高脂饮食诱导的肥胖早孕小鼠子宫内膜蜕膜反应受损

目的： 探讨高脂饮食诱导的肥胖对小鼠子宫内膜蜕膜反应的影响。 方法： 将12只4周龄健康C57BL/6J雌性小鼠随机分为高脂组和对照组（每组6只）,分别饲喂高脂 （22?kJ/g）、 正常 （16?kJ/g） 饲料12周。每周测量小鼠体重,喂养12周后测量小鼠体长、体宽并检测空腹血清三酰甘油和总胆固醇水平。将雌鼠与健康C57BL/6J雄鼠合笼交配,收集妊娠第7天子宫组织,采用苏木精-伊红染色观察子宫内膜细胞形态,Masson染色观察子宫内膜胶原纤维;采用免疫组织化学法、蛋白质印迹法检测子宫内膜蜕膜反应相关蛋白表达。分离原代小鼠子宫内膜基质细胞,油酸、棕榈酸模拟高脂环境进行干预,雌二醇、孕酮诱导细胞发生蜕膜反应后,油 红O、 Bodipy染色观察脂滴累积情况,鬼笔环肽染色观察细胞骨架,实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测蜕膜反应相关标志物的基因和蛋白表达。 结果 ：饲养12周后,高脂组体重明显高于对照组（ P <0.01）,两组体长无明显差异（ P >0.05）,但高脂组体宽显著大于对照组（ P <0.01）,血清三酰甘油和总胆固醇水平均显著高于对照组（均 P <0.05）。高脂组胚胎着床数显著少于对照组（ P <0.01）,高脂组子宫内膜基质细胞向蜕膜细胞转换缓慢且形态异常,蜕膜反应标志物骨形成蛋白（BMP）2、同源异形框A10（HOXA10）表达水平均低于对照组,其中两组HOXA10表达水平差异有统计学意义（ P <0.01）。油红O、Bodipy染色结果显示,原代小鼠子宫内膜基质细胞经高脂处理后,脂滴堆积明显增多,鬼笔环肽染色发现其细胞骨架形态异常,蜕膜反应相关基因 dtprp 、 HOXA10 以及蛋白BMP2、HOXA10、环氧合酶2的表达水平均明显低于对照组（均 P <0.05）。 结论 ：高脂饮食诱导的肥胖会损伤小鼠子宫内膜的蜕膜反应。     

小鼠胚胎白血病抑制因子基因表达研究

目的 探索白血病抑制因子（ＬＩＦ）基因在小鼠胚泡着床后有无表达。方法 采用ＲＴ－ＰＣＲ技术对孕龄５ｄ、７ｄ、１０ｄ、１２ｄ和１５ｄ的小鼠胚胎（共５０个，每组１０个）ＬＩＦ基因表达进行检测。结果 在孕龄５ｄ的二个胚胎和孕龄７ｄ的一个胚胎中检测到ＬＩＦ基因弱表达。而在孕龄１０ｄ以上的胚胎中均未发现有ＬＩＦ基因表达。结论 推测ＬＩＦ基因的表达在小鼠胚胎组织中受到限制。     

Mayven不同截短体原核表达载体的构建、表达和纯化

为了探索Mayven蛋白的功能,进一步研究多发性硬化症的发病机制,我们通过PCR扩增得到Mayven 4个不同长度的基因片段,包括片段P1(1-902 bp)、片段P2(1-523 bp)、片段P3(507-182 bp)和片段P4(887-1782 bp),将这些片段克隆至大肠杆菌表达载体pGEX-4T-2, 转化大肠杆菌BL21,并用IPTG诱导表达, 对表达产物进行SDS-PAGE及western blot方法分析,采用GST蛋白纯化系统对融合蛋白进行纯化.实验结果显示我们成功构建了4个包含不同截短体的重组融合表达质粒GST-Mayven(P1、P2、P3、P4),诱导后表达得到4个截短体的Mayven融合蛋白,其表达形式均为可溶性表达,其相对分子质量与预期相符,纯化后得到各自的目的蛋白,为后续的Mayven蛋白的功能研究奠定了基础.     

3918例遗传咨询病人的细胞遗传学研究

我们采用多种显带技术对来自遗传咨询门诊的３９１８例咨询者进行了染色体分析，检出染色体异常者１３９例（占３．５５％）；随体区及异染色质区段变异７８例（占１．９９％）。本文对遗传咨询、产前诊断与优生优教进行了讨论。     

人绒毛外滋养层细胞HTR-8/SVneo 中Toll样受体mRNA的表达及对吲哚胺2,3-双加氧酶mRNA水平的影响

目的系统检测人绒毛外滋养细胞HTR-8/SVneo中Toll样受体（TLR）mRNA的表达情况,定量分析TLRs配体刺激前后吲
哚胺2,3双加氧酶（indoleamine 2,3-dioxygenase, IDO）mRNA的表达差异。方法RT-PCR检测HTR-8/SVneo细胞中TLR 1-10
mRNA 的表达情况;实时荧光定量RT-PCR 检测TLR3、TLR4、TLR7/8、TLR9 配体刺激前后IDO mRNA 表达水平。结果
HTR-8/SVneo细胞中有IDO及TLR 1-10 mRNA表达;在48 h内IDO mRNA表达随着时间延长,呈升高趋势;IDO mRNA的表
达与培养基营养状况相关;TLRs配体刺激后,除TLR-3转录水平表达下调外,TLR-4、7、8、9 mRNA表达均上调;poly（I∶C）刺激
后IDO mRNA 表达低于正常组,IFN-γ刺激后表达高于正常组（P<0.05）。结论TLRs mRNA的表达提示该细胞具有抗感染作
用;HTR-8/Svneo细胞中IDO mRNA的表达与母胎界面营养状况相关;TLRs配体刺激剂对TLRs及IDO mRNA表达的影响不
仅验证了TLRs的功能活性,而且提示了IDO在抗病原体免疫应激中可依赖TLRs途径发挥作用。
     

nm23-M2cDNA的克隆、表达及抗体制备

目的:通过基因工程技术表达和纯化重组nm23-M2蛋白,进而制备高效价、高特异性的抗血清。方法:构建在大肠杆菌中高效表达pQE30/nm23-M2表达质粒,Ni+-NTA亲和层析纯化;用纯化蛋白免疫兔,制备抗血清并纯化,琼脂双向扩散法测效价,免疫组织化学法比较它与抗NM23-H2抗体的特异性。结果:nm23-M2cDNA序列完全正确,表达的17kD可溶性融合蛋白占菌体总蛋白45%,纯化后纯度97%以上,抗血清效价为1∶64-128,提纯后纯度在90%以上,特异性高于抗NM23-H2抗体。结论:成功构建了pQE30/nm23-M2质粒,获得高纯度重组nm23-M2蛋白(rNM23-M2),并制备了高效价、高度特异性的抗血清,为进一步研究nm23-M2基因功能和蛋白作用奠定了基础。     

sgp190与白血病抑制因子对滋养层细胞金属蛋白酶-9及抑制因子-1表达的影响

目的:探讨sgp190与白血病抑制因子(LIF)在妊娠维持中的作用。方法:体外培养滋养层细胞,分别施加LIF和/或sgp190处理后,用RT-PCR法检测金属蛋白酶-9(MMP-9)与金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)mRNA表达情况,免疫印迹法检测细胞MMP-9与TIMP-1蛋白表达水平,ELISA法测定培养上清中MMP-9与TIMP-1的浓度。结果:LIF抑制体外培养滋养层细胞中MMP-9与TIMP-1中mRNA和蛋白表达(P<0.05),而sgp190可抑制LIF的这种作用。sgp190促进MMP-9mRNA与蛋白的表达(P<0.05),但对TIMP-1mRNA与蛋白表达无影响。ELISA分析结果基本与RT-PCR和免疫印迹分析结果相同。结论:LIF和sgp190可能通过调节MMPs和TIMPs表达来影响滋养层细胞的侵袭,而sgp190在LIF功能活性调节中扮演着一定角色。