miR-424 通过靶向调控HMGA1 对乳腺癌细胞放疗敏感性的影响

[摘要] 目的：探讨miR-424/高迁移率蛋白A1 基因（nigh mobility protein A1，HMGA1）分子轴对乳腺癌细胞放疗敏感性的影响及其分子机制。方法：收集2014 年4 月至2017 年4 月无锡市第四人民医院肿瘤放疗科经手术切除的50 例乳腺癌患者的癌组织标本，用qPCR和Western blotting 检测miR-424 和HMGA1 mRNA与蛋白在乳腺癌放疗敏感患者和放疗抵抗患者癌组织中的表达水平。用不同辐射强度（0、2、4、6 和8 Gy）的60Co γ - 射线处理人乳腺癌细胞株MDA-MB-468 后，观察细胞miR-424 和HMGA1 的表达变化。向MDA-MB-468 细胞中转染miR-424 mimic/inhibitor 和pcDNA-HMGA1，采用平板克隆形成实验、MTT法、Transwell 小室法和Annexin V-FITC/PI 染色流式细胞术检测miR-424 对辐射处理后乳腺癌细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。用双荧光素酶报告基因验证miR-424 与HMGA1 的靶向关系。结果：与放疗抵抗的乳腺癌患者比较，miR-424 在放疗敏感的乳腺癌患者癌组织中高表达（P<0.01），HMGA1 低表达（P<0.01）。与0、2 和4 Gy 处理组细胞比较，6 和8 Gy 的γ-射线处理后乳腺癌MDA-MB-468 细胞凋亡率和miR-424 的表达水平显著升高（均P<0.01）；细胞的侵袭能力和HMGA1 的表达水平显著降低（均P<0.01）。双荧光素酶报告基因证实miR-424 靶向作用HMGA1 并下调其表达水平。miR-424 通过靶向下调HMGA1 显著抑制MDA-MB-468 细胞的增殖、侵袭并促进细胞凋亡（均P<0.01），进而上调MDA-MB-468 细胞对放疗的敏感性。结论：miR-424/HMGA1 分子轴可调控乳腺癌放疗敏感性，过表达miR-424 可增强乳腺癌MDA-MB-468 细胞对γ-射线放疗的敏感性。     

右美托咪定对心肌缺血再灌注大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡相关蛋白表达的影响

目的分析右美托咪定对心肌缺血再灌注(MIR)大鼠模型心肌梗死面积、心肌细胞凋亡及凋亡蛋白表达的影响。方法取30只SD大鼠,随机分为对照组(仅穿线而不结扎)、MIR组(建立MIR模型)、干预组(建立MIR模型前给予右美托咪定预处理),三组各10只。比较干预组与MIR组大鼠心肌梗死面积、危险区面积和心肌细胞凋亡率的差异,并比较三组大鼠心肌组织中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)及补体3蛋白表达水平的差异。结果相比MIR组,干预组大鼠心肌梗死面积和危险区面积明显缩小,心肌细胞凋亡率显著降低(P 0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠Bcl-2和Bax蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);相比MIR组,干预组大鼠Bcl-2蛋白表达水平显著升高,而Bax蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。相比对照组,MIR组和干预组大鼠补体3蛋白表达水平均显著升高(P 0. 01);相比MIR组,干预组大鼠补体3蛋白表达水平显著降低(P 0. 01)。结论通过右美托咪定预处理可提高MIR大鼠模型心肌Bcl-2蛋白表达,降低Bax和补体3蛋白表达,减少心肌梗死面积,缓解大鼠心肌损伤,减少心肌细胞凋亡。     

迷迭香酸类似物-11通过EGFR-JNK通路抑制人胃癌MGC-803细胞增殖和迁移

目的基于EGFR-JNK通路,探讨RAA-11对人胃癌MGC-803细胞增殖和迁移的抑制作用。方法 MTT法检测RAA-11对人胃黏膜上皮GES-1细胞和人胃癌MGC-803细胞活力的影响;划痕实验检测RAA-11对人胃癌MGC-803细胞迁移能力的影响;实时荧光定量PCR检测RAA-11对人胃癌MGC-803细胞EGFR mRNA表达的影响;Western blot检测RAA-11对人胃癌MGC-803细胞凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2、Bax及通路蛋白EGFR、JNK、p-JNK表达的影响。结果 MTT结果表明,与人胃黏膜上皮GES-1细胞相比,RAA-11明显抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖(P<0.01),提示RAA-11对MGC-803细胞有选择作用;划痕实验结果提示,RAA-11能抑制人胃癌MGC-803细胞的迁移能力;实时荧光定量PCR结果提示,RAA-11降低了人胃癌MGC-803细胞EGFR mRNA的表达;Western blot结果提示,RAA-11上调人胃癌MGC-803细胞促凋亡相关蛋白caspase-3、Bax,并促进通路蛋白JNK、p-JNK的表达(P<0.01),下调抑凋亡相关蛋白Bcl-2的表达,并降低了通路蛋白EGFR的表达水平(P<0.01)。结论 RAA-11通过作用于EGFR-JNK通路,抑制人胃癌MGC-803细胞的增殖和迁移,并能够诱导其凋亡。     

奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞保护作用研究

目的探究奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞的保护作用及其机制。方法采用谷氨酸损伤PC12细胞建立模型,用MTS法考察奇壬醇对谷氨酸损伤的PC12细胞存活率的影响,Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡,Western blot检测凋亡相关蛋白caspase-3、Bcl-2和Bax的变化。结果谷氨酸造模浓度为12.5 mmol/L,奇壬醇组细胞的存活率高于模型组(P 0.01)。模型组细胞凋亡率明显高于对照组(P0.01),奇壬醇组细胞的凋亡率显著低于模型组(P 0.01)。与对照组相比较,模型组caspase-3和Bax蛋白的表达显著升高,Bcl-2蛋白的表达显著降低,而与模型组相比较,奇壬醇组caspase-3和Bax蛋白的表达量显著降低,Bcl-2蛋白的表达显著升高,差异均有统计学意义(P 0.01)。结论谷氨酸能诱导PC12细胞凋亡,而奇壬醇通过抑制谷氨酸诱导的PC12细胞凋亡,发挥其对PC12的保护作用。     

生精障碍BALB/c小鼠睾丸组织的体外培养研究

目的:探寻生精障碍小鼠睾丸组织生精能力的体外发育与成熟方法。方法:8周龄BALB/c雄性小鼠68只,随机分为4组,每组17只。对照组为正常同龄BALB/c雄性小鼠睾丸组织,实验组分别采用注射40 mg/kg白消安后第4周睾丸组织为SCOS组,第6周睾丸组织为重度H-S(H-S1)组,第8周睾丸组织为轻度H-S(H-S2)组。琼脂糖凝胶法体外培养3种生精障碍小鼠睾丸组织及对照组睾丸组织至第4周,通过免疫组化检测减数分裂过程中标记蛋白[减数分裂启动:维甲酸诱导蛋白8(STRA8);减数分裂中:联会复合蛋白3(SCP3);减数分裂后:转换蛋白1(TNP1)]的表达情况,判断体外培养过程中生殖细胞的发育与成熟能力; TUNEL法检测培养前后生殖细胞凋亡情况。结果:①培养前与对照组相比,睾丸组织损伤越严重其STRA8的表达越少(P0.05);随着培养时间的延长,在培养4周后3个实验组中STRA8的表达呈上升趋势(P0.05)。②培养前与对照组相比,SCOS组SCP3表达最少、H-S2表达最多(P0.05);培养4周后SCP3表达增加,但仍未达到对照组表达水平,且损伤越严重,表达越少;③培养4周后TNP1在对照组有阳性表达,H-S1、H-S2组可见个别阳性表达(P0.05),SCOS组无表达。④与培养前相比,培养4周后SCOS组凋亡增加,H-S组凋亡减少(P0.05)。结论:琼脂糖凝胶体外培养可以诱导生精障碍的BALB/c小鼠睾丸组织进行减数分裂,生精功能损伤较轻者的体外培养效果好。     

NR2 C2 基因在泌乳素瘤的表达及其意义

目的探讨核受体亚家族2c成员2(nuclear receptor subfamily 2 group C member 2,NR2C2)在泌乳素瘤的表达水平及其与临床特征的关系。方法采用免疫组化染色和蛋白印迹实验检测46例泌乳素瘤患者的肿瘤组织NR2C2表达水平。用RNA干扰技术敲低MMQ细胞NR2C2表达水平,行细胞增殖实验检测细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果按照Knosp分级将患者分为侵袭组和非侵袭组。侵袭组NR2C2表达的免疫组化评分为148. 2±42. 7,非侵袭组为45. 2±28. 72; NR2C2表达水平与肿瘤大小成正相关(r=0. 327,P=0. 039);疏松颗粒型患者的表达水平更高(P=0. 003)。蛋白印迹实验检测NR2C2蛋白水平,筛选出Sh-B(23. 4%)和Sh-C(34%)片段;干扰24 h、48 h和72 h后,与对照组相比Sh-B组的细胞活力分别下降24. 8%、39. 2%和48. 3%,Sh-C组分别下降19. 1%、26. 4%和32. 5%(均P 0. 05)。干扰24 h后,Sh-B组Annexin V阳性细胞为(10. 3±3. 1)%,PI阳性细胞为(7. 3±2. 1)%; Sh-C组分别为(8. 5±2. 3)%和(5. 6±1. 8)%;均明显高于对照组(均P 0. 05)。结论 NR2C2能促进肿瘤生长,与催乳素腺瘤的发生发展密切相关。     

知母皂苷Ⅱ对老龄大鼠学习记忆行为及海马区神经元的影响

目的本实验研究知母皂苷BⅡ(Timosaponin B-Ⅱ,TB-Ⅱ)对自然衰老大鼠学习记忆能力的改善及海马区神经元的保护作用。方法 SD大鼠老年对照组(15只)、青年大鼠对照组(15只)、TB-II 1 mg/kg组(15只)、TB-II2 mg/kg组(15只)和TB-II 4 mg/kg组(15只)。Morris水迷宫实验测量动物逃避潜伏时间; Elisa法测定脑脊液IL-6和TNF-α含量; TUNEL法检测海马区凋亡神经元; HPLC法检测多巴胺、去甲肾上腺素和5-羟色胺含量。结果水迷宫实验显示老龄对照组逃避潜伏时间比青年对照组增加,差异有统计学意义(P 0. 05);给药组与老年对照组相比逃避潜伏时间明显缩短,差异有统计学意义(P 0. 05);给药组脑脊液IL-6和TNF-α浓度下降(P 0. 05);给药组海马区神经元凋亡减少(P 0. 05);给药组DA、NE和5-HT含量增加(P 0. 05)。结论知母皂苷BⅡ通过抑制大脑炎症介质生成和抑制海马区神经元凋亡,提高神经递质含量,明显改善自然衰老大鼠的学习和记忆能力。     

子宫内膜异位症组织细胞超微结构、细胞凋亡变化及Rac1、Cdc42表达的意义

目的探究子宫内膜异位症(EMs)组织细胞超微结构、细胞凋亡变化及Rac1、Cdc42的表达意义,为子宫内膜异位症的治疗寻找新的靶点。方法选取30例卵巢子宫内膜异位囊肿患者的异位囊肿组织作为EMs异位内膜组,对应的30例增生期子宫内膜组织作为EMs在位内膜组,另选择30例正常增生期子宫内膜组织作为正常组。电镜下观察子宫内膜细胞超微结构,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫组化Envision法检测子宫内膜组织中Rac1、Cdc42表达情况并进行半定量分析,Western blot定量和实时定量PCR法分别检测子宫内膜组织中Rac1、Cdc42蛋白表达情况和Rac1、Cdc42 mRNA表达情况。结果相对于正常组,EMs异位内膜组和EMs在位内膜组细胞超微结构上均存在不同程度的凋亡异常改变,以细胞核、细胞器形态结构异常最为明显。EMs异位内膜组和EMs在位内膜组细胞凋亡率均明显低于正常组(P均0.05),EMs异位内膜组和EMs在位内膜组比较差异无统计学意义。免疫组化与Western blot检测结果显示,Rac1、Cdc42相对表达量EMs异位内膜组明显高于EMs在位内膜组(P均0.05),EMs在位内膜组明显高于正常组(P均0.05)。实时定量PCR检测结果显示,Rac1、Cdc42 mRNA相对表达量EMs异位内膜组明显高于EMs在位内膜组(P均0.05),EMs在位内膜组明显高于正常组(P均0.05)。结论子宫内膜异位症组织细胞超微结构异常,细胞凋亡减少,且组织中存在Rac1、Cdc42大量表达,其信号途径可能参与子宫内膜异位症发生、转移,为子宫内膜异位症的治疗提供了新的靶点。     

参芪复方对2型糖尿病GK大鼠胰岛β细胞功能的影响

目的:以自发性2型糖尿病GK大鼠为研究对象,应用全基因组表达谱芯片技术,旨在探讨参芪复方调节胰岛细胞功能的分子机制,为中医药防治2型糖尿病提供理论依据。方法:GK大鼠每日给予高脂饲料喂养,连续4周,随机从GK大鼠中选取大鼠检测随机血糖,验证2型糖尿病模型成功。实验分为4组,空白组,模型组,参芪复方组(1.44 g?kg~(-1)),西格列汀组(16 mg·kg~(-1)),于灌胃前、灌胃4周、灌胃8周测早上8:00各组大鼠尾尖血糖;灌胃8周后,运用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测大鼠血清胰岛素(INS)水平;采用原位末端标记(TUNEL)荧光法定量检测并观察胰岛β细胞凋亡情况;运用全基因组表达谱芯片技术对各组大鼠胰腺组织进行差异基因检测;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测关键差异基因的mRNA转录水平。结果:与空白组比较,灌胃前、灌胃4周、灌胃8周,GK大鼠各组血糖显著升高(P0.01);灌胃4,8周,与模型组比较,各药物干预组大鼠血糖均显著较低(P0.01)。灌胃8周,与空白组比较,模型组大鼠INS水平显著较低(P0.01);与模型组比较,参芪复方组具有INS水平更高的趋势,西格列汀组INS水平显著较高(P0.01)。灌胃8周,与空白组比较,模型组大鼠胰岛β细胞凋亡数明显升高(P0.05);与模型组比较,参芪复方组、西格列汀组大鼠胰岛β细胞凋亡数均明显较低(P0.05,P0.01)。基因芯片及Real-time PCR检测均显示磷脂酰肌醇3-激酶受体1(PIK3R1)在参芪复方组/模型组中表达上调,在西格列汀组/模型组、模型组/空白组中表达下调;蛋白激酶B1(Akt1)在参芪复方组/模型组、西格列汀组/模型组中表达上调,在模型组/空白组中表达下调。结论:参芪复方可减少胰岛β细胞凋亡,增加胰岛素分泌,上调基因PIK3R1,Akt1的表达,推测具有养阴益气活血功效的参芪复方可能通过上调基因PIK3R1,Akt1的表达,抑制胰岛β细胞凋亡,改善胰岛β细胞功能,调节胰岛素分泌,从而防治2型糖尿病。