双特异性抗体对LAK细胞增殖和细胞毒作用影响的体外研究

LAK细胞过继免疫治疗恶性肿瘤具有一定的疗效，南于不能特异性识别和攻击靶细胞影响了LAK细胞的治疗效果进一步提高。双特异抗体能同时识别效应细胞和靶细胞，使其特异地结合，选择性地将靶细胞杀死，本研究应用化学偶联剂SPDP将鼠源抗CD3与抗HBs连接得到化学嵌合双特异性抗体，     

骨髓移植诱导大白兔特异性免疫耐受模型的建立

目的通过供体与受体的骨髓移植来诱导受体对供体的特异性免疫耐受。方法30只雄性和30只雌性新西兰大白兔分别作为供者和受者,随机配对,将30对大白兔再随机分为5组,即无处理对照组、单纯照射组、单纯骨髓移植(BMT)组、实验组(照射+BMT)和无关皮肤供体对照组,每组6对。受者给予7Gy的全身照射(TB I),24小时后耳缘静脉输注骨髓单个核细胞,5天后再次回输相同供者的骨髓单个核细胞,两次总的细胞数量为l~1.5×108/kg,在第二次回输细胞的同时,移植皮肤。观察皮肤移植存活时间、对第三方皮肤的排斥反应及对供体的单向混合淋巴细胞反应,并用多聚酶链式反应(PCR)检测嵌合体的形成。结果单纯照射和骨髓移植不能延长移植物的存活时间,也没有形成供受者混合嵌合;实验组皮肤移植物存活时间(45.83±3.97 d)比无处理对照组(10.83±0.75)、单纯照射组(12.5±1.0488)、单纯骨髓移植组(11.33±0.8165)、无关皮肤供体对照组(12.17±1.169)明显延长(P<0.01)。结论对大白兔模型,采用全身照射加大剂量骨髓移植的方法,可形成较长时间的混合嵌合,并获得一定程度的特异性免疫耐受。     

HIV-Ⅰ CN54株gagprotease基因嵌合脊髓灰质炎病毒cDNA质粒的构建和表达研究

目的 构建HIV-1 CN54株gagprotease基因嵌合脊髓灰质炎病毒cDNA的表达质粒，并鉴定、检测基因及其表达。方法 用PCR技术获得人免疫缺陷病毒CN54株的gagprotease基因，并使其两端带上合适的酶切住点，将其定向插入到包含脊髓灰质炎病毒cDNA的表达质粒pSVA14中，替代其部分结构基因，构建HIV基因嵌合缺陷性脊髓灰质炎病毒基因组的表达质粒。经筛选、鉴定后用脂质体转染技术将新构建的质粒转入Hela细胞内，用Western Blot方法检测目的基因在Hela细胞内的表达。结果 PCR技术扩增所得的人免疫缺陷病毒CN54株gagprotease基因经琼脂糖凝胶电泳、DNA测序证实成功获得，未引入突变碱基，筛选、鉴定证明gagprotease基因被正确定向插入到脊髓灰质炎病毒的cDNA序列之中，Western Blot检测到gagpro-tcase基因正确表达了相关蛋白。结论 成功构建了表达人免疫缺陷病毒CN54株gagprotease基因的缺陷性脊髓灰质炎病毒基因组嵌合质粒，为利用脊髓灰质炎病毒作人免疫缺陷病毒基因的表达载体奠定了基础，此研究对开发以脊髓灰质炎病毒为艾滋病的疫苗载体有重要意义。     

戊型肝炎病毒嵌合蛋白的免疫应答的初步研究

目的：对含有HEV主要抗原表位的嵌合蛋白进行表达与纯化，并对其免疫原性进行研究。方法：将含有一段HEV ORF2基因片段（394-660aa）和HEVORF3全基因的表达质粒pHEV23在大肠杆菌中进行异丙基硫代半乳糖苷（IPTG）诱导表达，其表达产物经Ni^2＋-NTA树脂亲和纯化，透析复性。纯化蛋白免疫小鼠，用ELISA检测小鼠血清IgG抗体，T细胞增殖反应检测细胞免疫应答。以Western-blot检测纯化蛋白对患者阳性血清的免疫反应性。结果：纯化蛋白的分子量为55KDa，纯度达90％以上；实验组特异性抗体水平明显高于对照组；T细胞增殖反应实验组与对照组比较有极显著性差异。纯化蛋白能与患者阳性血清呈特异反应。结论：嵌合蛋白具有良好的免疫原性和免疫反应性，为进一步研究开发HEV诊断试剂盒及基因工程疫苗提供了基础。     

HIV多抗原位点串联基因的表达及活性鉴定

目的在原核表达载体系统中对HIV—1／2型外壳蛋白多个抗原位点串联基因进行表达、纯化并鉴定其活性。方法人工合成含HIVgp41的2个抗原位点、gp120的3个群的各3个抗原位点及gp36的2个抗原位点的串联基因，克隆到原核表达载体pRSETB中，构建重组表达质粒pRSETB-env，异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其在大肠埃希菌BL21(DE3)中高效表达，利用固化金属离子配体亲和层析技术纯化表达蛋白．利用逐渐降低尿素浓度透析法使目的蛋白复性。用免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定。结果目的基因在BL21中有较高表达率，纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠．聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见一条约32KD的蛋白带．与设计分子量相符。免疫印迹、ELISA试验显示该表达蛋白可与HIV患者血清较好结合．而与其它患者血清无交叉反应。结论成功构建了由HIV外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env，并在原核细胞中高效表达，表达蛋白经一步纯化后纯度较高．并具有良好特异性和活性。     

Herceptin治疗HER-2过度表达乳腺癌的现状

对Herceptin进行的Ⅰ～Ⅲ期临床试验已经证实 ,在HER 2过度表达的既往化疗失败的晚期乳腺癌患者中 ,其单药有效率为 15 % ,缓解期为 9.1个月 ,生存期为 13个月 ;Herceptin能增加化疗及内分泌治疗的疗效 ,不良反应轻且易耐受 ,无剂量限制性毒性 ,是一种高效、低毒的新型抗癌药     

骨髓输注联合共刺激阻断诱导免疫耐受的研究进展

诱导移植器官受者特异性免疫耐受是解决目前长期使用免疫抑制剂带来的一系列不良反应及其对移植器官慢性排斥反应最终的手段。骨髓输注诱导嵌合体的形成和共刺激信号的阻断,是目前诱导免疫耐受最为看好的途径。现就骨髓输注与共刺激信号阻断诱导免疫耐受形成的机制、策略和临床应用进行综述。     

DNA嵌合类抗癌药的研究进展

核酸贮存着生物体生命活动有关的信息,这些信息指导着细胞的生长、分化、代谢、遗传和变异。核酸的结构和功能的干扰可引起细胞行为的显著变化。除了极少数微管蛋白结合物以外,绝大多数抗癌药物都直接或间接地影响脱氧核糖核酸(DNA)的代谢,包括合成、复制和转录等过程,而DNA嵌合类型的抗癌药以DNA为直接靶点,一直受到关     

FK506预处理下骨髓移植诱导同种异体小鼠皮肤移植耐受的实验研究

目的探讨短期大剂量FK506作为宏嵌合诱导供体特异性耐受中,骨髓移植前对受体预处理方法的可行性及临床实用性. 方法 100只雄性C57BL/6和60只雌性BALB/C小鼠分别作为皮肤移植的供体和受体,雄性ICR小鼠15只作为无关第三品系用以检测移植耐受状态的特异性.将60只受体小鼠随机分为5组,即无处理对照组、单纯FK506组、单纯骨髓细胞移植(BMT)组、实验组(FK506 BMT)和无关供体对照组,每组12只.FK506诱导及维持方案是皮肤移植前对受体小鼠先给予大剂量FK506腹腔注射(3 mg/kg×2 d),移植当天尾静脉输注2×107个骨髓细胞,再以小剂量FK506(0.5 mg/kg×7 d)短期维持治疗.观察皮肤移植存活时间、对第三方皮肤的排斥反应及对供体鼠的单向混合淋巴细胞反应,并用多聚酶链式反应(PCR)检测嵌合体的形成. 结果常规剂量的骨髓输注或短期FK506治疗并不能延长移植物的存活时间,也没有宏嵌合形成.实验组皮肤移植物存活时间(24.0±1.5)d比无处理对照组(9.6±1.1)d、单纯FK506组(10.5±1.6)d、单纯骨髓细胞移植组(10.3±1.5)d、无关供体对照组(9.8±1.1)d明显延长(P<0.05).混合淋巴细胞反应实验组供者特异性抑制率80.55%±14.10%明显高于单纯FK506组38.65%±12.43%及单纯骨髓细胞移植组35.41%±8.99%(P<0.05),实验组宏嵌合呈阳性. 结论采用短期大剂量FK506这一温和的非照射预处理方法,可获得一定程度的免疫耐受,延长移植物存活.移植前输注供体骨髓细胞能够促进宏嵌合的形成及移植物的存活.