更具优势。     

黔产莪术显微、理化特性对比研究

目的:通过对黔产莪术的显微、理化特性进行对比研究,判定黔产莪术是否符合中国药典要求,从而判定其能否作为莪术原料药材使用。方法:参照《中华人民共和国药典》2010版一部附录有关显微、薄层鉴定及吸光度、水分、灰分、浸出物、有效成分含量等检测方法进行测定。结果:黔产莪术符合广西莪术显微结构特点,吸光度高于0.45,水分少于14.0%,总灰分低于7.0%,酸不溶性灰分低于2.0%,醇溶性浸出物高于7.0%,水溶性浸出物量较醇溶性浸出物高,挥发油含量高于1.5%,姜黄素含量高于0.15 mg·g-1。结论:黔产莪术显微、理化特性符合药典规定。