包虫病诊断抗原的纯化及诊断效价

[目的]建立一种简便快速。适合基层的包虫病诊断方法。[方法]采用简便的一步层析方法从包囊液内纯化具有诊断价值的脂蛋白抗原。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）和诊断试纸法（Dipstick法），对血清进行检测，评价其效果。[结果]ELISA检测包虫病人血清48份，阳性45份，检出率93.7%，和10份羊多房棘球蚴血清中的1份起交叉反应，而和羊细颈囊尾蚴，弓形虫，血吸虫血清不起反应，用Dipstick方法检测24份包虫病人血清，19份阳性，检出率79.2%，和其它寄生虫血清无交叉反应。[结论]本试验为包虫病诊断试剂盒的研制奠定了基础。     

单纯疱疹病毒胸苷激酶基因对肺腺癌细胞杀伤作用探讨

目的：探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶(HSV-tk)基因转染联合抗病毒药物更昔洛韦（GCV）对人肺腺癌细胞系的杀伤作用。方法：应用基因工程技术构建了携带单纯疮疹病毒胸苷激酶（HSV-tk）基因的逆转录病毒重组体pLXSN-tk，通过脂质体法转染PA317细胞，G418筛选出产重组病毒颗粒的生产细胞PA317-tk细胞。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测HSV-tk/GCV系统对人肺腺部细胞系GLC-82的生长抑制率。结果：重组逆转录病毒载体能有效地将HSV-tk基因导入GLC-82细胞系内并使其获得对GCV的敏感性。结论：肺腺癌细胞转染HSV-tk基因后，能有效地被GCV杀死。     

人肝癌高增殖率细胞筛选及致瘤特性分析

目的分离培养人肝癌组织中的高增殖率细胞并观察其生物学特性。方法无菌采集人肝细胞癌组织,切成1mm×1mm×1mm组织块并置于裸鼠肾包膜下生长3w;相同方法反复体内传代3次后,将组织块剪碎,胶原酶消化分离为单细胞悬液,接种于培养瓶中,用阿霉素（Adm）5mg／L处理72h获得抗药细胞。通过体外培养和体内生长观察该细胞的生长规律;用免疫细胞化学染色观察其表达C—kit、CDl33和甲胎蛋白（AFP）的情况。结果原代肝癌细胞直接分离培养生长较缓慢,经体内传代3次后,分离培养获得生长良好细胞,再经抗肿瘤药物阿霉素共培养后,获得耐Adm细胞。经体内生长特性观察发现,Adm筛选后,相同数量细胞的致瘤生长速度升高。经免疫组化染色分析发现,筛选后的细胞表达C—kit、AFP、CDl33。结论通过组织块体内传代、体外抗癌药物筛选,初步获得表达肝干细胞标志性抗原的高致瘤性细胞。     

Echinococcus granulosus钙结合蛋白基因的克隆和序列分析

目的：获得细粒棘球蚴Calcium-binding protein(CaBPs)基因序列资料，进行序列分析，为包虫病免疫预防研究奠定基础。方法：从包囊内获取细粒棘球蚴原头蚴（protoscolices)，提取RNA，逆转录成cDNA，用特异引物扩增CaBPs基因；并将其克隆到T载体后进行序列测定和分析。然后登录Cene/Bank数据库。结果：以cDNA为模板获得3个核苷酸长度不同的基因，分别是CaBP1为914bp,CaBP2为1095bp,CaBP3为1039bp。同源性比较结果表明：来自新疆羊源CaBPs基因序列和巴西（Brazil)羊源基因CaBPs同源性为90％以上；从cDNA获得的3个CaBPs基因序列的比较分析说明钙结合蛋白可能存在一个家族，有不同的成员组成。结论：CaBPs在E.granulosus虫体发育过程中具有十分重要的功能，到目前为止其机理尚不完全明了，CaBPs基因的获得为进一步研究其结构和功能，以及对包虫病的防治具有重要作用。     

细粒棘球蚴细胞系培育及其免疫研究

从细粒棘球蚴病人体内获取生发层和原头节作为培养材料,采用改良DMEM培养液和鼠胶原蛋白包被的培养瓶进行细胞培养,建立了适合人源细粒棘球蚴细胞体外培养的方法,并探讨棘球蚴细胞培养的制约因素。首次成功培育出一株人源细粒棘球蚴细胞系(13G-5),至1997年3月1日为止该细胞系已培养了140d,其间传了21代。该细胞系主要以成纤维型细胞为主,呈贴壁生长;用该细胞系细胞接种于昆明(Km)小鼠腹腔内,能形成具包囊样结构的类似包囊;接种鼠产生对囊液抗原的特异性抗体;ELISA能够检测出细胞系细胞代谢物中特异性抗原;该细胞系细胞和E.granulosus原头节、包囊液具有相同的EST酶带;使用该细胞系细胞的代谢物作为粗制抗原进行免疫预防接种,能使60%的Km小鼠获得完全抵抗E.granulosus感染的能力;该抗原能使43.33%～77.42%的包虫病人诊断出来。此外,检定了人源细粒棘球蚴染色体,染色体数为14～18条,并首次对其进行了G-、C-带分析。     

Genistein调节肝癌HepG2细胞Caspase3蛋白表达诱导凋亡的作用研究

目的探讨三磷酸肌醇（IP3）和Caspase3蛋白表达变化在genistein诱导肝癌细胞凋亡中的作用。方法以肝癌HepG2细胞培养72h为对照组,实验各组以60μmol/L的genistein作用于HepG2细胞不同时间后,应用同位素试剂盒检测细胞IP3含量,Westernblotting分析细胞Caspase3蛋白表达,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果Genistein作用于肝癌HepG2细胞12、24、48、72h,各时相IP3含量显著低于对照组[（12.0±1.4）pmol/10^6cells、（7.5±0.8）pmol/10^6cells、（5.6±0.5）pmol/10^6 cells、（4.3±0.6）pmol/10^6 cellsvs（29.2±0.6）pmol/10^6 cells,P〈0.01];24h后Caspase3蛋白的RI显著高于对照组（2.7±0.2,7.4±0.5,7.4±0.5,30.7±1.6vs0.24±0.06,P〈0.05）;24h后各时相细胞凋亡率为显著高于对照组[（2.7±0.2）%、（7.4±0.5）%、（20.5±2.0）%、（30.7±1.6）%vs（2.6±0.1）%,P〈0.01]。结论Genistein能减少IP3生成,上调Caspase3蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡。     

148株柯萨奇病毒A组16型的多序列比对及遗传进化分析

目的 进一步了解中国大陆柯萨奇病毒A组16型(coxsackievirus A16,CoxAl6)毒株的变异情况和遗传进化规律,为手足口病的预防和控制奠定基础.方法 对美国国立生物技术信息中心(NCBI)中收录的分离自中国大陆的CoxA16毒株序列用DNAStar 5.0软件进行同源性比较、氨基酸变异分析及遗传进化分析.结果 CoxA16的A、B、C 3个基因型已全部在中国大陆出现过流行,近年来以B、C型为主;病毒进化比较保守,但与原型株已有较大差异,同一地区和时间分离的病毒同源性很高;2007年以来分离毒株数量明显增多,广东、甘肃、山东地区分离数量较多.结论 CoxAl6相对保守,但已出现一定程度的变异.     

抗菌肽的现状与未来

抗菌肽是一种由生物体产生的具有抗菌活性的肽类物质,广泛存在于细菌、真菌、动物和植物中。抗菌肽不仅具有广谱抗菌活性,还具有抗病毒、抗寄生虫和抗癌等多种活性,其应用前景十分广阔。本文就抗菌肽的发现,现在的研究状况,以及抗菌肽在未来发展中的应用前景作一综述。     

中国寨卡病毒分离株E基因B细胞抗原表位多态性分析

目的研究中国寨卡病毒分离株的E基因多态性及其B细胞抗原表位的分布及变异情况。方法从NCBI中下载所有中国分离的寨卡病毒株、主要输入地委内瑞拉和萨摩亚的病毒株,从免疫表位数据库中检索获得寨卡病毒的B细胞抗原表位。使用MEGA7.0软件进行序列比对,分析中国寨卡分离株的基因变异情况及抗原表位的多态性。结果中国所有寨卡分离株均为亚洲型,E基因上有19个单核苷酸突变,其中3个异义突变,只有5个突变位点与来自委内瑞拉和萨摩亚的病毒株的突变位点相同。已验证的寨卡病毒B细胞抗原表位均存在于E蛋白上,尤其是DⅢ结构域。中国分离株和MR766株相比有3个B细胞表位发生改变,中国分离株自身产生的变异导致1个表位改变,B细胞表位的变异位点主要存在于DⅢ结构域。结论中国寨卡分离株总体变异率不高,与输入地病毒株相比也产生变异。有3个B细胞表位发生变异,DⅢ结构域是E蛋白上重要的抗原位点所在域且突变率高。     

细粒棘球蚴细胞系(13G-5)鉴定

:【目的】鉴定 13G 5细胞系细胞是否来源于细粒棘球蚴细胞。【方法】用不同代次的细胞系细胞接种Km小鼠腹腔 ,观察是否形成包囊或类似包囊 ,病理切片证实 ;用形成的包囊材料进行体外培养 ;测定接种小鼠的特异抗体效价 ;用酯酶同工酶鉴定细胞系。【结果】细胞系细胞在小鼠腹腔能形成包囊或类似包囊 ,病理切片观察包囊结构清楚 ,体外培养 ,未能见到细胞贴壁生长和活原头节 ,将培养悬液涂片 ,吉姆萨染色后镜检 ,只见到极少量细胞 (类似于生发层细胞 ) ,也未见到原头节。实验鼠抗体滴度的倒数为 32 0～ 5 12 0之间 ;酯酶同工酶检测结果 :细粒棘球蚴原头节、13G 5细胞系细胞、包囊液含有相同的酯酶同工酶谱 ,在同一位点出现相同的一条酶带。【结论】 13G 5细胞系来源于细粒棘球蚴细胞。