TLR4干扰RNA腺病毒的构建及其对肺泡巨噬细胞内毒素反应的影响

目的 构建表达大鼠TLR4 siRNA的腺病毒,并观察对内毒素诱导的大鼠肺泡巨噬细胞TLR4的抑制和TNF-α、IL-10释放的影响.方法合成双链寡核苷酸并克隆人pShuttleH1载体,pShutdeH1-TLR4线性化后电转化到含pAdEasy-l的BJ5183感受态细菌中获取重组质粒,重组质粒用脂质体转染293细胞获取重组腺病毒Ad-siTLR4;扩增、纯化腺病毒,TCID50法测定病毒滴度.原代培养大鼠肺泡巨噬细胞,腺病毒Ad-siTLR4感染后加入内毒素,采用RT-PCR和Westem blot观察TLR4蛋白及mRNA的表达,ELISA检测TNF-α、IL-10的释放情况.结果目的基因序列正确并成功克隆人腺病毒,腺病毒Ad-siTLR4滴度为5.72×109 pfu/mL.转染腺病毒后的内毒素诱导的肺泡巨噬细胞TLR4蛋白和mRNA水平下降,TNF-α、IL-10的表达均明显减弱.结论本研究成功构建了表达大鼠TLR4 siRNA的腺病毒,具有良好的抑制TLR4和TNF-α、IL-10的作用,为下一步动物体内实验基因治疗急性肺损伤奠定良好的基础.     

TRPV1/TRPA1对小鼠子宫内膜异位症炎症及疼痛的作用

目的 探讨瞬时受体电位锚定蛋白1(transient receptor potential ankyrin 1,TRPA1)和瞬时受体电位香草酸1(transient receptor potential cation channel subfamily Ⅴ member 1,TRPV1)异聚体在子宫内膜异位症(简称内异症)小鼠子宫内膜组织中的表达及其与内异症缩宫素介导的疼痛的相关性,同时研究TRPA1和TRPV1对炎症因子的影响。方法 建立小鼠内异症模型,予以TRPA1激动剂肉桂醛和TRPA1拮抗剂HC-030031给药干预。疼痛行为学实验检测内异症小鼠扭体次数;ELISA检测血液及腹腔灌洗液炎症因子含量;实时荧光定量PCR及Western blot检测TRPV1/TRPA1基因和蛋白表达;免疫荧光检测TRPV1/TRPA1共定位。结果 在内异症模型小鼠中,TRPV1/TRPA1基因和蛋白表达上调,TRPA1激动剂肉桂醛上调TRPV1表达,TRPA1抑制剂HC030031抑制TRPA1的表达。肉桂醛对缓解小鼠内异症疼痛的作用较小,HC030031对疼痛的缓解作用显著。内异症小鼠血清及腹腔灌洗液IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α,TNF-α)和前列腺素(prostaglandin E2,PGE2)的含量显著升高,肉桂醛进一步促进这种作用,而HC030031显著抑制内异症小鼠血清及腹腔灌洗液炎症因子的含量。结论 TRPV1、TRPA1为内异症中感知炎症并进行传导的通道;TRPV1/TRPA1异聚体可能有利于响应炎症微环境,进行信号传导,增强疼痛感。     

高渗氯化钠羟乙基淀粉40注射液高容量血液稀释对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的影响

Objective To investigate the effects of hypervolemic hemodilution (HH) with hypertonic saline plus hetastarch solution 40 injectio on hepatic ischemia-reperfusion (I/R) injury in rats. Methods Thirty male Wistar rats weighing 300-350 g were randomly divided into 3 groups ( n = 10 each): group I sham operation (group S); group II I/R and group Ⅲ HH. Partial liver ischemia was produced by clamping hepatic portal vein and left arteria hepatica for 30 min with atraumatic mini-clamp, followed by 2 h of reperfusion in I/R group and HH group. In HH group the animals were infused hypertonic saline plus hetastarch solution 40 injectio 10 ml/kg through vena caudalis over 30 min and then hepatic I/R was performed IS min after the infusion.The animals were killed at 2 h of reperfusion. The left liver was removed and blood sample was taken from inferior caval vein for determination of (1) serum alanine amino transferase (ALT) and aspartate amino transferase (AST) activities; (2) superoxide dismutase ( SOD) activity and malondialdehyde ( MDA) content in the liver; ( 3 ) microscopic examination. Results The serum ALT and AST activities and MDA content in the liver were significantly higher, SOD activity in the liver significantly lower after hepatic I/R and pathological changes in the liver severer in group I/R and HH than in group S. The serum ALT and AST activities and MDA content in the liver were significantly lower, SOD activity in the liver significantly higher after hepatic I/R and pathological changes in the liver milder in group HH than in group I/R. Conclusion Hypervolemic hemodilution with hypertonic saline plus hetastarch solution 40 injectio can ameliorate hepatic I/R injury by decreasing oxygen free radical production in rats.     

慢性疼痛的基因治疗

疼痛不仅给患者带来难以忍受的痛苦,同时也给社会发展和家庭和谐增添了无形的阻力。但令人失望的是,常规的治疗方法中没有一种能在目前为止的疼痛治疗中获得令医师和患者都非常满意的疗效,每种方法都存在一定的缺陷以及令医患双方都头痛的不良反应。因此,长期以来国内、外许多学者都在做着不同的努力,希望能找到既长效又无不良反应的治疗方法。     

肝移植术病人胰岛素复合葡萄糖预先给药对新肝再灌注后高钾血症的作用

高钾血症是原位肝移植手术中常见的并发症，而新肝再灌注即刻血钾可高达7-8mmol/L以上，尤其在病人肾功能不全的情况下临床表现更凶险，可导致严重的心律失常，甚至发生心跳骤停。因此，防治再灌注后高钾血症对于肝移植麻醉管理尤为重要。胰岛素复合葡萄糖能降低健康人和肾衰病人的血钾水平，但肝功能失代偿的病人常有“胰岛素抵抗”，而且胰岛素能否控制新肝再灌注后的高钾血症尚无定论。本研究拟通过观察无肝期预先应用胰岛素和葡萄糖对新肝再灌注后血钾水平的影响，为临床治疗提供理论依据。     

氯胺酮对离体大鼠肝细胞的毒性作用

应用离体大鼠肝细胞模型研究氯胺酮的肝毒性。氯胺酮能抑制以丙氨酸为底物的肝细胞糖异生的作用，这种抑制作用具有剂量相关性。氯胺酮对肝细胞应用葡萄糖合成乳酸的作用无抑制作用。这种静脉麻醉药无促进离休鼠肝细胞释放钾离子、谷雨转氨酶、乳酸脱氢酶的作用。结果提示，即使大于临床麻醉剂量１０倍以上的氯胺酮，对肝细胞仍是安全的。     

吸入麻醉药对鼠肝线粒体电子传递链的影响

在含有不同浓度氟烷、安氟醚、异氟醚及七氟醚的离体鼠肝线粒体的反应体系中，用双波长双光束分光光度计测定从ＮＡＤＨ和琥珀酸至细胞色素Ｃ的电子传递速率。结果显示临床浓度的氟烷明显抑制ＮＡＤＨ－ＣｙｔＣ－还原酸的活性。而其对ＮＡＤＨ脱氢酶、ＮＡＤＨ－ＣｏＱ－还原酶的活性及琥珀酸链酶系统无明显的抑制作用。安氟醚、异氟醚及七氟醚对鼠肝线粒体电子传递链无明显影响。结果提示氟烷影响ＮＡＤＨ相关底物的利用通过阻断Ｎ     

炎症诱导性表达载体的表达特性

目的：构建一种具有自控性的炎症诱导性表达载体，为探索符合临床实际的抗炎基因治疗新系统奠定基础，方法：（1）将对炎症敏感的SAA3启动子调控片优现报告基因CAT片段重组，构建炎症诱导性表达载体pSAA3/CAT;(2)用脂质体转染法将表达载体pSAA3/CAT转入体外培养细胞或动物体内，观察不同时间，不同剂量的炎性刺激时报告基因的表达变化，分析SAA3启动子体内外转录活性和炎症诱导性。结果：（1）阳离子脂质体包裹表达质粒可以有效地转染肝源性细胞SMMC－7721和单核细胞源性细胞U937，经活化后的U937细胞可迅速表达CAT，6h启动，24h达峰值，72h渐降至基础水平，（2）腹腔注射脂质体包裹DNA可有效转染外源报告基因CAT在体内表达；LPS活化的基因转染小鼠肝脏中的CAT表达与一次典型的急性反应时间一致，鼠肝CAT表达水平与LPS有显著的剂量依赖关系。结论：初步建立了一种具有自控性的有效抗炎基因治疗新系统。     

氟烷,七氟醚对酶诱导,缺氧大鼠肝细胞钙平衡的影响：钙离子…

雄性Ｓｐｒａｇｕｅ－Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）大鼠饮用含苯巴妥（１ｍｇ／ｍｌ）的水一周后，随机分为６组，分别吸入下列气体１小时：ＮＣ，２１％Ｏ２／７９％Ｎ；ＨＣ，１４％Ｏ２／８６％Ｎ；ＮＳ，２１％Ｏ２／Ｎ２／１。２ＭＡＣ七氟醚；ＨＳ，１４％Ｏ２／Ｎ２／１。２ＭＡＣ七氟醚；ＮＨ，２１％Ｏ２／Ｎ２／１。２ＭＡＣ氟烷；ＨＨ，１４％Ｏ２／Ｎ２／１。２ＭＡＣ氟烷。２４小时后用草酸钾－焦锑酸钾沉淀法对肝脏钙离子进行