醛固酮对人胎儿心脏成纤维细胞增殖以及胶原表达的影响

目的:探讨人胎儿心脏成纤维细胞(FCFS)经不同浓度的醛固酮(ALD)干预后增殖的变化以及对细胞中I、III型胶原表达的影响。方法:采用胶原酶II消化法、差速贴壁法、差速脱壁法获取并纯化FCFS,在不同浓度醛固酮作用下,应用CCK-8活细胞计数试剂盒检测细胞的增殖率。应用RT-PCR方法检测细胞中I型胶原前胶原A1(COL1A1)和III型胶原前胶原A1(COL3A1)mRNA的变化,应用Western blot检测COL1A1、COL3A1蛋白表达的变化。结果:ALD可浓度依赖性促-进FCFS增殖;低浓度的ALD(10-9、10-8、10-7mol/L)可明显促进FCFS中COL1A1、COL3A1表达,而10-6mol/L的ALD没有明显作用,10-5mol/L的ALD甚至起到抑制作用。结论:ALD可促进FCFS的细胞增殖,其增殖程度随浓度升高而升高;ALD在一定浓度范围内可以促进COL1A1和COL3A1表达,高浓度ALD对两种分子表达具有抑制作用。     

α粒子诱发 BEP2D细胞转化过程中肺癌相关基因表达的 cDNA Microarray研究

目的：探讨辐射诱发人支气管上皮细胞（BEP2D）转化过程中肺癌相关基因的表达。方法：用Cartesian PixSys5500cDNA Microarray点样仪将60个肺癌相关基因以微阵列形式点布于醛基化的玻璃片上。提取α离子辐射前BEP2D细胞（原代）和α粒子辐射后20代、35代细胞总RNA,经长片段反转录和线性扩增标记成荧光探针后与微阵列中cDNA进行杂交。结果：原代细胞中检测到40个基因表达;20代检测到47个基因表达;35代检测到20个基因表达。所检测的基因中,抑癌基因的mRNA丰度的原代和20代后细胞中急剧下降;大多数癌基因的表达丰度在20代以后细胞中仅轻微下降;生长因子类基因大都在20代细胞表达。结论：在辐射诱发的人支气管上皮转化细胞中,抑癌基因的失活可能与细胞恶化有关,癌基因及生长因子类基因可能促进了细胞的转化。     

薄层色谱法纯化卟啉锰修饰的TFO

目的 筛选分离纯化卟啉锰-TFO-吖啶化合物的简单有效的方法。方法 以固相亚磷酰胺法合成吖啶，6碳氨基连接臂修饰的TFO，并以温和法切割和脱保护；四苯基卟啉四羧酸经金属化，酯化后，与上述TFO偶联；分别以变性聚丙酰胺凝胶电泳，寡核苷酸纯化柱，薄层色谱法分离纯化偶联反应产物。结果 以凝胶电泳分离偶联反应产物时，偶联反应产物带，卟啉锰活性酯带位于同一水平，未分离出独立的卟啉锰-TFO-吖啶化合物带，以寡核苷酸纯化柱分离偶联反应产物时，紫外分光光度仪检测结果显示，回收物仍为卟啉锰-TFO-吖啶化合物与游离的卟啉锰活性酯的混合物。以薄层层析分离偶联反应产物时，在卟啉锰活性单酯带后，出现一条绿色月牙型带，紫外光光谱分析显示，此带回收物同时具有寡核苷酸和卟啉锰的特征吸收峰（UVλmax=260,468nm)。质谱分析结果证实，回收物分子量实测值与卟啉锰-TFO-吖啶化合物理论一致。结论 薄层色谱法可简单有效分离纯化卟啉锰-TFO-吖啶化合物。     

反义：衰而未败

20年来,反义核酸药物的发展非常缓慢,仅有一个反义药物进入市场,其他大部分都在Ⅲ期临床试验中遭遇失败,有关反义新药的申请也很快被FDA驳回。人们开始把目光投向竞争RNA技术平台尤其是小干扰RNA,这是否意味着反义核酸药物没有发展前途了呢?本文就反义药物的发展现状、发展前途以及可能突破现状的切入点作了详细分析,为反义药物的继续发展指出了方向。     

反义寡核苷酸药代动力学研究中的定量分析技术

反义寡核苷酸药物的药代动力学研究要求具备相应的生物定量方法。本文就近年来在临床前和临床药代动力学评价中常用的几种定量方法，包括放射性同位素法、毛细管凝胶电泳法、高效液相色谱法、液质联用和基于杂交技术的酶联免疫法，对其各自的特性、应用前景、操作方法及局限性等方面进行了综述。     

四物汤及其提取物对辐射致血虚证小鼠造血作用的研究

[目的]探讨四物汤及其提取物治疗辐射致血虚证小鼠的作用机制和有效物质基础。[方法]γ射线全身照射小鼠制成血虚证模型,观察四物汤对其外周血和造血祖细胞集落的影响,基因芯片检测有效单体芍药苷的分子作用机制。[结果]四物汤、正丁醇提取物、水溶提取物对血虚证小鼠外周的白细胞的恢复有明显促进作用;四物汤和芍药苷增强血虚证小鼠骨髓造血干祖细胞的集落形成能力;芍药苷可促进骨髓基质细胞分泌造血因子(G-CSF,GM-CSF,PDGF-α)等,抑制造血抑制因子(M-CIP)的分泌。[结论]四物汤补血的物质基础可能是芍药苷,促进骨髓基质细胞分泌G-CSF,GM-CSF,PDGF-α等造血因子可能是四物汤补血的作用机制之一。     

SARS冠状病毒CT基因型发现及相关特征

目的 研究SAPS冠状病毒基因型及相关特征。方法 对杭州市首例SAPS病人分离的SAPS冠状病毒ZJ01株进行全基因组测序，并在GenBank数据库登录。记录号：AY297028，版本号：gi：30910859。整个全基因组由29715bp组成。使用GeaBank数据库中最新登陆的SARS病毒的基因组进行序列比对、突变点分析和多态性分析、特殊片段的系统进化分析。结果 发现在ZJ0l株的9391、17555、21712、22213和27819位点，分别是T、T、G、T和T核苷酸碱基，和CenBank数据库中的其他SARS冠状病毒株比较，除第l、2、4和5突变位点(C：G：C：C／T1 T1 T2 T)之外，发现在21712位点(第3个)A／G突变也参于这一遗传标识。因此我们提出5个突位点将17株病毒分为两种基因型的新概念，即C：G：A：C：C与T：T：G：T：T两型，简称C型和T型。ZJ01病毒株属于T基因型．在中国大陆内地是首次发现和发表。突起蛋白基因片断的进化树分析，广州的GZ01 C基因型株进化距离和其他病毒株相差甚远；比较而言，和C基因型BJ0l、CUHK-Wl病毒株较为接近，其次是T基因型的Fl和F2组。5个突变位点(C：G：A：C：C／T：T：G：T：T)的两个发生在编码突起蛋白(S)的基因中，分别是A／G和C／T突变，由此引起的突起蛋白(S)氨基酸变化是Asp／Gly(天门冬氨酸／甘氨酸)和Thr／Ile(苏氨酸／异亮氨酸)。结论 这些基因型特征和变异是否会引起生物学及临床症状的差异是非常值得重视的。     

新月弯孢霉对重楼皂苷的生物转化

目的寻找选择性水解甾体皂苷C-3位糖链末端糖基的微生物,同时制备甾体皂苷的去糖基衍生物。方法利用新月弯孢霉(3.438 1)培养,对C-3位有双糖基结构的甾体皂苷类化合物重楼皂苷Ⅴ(化合物Ⅰ)、重楼皂苷Ⅵ(化合物Ⅱ)进行生物转化;用反相C18开放柱进行转化产物的分离纯化,波谱方法鉴定其结构。结果新月弯孢霉(3.438 1)均能将化合物Ⅰ和化合物ⅡC-3位糖链末端的鼠李糖水解,转化为单糖基皂苷,转化产物分别鉴定为薯蓣皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷,即延龄草苷(trillin,化合物Ⅲ)和偏诺皂苷元-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(化合物Ⅳ)。结论首次发现新月弯孢霉(3.438 1)对重楼皂苷Ⅴ和重楼皂苷ⅥC-3位糖链的末端鼠李糖具有较强的水解能力。     

反义寡脱氧核苷酸抑制丁型肝炎病毒基因链核酶活性的作用

目的探讨反义寡脱氧核苷酸（ａｓＯＤＮ）抑制丁型肝炎病毒（ＨＤV）核酶活性以阻断ＨＤＶ复制的作用，方法在构建含ＨＤＶ基因链和抗基因链核酶ｃＤＮＡ片段的重组质粒ｐＨＤＶｒｚ２７７的基础上，体外转录出１１２聚核苷酸（ｎｔ）的基因链核酶，观察５条ａｓＯＤＮ抑制核酶活性的作用，并对作用最好的一条进行序列优化。结果 互补于６８３－７０３ｎｔ的自裂位点和茎样结构（ｓｔｅｍ）１区的ａｓＯＤＮ可完全抑制该１１２ｎｔ核酶的活性，互补于７５６－７７０ｎｔ（ＳＳｒＢ区）和７２１－７３５ｎｔ（ＳＳｒＡ区）的ａｓＯＤＮ亦有较高活性，抑制率分别为６９．３６％和４８．６４％，而对应于７３６－７５０ｎｔ（ｓｔｅｍｗ区）和７０４－７２０ｎｔ＜ＳＳｒＣ区）者几乎无抑制作用。对互补于６８３－７０３ｎｔ的ａｓＯＤＮ进行序列优化发现，封闭自裂位点在内的１３ｎｔ（６８３－６９５ｎｔ）的ａｓＯＤＮ仍保留很高抑制作用，抑制率大于９０％。结论ｓｔｅｘｎｌ和ＳＳｒＢ在基因链核酶中起重要作用，ａｓＯＤＮ可有效抑制ＨＤＶ基因链核酶活性。