体外培养大鼠星形胶质细胞受损后的激活与反应性胶质化

用鼠脑星形胶质细胞（ＡＳ）原代培养技术建立体外ＡＳ机械性损伤模型。以ｃ—Ｆｏｘｓ、ｂＦＧＦ、ＰＣＮＡ、ＧＦＡＰ—ｍＲＮＡ、ＧＦＡＰ和Ｍｙｏｓｉｎ作为观察指标研究反应性星形胶质化的形成机制。结果显示：１．ｃ—Ｆｏｓ蛋白于损伤后４５ｍｉｎ即有阳性表达，伤后２ｈ消失；２．损伤后２ｈ，损伤边缘的ＡＳ开始表达ｂＦＧＦ，１２ｈ达高峰，２ｄ后表达强度开始回落；３．损伤边缘的部分ＡＳ于损伤后２ｈ开始表达ＰＣＮＡ，伤后１ｄ，ＰＣＮＡ阳性的ＡＳ沿损伤边缘呈列兵式整齐排列，２ｄ后ＰＣＮＡ阳性的ＡＳ分布于损伤周围区域；４．损伤后４ｈ，损伤边缘的ＡＳ开始表达Ｍｙｏｓｉｎ，并逐渐增加，而且朝向损伤区胞浆突起的阳性表达强于背向损伤区的突起；５．损伤边缘的ＡＳ于损伤后６ｈ开始表达ＧＦＡＰ—ｍＲＮＡ，１ｄ达高峰，２ｄ开始回落，３ｄ则只在少数ＡＳ中可检出ＧＦＡＰ—ｍＲＮＡ；６．损伤后１ｄ，ＧＦＡＰ表达明显增强，胞体肥大并向损伤区伸出粗大突起，２ｄＧＦＡＰ达高峰，３ｄ肥大ＡＳ的胞体和突起覆盖损伤区；７．在体外ＡＳ机械性损伤模型上，在没有神经元和其它复杂因素影响的条件下，ＡＳ对损伤的主要反应是胞体的肥大、突起的粗大，并能独立形成反应性星形胶质化。     

实验性胶质细胞增长时结蛋白和肌球蛋白表达的研究

实验性胶质细胞增长时结蛋白和肌球蛋白表达的研究朱建辉叶诸榕李桢实验性胶质细胞增长时结蛋白和肌球蛋白表达的研究@朱建辉@叶诸榕@李桢...     

少突胶质细胞瘤染色体1p/19 q杂合性缺失与p53蛋白表达的相关性研究

目的 探讨少突胶质细胞瘤染色体1p/19q杂合性缺失及p53蛋白的表达情况,与星形细胞起源的肿瘤进行比较研究并探讨其意义.方法 选择2004-2005年间,经病理组织学诊断为不同类型和级别的胶质瘤合计191例,包括:WHOⅡ级少突胶质细胞瘤116例,其中30例为新鲜组织;间变性少突胶质细胞瘤45例和不同级别星形细胞起源的肿瘤石蜡组织30例;采用PCR-微卫星技术检测染色体1p/19q杂合性缺失情况;采用免疫组织化学方法 对184例胶质瘤石蜡切片p53蛋白表达情况进行半定量分析.结果 86例WHO Ⅱ级少突胶质细胞瘤石蜡标本染色体1p缺失率为69.8%(60/86)、19q缺失率为64.0%(55/86)、1p/19q联合缺失率为57.0%(49/86);45例间变性少突胶质细胞瘤中,1p缺失率为71.1%(32/45)、19q缺失率为60.0%(27/45)、1p/19q联合缺失率为55.6%(25/45);两种级别间差异无统计学意义(P>0.05).30例WHO Ⅱ级少突胶质细胞瘤新鲜标本染色体1p缺失率为70.0%(21/30)、19q缺失率为63.3%(19/30)、1p/19q联合缺失率为60.0%(18/30),与石蜡标本的缺失率比较差异无统计学意义(P>0.05).30例星形细胞起源的肿瘤染色体对应三种缺失率分别为23.3%(7/30)、33.3%(10/30)及20.0%(6/30),与少突胶质细胞瘤差异有统计学意义(P<0.05).86例WHO Ⅱ级少突胶质细胞瘤中,仅7例有p53蛋白阳性表达(占8.1%);45例间变性少突胶质细胞瘤中,有14例呈阳性表达(31.1%),两者差异有统计学意义(P=0.007).少突胶质细胞瘤p53蛋白阳性表达明显低于星形细胞起源的肿瘤(P=0.001).在间变性少突胶质细胞瘤中,染色体1p/19q杂合性缺失与p53蛋白阳性表达呈负相关(P<0.05).结论 石蜡和新鲜组织均可用于染色体1p/19q杂合性缺失的检测.在间变性少突胶质细胞瘤中,染色体1p/19q杂合性缺失与p53蛋白阳性表达呈负相关.检测少突胶质细胞瘤染色体1p/19q杂合性缺失和p53蛋白表达,对提高病理诊断的精确性、指导治疗及预后判断具有重要意义.     

少突胶质细胞瘤染色体1p/19 q杂合性缺失与p53蛋白表达的相关性研究

目的 探讨少突胶质细胞瘤染色体1p/19q杂合性缺失及p53蛋白的表达情况,与星形细胞起源的肿瘤进行比较研究并探讨其意义.方法 选择2004-2005年间,经病理组织学诊断为不同类型和级别的胶质瘤合计191例,包括:WHOⅡ级少突胶质细胞瘤116例,其中30例为新鲜组织;间变性少突胶质细胞瘤45例和不同级别星形细胞起源的肿瘤石蜡组织30例;采用PCR-微卫星技术检测染色体1p/19q杂合性缺失情况;采用免疫组织化学方法 对184例胶质瘤石蜡切片p53蛋白表达情况进行半定量分析.结果 86例WHO Ⅱ级少突胶质细胞瘤石蜡标本染色体1p缺失率为69.8%(60/86)、19q缺失率为64.0%(55/86)、1p/19q联合缺失率为57.0%(49/86);45例间变性少突胶质细胞瘤中,1p缺失率为71.1%(32/45)、19q缺失率为60.0%(27/45)、1p/19q联合缺失率为55.6%(25/45);两种级别间差异无统计学意义(P>0.05).30例WHO Ⅱ级少突胶质细胞瘤新鲜标本染色体1p缺失率为70.0%(21/30)、19q缺失率为63.3%(19/30)、1p/19q联合缺失率为60.0%(18/30),与石蜡标本的缺失率比较差异无统计学意义(P>0.05).30例星形细胞起源的肿瘤染色体对应三种缺失率分别为23.3%(7/30)、33.3%(10/30)及20.0%(6/30),与少突胶质细胞瘤差异有统计学意义(P<0.05).86例WHO Ⅱ级少突胶质细胞瘤中,仅7例有p53蛋白阳性表达(占8.1%);45例间变性少突胶质细胞瘤中,有14例呈阳性表达(31.1%),两者差异有统计学意义(P=0.007).少突胶质细胞瘤p53蛋白阳性表达明显低于星形细胞起源的肿瘤(P=0.001).在间变性少突胶质细胞瘤中,染色体1p/19q杂合性缺失与p53蛋白阳性表达呈负相关(P<0.05).结论 石蜡和新鲜组织均可用于染色体1p/19q杂合性缺失的检测.在间变性少突胶质细胞瘤中,染色体1p/19q杂合性缺失与p53蛋白阳性表达呈负相关.检测少突胶质细胞瘤染色体1p/19q杂合性缺失和p53蛋白表达,对提高病理诊断的精确性、指导治疗及预后判断具有重要意义.     

碱性成纤维细胞生长因子的自分泌与反应性星形细胞胶质化

目的观察碱性成纤维细胞生长因子（ｂＦＧＦ）的自分泌现象及其与反应性星形胶质化的关系。方法在大鼠星形胶质细胞（ＡＳ）原代培养的机械损伤模型上，以免疫细胞化学及原位杂交技术检测ｂＦＧＦ、ＰＣＮＡ、ＧＦＡＰ和ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ的动态变化。结果（１）损伤边缘的ＡＳ于伤后２小时起表达ｂＦＧＦ，１２小时达高峰，２天后回落；（２）损伤边缘的ＡＳ于伤后６小时起表达ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ，１天达高峰，２天后回落；（３）伤后１天起，ＧＦＡＰ表达明显增强，ＡＳ胞体肥大并向损伤区伸出粗大突起，２天时ＧＦＡＰ表达至高峰；（４）损伤边缘的部分ＡＳ从伤后２小时起表达ＰＣＮＡ，１天时达到高峰。结论（１）受损的ＡＳ能自分泌ｂＦＧＦ，这是ＡＳ受损后的早期反应之一，具有促进反应性星形胶质化的作用；（２）反应性星形胶质化时，ＧＦＡＰ表达增强是转录水平上ＧＦＡＰ－ｍＲＮＡ增加的结果；（３）反应性星形胶质化以ＡＳ肥大为主，增生为辅。     

P2Y1受体对缺血状态下星形胶质细胞产生胶质原纤维酸性蛋白与胶质细胞源性神经营养因子的影响及相关信号通路

目的研究P2Y1受体对缺血时星形胶质细胞产生胶质原纤维酸性蛋白（glial fibrillary acidic protein,GFAP）及胶质细胞源性神经营养因子（glial cell line—derived neurotrophic factor,GDNF）的影响及其相关信号通路。方法分别利用右侧大腑中动脉线拴阻塞及培养细胞缺氧无营养后恢复正常培养,造成体内、外缺血再灌注模型。用免疫荧光标记、实时定量RT—PCR、Western blotting、酶联免疫吸附试验观察P2Y1受体、GDNF定位,检测GFAP、GDNF及信号分子的表达变化。结果与单纯性缺血组比较,用选择性拈抗剂MRS2179阻断P2Y1受体后,可使体内、外星形胶质细胞产生的GFAP减少,同时使其产生GDNF增加。体外缺氧无营养并阻断P2Y1受体后：可使磷酸化蛋白激酶B（Akt）及cAMP反应元件结合蛋（cAMP response element binding protein,CREB）升高,而使磷酸化JAK2及STAT3（Ser727）降低;JAK2的抑制剂AG490在降低磷酸化STAT3（Ser727）的同时也降低GFAP表达水平;PI3-K的抑制剂LY294002可降低磷酸化的Akt及CREB;MEK1／2抑制剂U0126可同时降低磷酸化的JAK2、STAT3 （Ser727）、Akt及CREB。结论P2Y1受体参与短时性缺血时星形胶质细胞GFAP及GDNF的产生过程,相关信号途径分别为JAK2／STAT3和P13-K／AKT／CREB,并且两条途径存在串话。     

星形胶质细胞对氨引起培养胚鼠大脑神经元形态改变的影响

研究氨对培养神经元形态的影响及星形胶质细胞与神经元形态改变的关系。应用胚鼠神经元纯培养、神经元与星形胶质细胞的混合培养及联合培养技术，结合ＨＥ和免疫组化染色，观察神经元的形态改变。应用定量分析比较不同培养条件下神经元的存活率。结果：①氨可引起神经细胞的肿胀，空泡变和颗粒变及坏死脱落；②神经元的病变与星形胶质细胞的病变严重程度呈正相关，７０．８％的形态正常神经元分布在病变较轻的星形胶质细胞领近；③混合组中神经元的存活率明显高于神经元纯培养组（Ｐ＜０．０１），而联合培养组细胞的变性坏死最轻。结论：氨对培养的神经细胞具有直接毒性作用，而星形胶质细胞对神经元有部分保护作用，成熟的星形胶质细胞的保护效应更强。