幽门螺杆菌脂蛋白基因的克隆和生物信息学分析

目的完成幽门螺杆菌(Hp)郑州分离株MEL-HP27脂蛋白(lipoprotein)基因lpp20的克隆和测序;分析该基因序列的变异性和表达蛋白的化学及免疫学特征,为Hp疫苗抗原的筛选奠定基础。方法用PCR方法从MEL-HP27的染色体DNA中扩增lpp20基因片段,将其与载体pNEB193连接后,用于转化大肠杆菌JM109,通过酶切和测序鉴定重组质粒。应用生物信息学软件Omiga2.0、GeneDoc2.3和GenBank、Swiss-port数据库对7个Hp菌株(MEL-HP27、60190、Chongqing、CH-CTX1、J99、17874、26695)的lpp20基因序列进行同源性比较,并对该基因编码蛋白的主要化学特征和抗原结构域进行分析。结果Hplpp20基因的核苷酸序列长度为528bp,不同菌株间的同源性为96.0%~98.1%。lpp20基因编码的氨基酸序列长度为175aa,不同菌株间的同源性为98.3%~100%。MEL-HP27lpp20表达蛋白的分子量为19.122kDa,等电点为9.950,具有2个抗原性结构域。结论Hplpp20基因的核苷酸序列和对应的氨基酸序列均具有较高的保守性,但保守性低于100%,采用该基因表达蛋白作为疫苗和诊断抗原时,有必要考虑人群感染的优势菌株的遗传特征,以提高免疫保护的覆盖率和免疫诊断的敏感性。Hplpp20基因编码的蛋白具有典型抗原分子的结构特征,有望成为Hp疫苗候选抗原。     

幽门螺杆菌融合蛋白HspA-UreB在大肠杆菌中的温控表达及其免疫反应性检测

目的：在温控表达载体pBV220中实现幽门螺杆菌(H．pylori)融合蛋白HspA-UreB的表达,并研究其免疫反应性。方法：含重组表达质粒pBV-HU27的人肠杆菌DH5α经30℃增菌后,存42℃下诱导表达,SDS-PAGE分析融合蛋白表达含量,与H．pylori全菌免疫小鼠血清和H．pylori感染患者血清进行Western blot分析,检测融合蛋白的免疫反应性。结果：SDS-PAGE分析结果显示存76500处出现特异蛋白带,诱导4h即可达到最高量,融合蛋白HspA-UreB占全菌蛋白含量的10％,该融合蛋白可以被H．pylori免疫小鼠血清和H．pylori阳性患者血清中的相应抗体所识别。结论：H．pylori融合蛋白HspA-UreB可以在温控表达载体中正确表达,且具有良好的免疫反应性。