阿霉素纳米胶束在大鼠体内的组织分布研究

目的建立大鼠组织样品的预处理及液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)测定方法,测定阿霉素纳米胶束和阿霉素注射液在大鼠体内的组织分布。方法采用甲醇∶生理盐水(4∶1)作为组织匀浆介质;色谱柱:SunFire C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:5 mmol·L~(-1)醋酸铵-乙腈-甲酸(70∶30∶0.5);流速:0.5 mL·min~(-1);对乙酰氨基酚作为内标。在此色谱条件下,以多反应监测(MRM)扫描方式进行检测,将大鼠随机分成2组,分别测定大鼠尾静脉注射阿霉素纳米胶束和阿霉素注射液后各组织中阿霉素的药物质量浓度,给药剂量均为1 mg·kg~(-1)。结果大鼠各组织中阿霉素的质量浓度在0.5～200 ng·mL~(-1)范围内线性关系良好,r=0.999 1,样品的日内精密度RSD值小于6.7%,日间精密度RSD值小于13.2%。结论该方法快速、准确,适用于阿霉素在大鼠体内组织分布的研究,阿霉素纳米胶束与阿霉素注射液在心、脾和肺中的分布差异无统计学意义,在肝和肾中的分布差异有统计学意义,2种制剂均不能透过血脑屏障。     

UPLC-QTOF-MS/MS快速筛查抗鼻炎类制剂中非法添加3种咪唑啉类化合物

目的：建立抗鼻炎类制剂中3种咪唑啉类化合物（盐酸萘甲唑啉、盐酸羟甲唑啉、盐酸赛洛唑啉）的超高效液相色谱四极杆飞行时间质谱的快速筛查方法。方法：滴鼻液、鼻炎喷剂、鼻炎膏等不同类型样品经提取过滤后，通过Agilent ZORBAX Extend C18色谱柱（2.1 mm×50 mm，1.8 μm）在5 min内完成有效分离后，采用电喷雾四级杆飞行时间质谱进行筛查分析。结果：3种化合物的检出限为10.0～26.3 ng·mL-1，在低、中、高3个浓度的平均加标回收率为92.6%～104.0%，相对标准偏差1.68%～4.65%。结论：该方法快速、简便、准确，为抗鼻炎类制剂的高通量快速筛查提供了可靠实用的技术手段。     

2002—2012年中国农村6～12岁儿童血铜、锌、钙、镁、铁元素分布水平

目的了解中国农村6～12岁儿童血铜、锌、钙、镁、铁五种元素在2002—2012年的分布水平及10年前后血五元素含量变化。方法基于2002年与2012年"中国居民营养与健康监测"数据资料,采用分层随机抽样选取3420人份血样品,利用电感耦合等离子质谱结合0.5%(V/V)HNO_3和0.05%(V/V)Triton-X-100混合液直接稀释技术分析血铜、锌、钙、镁、铁元素在不同性别(男、女)、年龄(6～8岁、9～12岁)、地区类型(普通农村、贫困农村)儿童中的分布情况。结果 2002年中国农村6～12岁儿童血铜、锌、钙、镁、铁中位数及95%CI分别为1.02(0.79～1.32)、4.88(3.17～6.77)、58.59(44.97～74.24)、41.56(33.01～52.28)和423.21(338.83～540.69)mg/L,2012年为1.00(0.75～1.31)、5.12(3.17～7.37)、63.36(41.14～79.16)、41.78(30.89～52.53)和422.06(297.83～522.56)mg/L。10年前后比较中,5种元素除镁元素外差异均有统计学意义(P<0.05);性别和年龄组上,血铜、锌、钙、铁元素含量分布差异有统计学意义(P<0.05);在地区类型上,全血锌、钙、镁、铁差异具有统计学意义(P<0.001),血铜仅在贫困农村差异有统计学意义(P<0.001);此外,血铜、锌、钙、镁、铁5种元素分布在地区类型上差异有统计学意义,但呈相反变化。结论中国农村6～12岁儿童2002年和2012年全血铜、锌、钙、镁、铁5种元素含量在总体、性别、年龄组以及地区类型分布存在差异性。     

液相色谱串联质谱法检测肝癌细胞N6- 甲基腺嘌呤核苷甲基化水平

目的 建立同时测定N⁶-甲基腺嘌呤核苷(m⁶A)和腺嘌呤核苷(A)的液相色谱-串联质谱法(LC-MS/MS),检测肝癌细胞m⁶A甲基化水平。方法 HepG₂和L₀₂细胞mRNA经分离、消化为核苷,再经含对乙酰氨基酚为内标的甲醇沉淀处理。色谱柱为Agilent Proshell 120 EC-C₁₈柱,流动相为0.1 g/dl甲酸水-甲醇(82:18),流速0.4 ml/min,柱温为30 ℃。质谱检测模式为多反应监测(DMRM)模式,测定m⁶A和A的浓度,计算细胞m⁶A甲基化水平。 结果 建立的LC-MS/MS法检测m⁶A和A的浓度分别在0.15～50.00 ng/ml和1.50～500.00 ng/ml浓度范围内线性关系良好(r > 0.999),日内、日间精密度均小于15.00 %,准确度为93.67 %～101.10 %,回收率为91.46 %～97.60 %,基质效应为90.26 %～99.27 %,样品稳定性良好。HepG₂和L₀₂细胞m⁶A甲基化水平分别为(0.73 ± 0.11)%和(1.26 ± 0.22)%。结论 该方法准确、快速、稳定和灵敏,可用于检测肝癌细胞m⁶A甲基化水平。     

菟丝子雌激素样作用质量标志物的筛选及含量测定

目的初步筛选黑龙江产小粒菟丝子雌激素样作用的质量标志物,为后续实验研究及质量控制提供参考依据。方法采用超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOFMS/MS)技术对菟丝子提取物进行定性分析,并建立菟丝子不同极性部位的指纹图谱。以小鼠子宫系数、子宫内膜厚度和血清雌激素水平评价不同极性部位的雌激素样活性,通过双变量相关分析和灰色关联度分析构建化学物质组与雌激素效应的组-效相关性,筛选质量标志物,并建立其中5个质量标志物的含量测定方法。结果在正、负离子扫描模式下共发现10个与菟丝子雌激素样作用相关的指标成分,分别为金丝桃苷、紫云英苷、豆甾醇、新菟丝子苷C、芹菜素、山柰酚、6-O-反式-对香豆酰基-呋喃果糖-(2→1)-吡喃葡萄糖苷、槲皮素、异鼠李素和2,6-十八碳二炔酸。对其中5个质量标志物进行了含量测定,质量分数分别为金丝桃苷(2.753±0.097)mg/g、槲皮素(1.139±0.107)mg/g、芹菜素(1.104±0.047)mg/g、山柰酚(1.144±0.079)mg/g、异鼠李素(0.697±0.074)mg/g。结论基于组-效关联思路可初步发现黑龙江产小粒菟丝子的质量标志物,所建立的质量标志物含量测定方法准确、稳定。     

清热化痰通腑方干预卒中相关性肺炎大鼠的血清代谢组学研究

目的基于超高效液相色谱-四级杆-飞行时间串联质谱（UPLC-Q-TOF/MS）技术探讨清热化痰通腑方 （HTF）对卒中相关性肺炎（SAP）大鼠血清代谢组的影响，旨在寻找血清中的内源性差异代谢物及其相关代谢通 路，以阐释HTF 治疗SAP 的作用机制。方法将雄性SD 大鼠随机分为假手术组、模型组和治疗组，每组 7 只。采用改良线栓法结合气管注射铜绿假单胞菌法复制SAP 模型。造模同时给予大鼠HTF 药液38 g·kg-1·d-1 灌肠，给药体积为38 mL·kg-1，每天1 次，连续7 d。应用UPLC-Q-TOF/MS 技术进行血清样品的分离和数据 采集，通过主成分分析（PCA）及正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）法分析HTF 对内源性差异代谢物的影 响，并通过MetaboAnalyst 3.0 数据库分析其代谢通路。结果在正、负离子模式下共筛选鉴定出22 种内源性 差异代谢物。与模型组比较，HTF 治疗组大鼠血清中的N-乙酰谷氨酸、顺乌头酸、雌激素、癸二酸、维生素 E、酪氨酸、脱氧胞苷、莽草酸及胞苷含量显著升高（P < 0.01），3-甲氧基- L-酪氨酸、白三烯B4、苯乙酰甘 氨酸、磷酸丝氨酸、前列腺素E2、前列腺素F2α、血栓素B2、11-脱氧皮质酮、19-氧睾酮、前列腺素E3、 前列腺素F1α、油酸以及棕榈酸含量显著降低（P < 0.01）。22 个潜在生物标志物主要涉及15 条异常代谢通 路，其中与苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸生物合成，花生四烯酸代谢，柠檬酸循环（TCA 循环），脂肪酸生物合 成，类固醇激素生物合成，嘧啶代谢以及甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢等7 条代谢通路密切相关。结论HTF 对SAP 大鼠的治疗作用可能与其改善血清中内源性代谢物的水平，调节花生四烯酸代谢、脂质代谢以及能量 代谢等有关。     

大黄䗪虫丸动物药质量标志物的含量测定

目的建立衍生化高效液相色谱（HPLC）法、气相色谱-质谱联用（GC-MS）法测定大黄䗪虫丸7 种动物 药质量标志物的含量。方法选取10 批次市售大黄䗪虫丸，采用酸水解法、正己烷提取法，提取其中的氨基 酸和脂肪酸成分，衍生化HPLC 法测定谷氨酸、缬氨酸、亮氨酸及色氨酸的含量，衍生化GC-MS 法测定油 酸、亚油酸及硬脂酸的含量。结果该方法经线性范围、加样回收率、精密度、稳定性和重复性等考察确证适 合用于大黄䗪虫丸中7 种动物药质量标志物的测定。两种方法的加样回收率分别为99.17％~101.53％，95.18% ~98.07%；精密度的RSD 分别为1.22%~2.72%，1.87%~2.92%；稳定性的RSD 分别为1.17％~2.48％，1.58%~ 2.95%；重复性的RSD 分别为1.12%~1.68%，1.20%~2.65%。结论所建立的方法精密度、稳定性、重复性符 合测定要求，可用于大黄䗪虫丸动物药质量标志物的含量测定。