菌根真菌诱导的铁皮石斛根差减cDNA文库构建

 目的 构建菌根真菌共生诱导的铁皮石斛根的差减cDNA文库,从中筛选出差异表达基因。方法 采用SMARTer PCR cDNA合成方法直接以总RNA为模板合成并富集稀少cDNA,再利用抑制消减杂交（SSH）方法构建受菌根真菌共生诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库。结果 成功构建了受菌根真菌诱导铁皮石斛根的差减cDNA文库,共获得1 975个阳性克隆。经检测,90%以上克隆能扩增出有效产物,其插入片段大小在150~1 000 bp之间。随机挑取了20个克隆菌液测序并进行了比对分析,大部分为植物应对环境胁迫防御性基因。结论 该技术体系所构建的差减cDNA文库质量较好,操作方便,尤其适用于珍稀濒危的植物材料。     

基于响应曲面分析法的不同配比桃仁-大黄活血化瘀效应相互作用研究

目的比较评价桃仁-大黄药对(PS-RRR)不同配比对急性血瘀模型大鼠血液流变学和凝血功能的影响,揭示PS-RRR活血化瘀效应相互作用的范围、性质与程度。方法采用冰水浴与注射盐酸肾上腺素方法复制大鼠急性血瘀模型,给予不同配比(0∶1、1∶5、2∶5、2∶3、1∶1、3∶2、5∶2、5∶1、1∶0)PS-RRR后,通过测定全血黏度(WBV)、血沉(ESR)、红细胞聚集指数(EAI)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、纤维蛋白原(FIB)、凝血酶时间(TT),观察其对血瘀大鼠血液流变学、凝血指标的影响。采用响应曲面分析法和多指标综合指数法对PS-RRR不同配比的总活血化瘀效应进行综合比较分析。结果 PS-RRR配比在2∶3~3∶2表现出明显的协同作用(协同作用强度为-0.8);在桃仁(PS)剂量5.5~10 g,大黄(RRR)剂量2.1~5.8 g,表现出拮抗作用(拮抗作用强度最大为0.6);而其他比例并未表现出明显的协同或者拮抗作用。结论初步揭示了PS-RRR活血化瘀效应相互作用的范围、性质与程度,且PS-RRR活血化瘀作用的最佳配比与临床中医方剂中使用PS-RRR配比1∶1频次最高的结论相一致。     

铁皮石斛蔗糖转运蛋白基因的分离和表达分析

目的分离珍稀濒危药用植物铁皮石斛蔗糖转运蛋白(sucrose transporter,SUT)基因(DoSUT1)并进行生物信息学和表达模式分析。方法采用RT-PCR和RACE技术获基因全长;利用生物信息学软件预测蛋白的理化性质、结构域和亚细胞定位等分子特性;用DNASTAR 6.0和MEGA4.0分别进行氨基酸多序列比对和进化关系分析;借助实时定量PCR检测基因表达模式。结果分离到DoSUT1(GenBank注册号KF876842),cDNA全长1920bp,编码一条由538个氨基酸组成的多肽,相对分子质量57 400,等电点9.61;DoSUT1蛋白含12个跨膜域,具有高等植物蔗糖/H~+共转运家族和协助扩散超家族的保守结构域(60-524、63-531);DoSUT1与多种植物SUT基因编码蛋白有较高的一致性,与玉米、大麦等单子叶植物SUT亚家族中的SUT4聚类在一起;DoSUT1基因具有组织表达特异性,其转录本在石斛叶和茎中表达量较高,分别为根中的2.783和2.150倍。结论 DoSUT1基因的分子特征为进一步研究其在铁皮石斛糖代谢调控中的作用奠定基础。     

HPLC法同时测定不同采收期珠子参中5种皂苷类成分含量

目的:建立不同采收期珠子参中人参皂苷Rg1、人参皂苷Ro、竹节参皂苷Ⅳa、姜状三七苷R1以及去葡萄糖竹节参皂苷Ⅳa 5种化学成分的含量测定方法.方法:采用Thermo C18(5μm,4.6 mm×250 mm)色谱柱;以0.02％的磷酸水溶液和乙腈进行梯度洗脱;柱温30℃;流速1 mL·min-1;检测波长203 n...     

白芍中芍药苷提取方法的比较研究

目的优选白芍中芍药苷的提取方法。方法以白芍根粉为原料,采用平行试验比较了溶剂回流提取法、亚临界水法和酶法对芍药苷的提取率的影响差异。结果表明溶剂回流提取法和酶法提取芍药苷的提取率均高于亚临界水法提取芍药苷;酶法芍药苷提取率比乙醇和水回流提取法高,但是略低于甲醇回流提取法的提取率。结论酶法提取芍药苷中,纤维素酶添加量为420 u/g芍药粉时芍药苷的提取率最大,达2.76%;果胶酶添加量为4400 u/g芍药粉时,芍药苷提取率达2.62%。     

参龙健脑胶囊对脑缺血损伤大鼠海马区胆碱 乙酰基转移酶表达的影响

目的:探讨参龙健脑胶囊对脑缺血损伤大鼠脑保护作用及对海马区胆碱乙酰基转移酶(ChAT)表达的影响。方法:采用结扎双侧颈总动脉制备脑缺血模型,参龙健脑胶囊低、高剂量组和吡拉西坦组剂量分别为0.4,1.2,0.45 g.kg-1,ig 1次/d。ig 28 d后观察神经功能并评分、脑病理组织切片并应用免疫组织化学染色法观察ChAT在缺血脑损伤大鼠海马区的表达。结果:模型组大鼠神经功能缺损明显(P<0.05),海马区ChAT表达减少(P<0.01);与模型组相比,参龙健脑胶囊治疗组大鼠的神经功能缺损改善(P<0.05),大鼠海马区ChAT表达显著增加(P<0.01,P<0.05)。结论:参龙健脑胶囊对脑组织损伤的保护作用与其促进脑组织ChAT表达密切相关。     

参龙健脑胶囊对脑缺血大鼠模型海马CGRP表达的影响

目的探讨参龙健脑胶囊对脑缺血损伤大鼠脑组织海马区降钙素基因相关肽（CGRP）表达的影响。方法用结扎双侧颈总动脉制备缺血性脑损伤大鼠模型,造模成功后随机分为假手术组、模型组、脑复康组及参龙脑胶囊高、低剂量组。灌胃28d后,应用免疫组织化学染色法观察CGRP在缺血脑损伤大鼠海马区的表达。结果与模型组相比,参龙健脑胶囊组大鼠海马区CGRP表达增加。结论参龙健脑胶囊对缺血性脑损伤的保护作用与其促进脑组织CGRP表达密切相关。     

医用透明硅胶膜在尿道下裂手术伤口包扎中的应用

目的探讨医用透明硅胶膜（Mepitel）作为尿道下裂手术后阴茎包扎敷料的特点和优势。方法2007年7月至2008年10月作者对35例尿道下裂手术患儿采用Mepitel作为术后阴茎包扎材料,对42例尿道下裂手术患儿采用尼龙纱布作为包扎材料。77例患儿均伴不同程度阴茎下弯,均行一期尿道成形术,手术由同一名医师完成,手术方式包括MAPGI、0nlayDuckett、Mathieu、Snodgrass以及Duckett＋Duplay术等。比较两种材料包扎阴茎所需时间、拆除包扎时间、拆除时疼痛程度、拆除后创面残留分泌物、术后阴茎瘢痕以及并发症等方面的差异。结果两组阴茎包扎时间差异无统计学意义[（2．44±0．83）min vs（2．22±0．60）min,F=5．511,t=1．322,P=0．191）],拆除包扎时间差异有统计学意义[（1．22±0．67）min vs（4．85±2．90）min,F=22．228,t=-7．864,P=0．000）]。拆除包扎后创面残留分泌物：Mepitel组6例,尼龙纱组19例,差异有统计学意义（x2=6．873,P=0．009）。拆除包扎过程中患儿疼痛评分：Mepitel组优于尼龙纱组[（3．37±1．78）分似（5．794-1．97）分,F=0．726,t=-5．588,P=0．000）],术后并发症：Mepitel组6例,尼龙纱组12例,差异无统计学意义（x2=1．392,P=0．238）。术后3个月阴茎外观基本无瘢痕：Mepitel组28例（80％）,尼龙纱组22例（52．4％）,差异有统计学意义（x2=6．396,P=0．011）。结论Mepitel作为尿道下裂手术后阴茎包扎敷料具有损伤小,痛苦小,易操作的优点。     

参龙健脑胶囊对脑缺血大鼠脑组织谷氨酸及N-甲基-D-天冬氨酸受体表达的影响

目的观察参龙健脑胶囊对脑缺血损伤大鼠脑组织谷氨酸（Glu）、N-甲基D-天冬氨酸受体（NMDAR）表达的影响,探讨其神经保护机制。方法结扎双侧颈总动脉制备缺血性脑损伤大鼠模型,模型成功后随机分为假手术组、模型组、脑复康组及参龙健脑胶囊低、高剂量组,参龙健脑胶囊低、高剂量组和脑复康组分别按照0.40、1.20、0.45 g/kg剂量给药,每日灌胃1次,连续28 d。采用比色法观察Glu在大鼠脑组织中的含量,免疫组化方法观察NMDAR亚单位NR1在海马区的表达。结果与模型组大鼠比较,参龙健脑胶囊组大鼠脑组织中Glu含量明显降低（P〈0.01,P〈0.05）,海马区NR1表达减少（P〈0.01）。结论参龙健脑胶囊对缺血性脑损伤的保护作用可能与其抑制脑缺血后脑组织中Glu的释放、减少NR1的表达密切相关。