一种简单的原代神经元培养及转染方法

目的 建立一种简单、高效、稳定的原代神经元培养及转染方法. 方法 无菌条件下分离生后2 d内SD大鼠海马,经消化、反复沉淀后获得海马组织细胞悬液,利用差速贴壁法对神经元进行纯化,采用神经元专用无血清培基进行培养,并于倒置显微镜下观察神经元形态的变化, 采用微管相关蛋白( MAP2 )抗体对细胞进行鉴定;利用慢病毒转染神经元,观察神经元转染效率. 结果 体外培养的原代神经元,在培养第10~15天可以形成密集的神经元网络,细胞健壮,神经元特征明显;经MAP2鉴定,神经元纯度达95%以上;利用慢病毒转染神经元,转染效率达95%以上. 结论 采用该方法进行原代神经元培养,能够获得高纯度的原代神经元;慢病毒是神经元转染的理想载体.     

锌对脊髓缺血再灌注损伤大鼠ATP酶、MAO活性和T-AOC含量影响的研究

目的方法研究外源性补锌对脊髓缺血再灌注损伤大鼠ATP酶、MAO活性和T-AOC含量的影响,从而探讨锌对脊髓缺血再灌注损伤的保护作用的机制。方法 60只Wistar大鼠随机分为5组,每组12只,雌雄各半,分别为假手术组、模型组、硫酸锌预处理高剂量组(100mg/kg)、中剂量组(50mg/kg)和低剂量组(25mg/kg)。各剂量组每日灌胃给予硫酸锌1次,连续7天。假手术组和模型组给予相同剂量生理盐水,7天后制备脊髓缺血再灌注损伤动物模型,损伤后24h采用Basso Beattie Bresnahan(BBB)运动功能评分法对脊髓缺血再灌注损伤模型进行后肢神经功能评价;测定脊髓组织中ATP酶、MAO活性和T-AOC含量。结果与模型组比较,各给锌组大鼠神经功能评分明显高于模型组,差异具有显著性(P0.05)。各硫酸锌处理组Na+-K+-ATP酶活性明显低于假手术组(P0.05),但明显高于模型组(P0.05)。模型组和各硫酸锌处理组脊髓组织Ca2+-Mg2+-ATP酶活性显著低于假手术组(P0.05)。模型组和各硫酸锌处理组大鼠脊髓组织内的MAO活性均显著高于假手术组(P0.05),且100mg/kg/d硫酸锌处理组MAO活性显著低于模型组(P0.05)。模型组和各硫酸锌处理组大鼠脊髓组织内的T-AOC含量显著低于假手术组(P0.05)。模型组大鼠脊髓组织中T-AOC含量最低,随着硫酸锌剂量的增加,T-AOC含量呈上升趋势。结论锌可能通过提高ATP酶的活性、抑制MAO活性和升高T-AOC含量,从而对脊髓缺血再灌注损伤起到一定的保护作用。     

射频消融髓核成形术后颈椎脱位四肢不完全性瘫痪1例

射频消融髓核成形术(radiofrequency coblation nucleoplasty,RCN)操作简便、术后恢复快、疗效确切,已成为微创治疗颈、腰椎间盘突出症的重要方法。确保RCN疗效的关键在于严格依据手术适应证和禁忌证遴选患者,反之,则会大大增加手术风险。国外曾报道因消融不当而加重神经症状并加速脊柱退变的病例[1、2]。我科2012年1月收治1例颈椎前路RCN术后颈椎脱位的患者,报道如下。     

腹部组合薄皮瓣修复手背伴多指背创面临床研究

目的 探讨手背伴多指背创面的理想修复方法.方法 以腹壁组合薄皮瓣修复手背伴多指背创面51例.断蒂同时完成创面修复及分指、指蹼成形.结果 手术均获成功,效果满意.结论 腹壁组合薄皮瓣血供可靠,修复手背伴多指背创面效果满意.     

破骨细胞活性及其调节因子的研究进展

正骨质疏松症是一类非特异性的全身骨代谢障碍性疾病,病理特点是骨量减少、骨再生不足、骨脆性增加~([1]),大大增加了骨折的风险~([2])。骨的形成和维持就是成骨细胞和破骨细胞不断塑形和修复的过程,二者的不平衡可导致骨量的丢失~([3-4])。破骨细胞来源于造血干细胞,是一种和单核细胞、巨噬细胞相关的细胞,与骨细胞、成骨细胞相互作用进行正常的骨转换~([5-6])。破骨细胞前体细胞向成熟破骨细胞分化取决于核因子受体活化因子配体(RANKL)的存在,     

重睑术后腱膜性上睑下垂的矫正与成因探讨

目的探讨重睑术后并发上睑下垂的发生原因及其解决方法。方法对25例重睑术后并发上睑下垂患者行矫正术,术中根据粘连的情况分析其产生的原因,并根据不同原因采取不同的解决方法。结果根据分析,其可能发生的原因主要是手术操作不当导致上睑提肌腱膜损伤和腱膜与眶隔或皮肤发生粘连导致上睑提肌的负荷增加或功能受限。结论上睑局部解剖结构在重睑术中有重要意义。熟悉眼睑的解剖层次,并谨慎操作,可避免重睑术后上睑下垂并发症的发生。     

视频脑电图监测在小儿非癫癎发作疾病诊断中的价值

非癫癎性发作(non-epileptic seizures,NES)是一组临床症状类似于癫癎发作(epileptic seizures,ES)的发作性疾病,不伴有发作期脑电图痫性放电,其发生与脑部电生理紊乱无关,而是由于生理或心理功能障碍所致。在小儿发作性疾病中,NES发生率是ES的10~20倍,是常见的临床问题[1]。据报道[2],在国外癫癎中心就诊的病人中有18%~23%被证实为非癫癎性发作,在所谓的“难治性癫癎”中有25%~30%被最终证实为NES,故诊断癫癎发作必须排除非癫癎性发作。视频脑电图(video electroen-cephalogram,video-EEG)监测能同步记录发作时的临床症状与脑电变化…     

TLR4、MRP8在内侧颞叶癫痫幼大鼠海马中表达的动态变化

目的观察氯化锂-匹罗卡品致痫幼大鼠各期海马中Toll-样受体4(TLR4)、髓样相关蛋白8(MRP8)表达的变化,探讨其是否与内侧颞叶癫痫(MTLE)发生有关。方法 21d SD雄性大鼠90只,随机分对照组(30只)和模型组(60只),腹腔注射氯化锂。17～18h后模型组腹腔注射匹罗卡品诱导癫痫持续状态(SE);对照组予等量生理盐水取代匹罗卡品腹腔注射。按自发发作出现和稳定时间(自发痫性发作在致痫后约3w出现,8w趋稳定),对照组和模型组随机分6个亚组:急性模型组(SE后2h)、潜伏模型组(SE后3w)、慢性自发发作组(SE后8w)及相对应时间点对照组。每亚组动物10只。免疫组化、免疫印迹、RT-PCR技术测定各亚组幼大鼠海马内TLR4、MRP8的表达。结果 TLR4、MRP8在模型组海马内表达明显增多,以CA3、CA1、DG区显著;与对照组相比,差异有显著性(P0.05)。模型亚组内,TLR4、MRP8在急性期和慢性期表达明显增高,而潜伏期无明显表达变化;3组比较差异有显著性(P0.05)。结论大鼠海马内TLR4、MRP8表达增多可能与MTLE发生有关。探讨其机制可能为MTLE的治疗提供新的靶点。     

腺病毒载体介导血管内皮生长因子165基因治疗新生大鼠缺氧缺血性脑损伤

目的 研究腺病毒介导血管内皮生长因子(VEGF)165基因转移对新生大鼠缺氧缺血性脑损伤(HIBD)的治疗作用.方法 采用细菌内同源重组技术构建腺病毒重组载体Ad-VEGF.7日龄SD大鼠随机分成3组:假手术组(20只)、HIBD(20只)、Ad-VEGF移植组(Ad-VEGF组,20只),Ad-VEGF移植组在HIBD后3 d于大鼠左侧感觉运动皮层区(坐标AP:+0.3mm,ML:-2 mm,DV:-1.5 mm)立体定位注射2μl重组体腺病毒悬液.移植后7 d采用免疫组织化学法检测鼠脑VEGF蛋白;采用原位缺口末端标记法(TUNEL法)检测鼠脑神经元凋亡情况;大鼠3～4周龄时采用T迷宫觅食实验及足错误、姿势反射、肢体放置实验对其学习记忆、空间能力和感觉运动功能等行为学进行评估;采用尼氏染色法检测鼠脑海马CAl区和皮层单位面积内神经元数目.结果 免疫组织化学法结果 显示皮层与海马Ad-VEGF组VEGF阳性细胞数均明显多于HIBD组(68.09±3.37比24.65±3.37,68.37±3.17比25.14±1.86,均P<0.05).TUNEL结果 显示Ad-VEGF组鼠脑神经元凋亡数目明显低于HIBD组(151.4±21.7比264.4±16.3,P<0.05);行为学检测结果 显示Ad-VEGF组的各项行为学测试成绩均较HIBD组有明显改善(均P<0.05),尼氏染色结果 显示Ad-VEGF组鼠脑海马CAl区和皮层单位面积内神经元数日明显多于HIBD组(70.6±2.3比55.3±2.1,95.1±2.8比70.1±2.7,均P<0.05).结论 腺病毒载体介导的VEGF165基因治疗可增加VEGF蛋白的表达,减少脑细胞凋亡、改善脑损伤后的远期行为学功能,减轻缺氧缺血后的脑损伤,具有神经保护作用.     

蛋白激酶Cα对T细胞生物学功能影响的研究

目的探讨蛋白激酶Cα(PKCα)对T细胞增殖、凋亡、分化、细胞因子的生成、诱导性调节性T细胞(iTreg)生成的影响。方法分离野生型(PKCα+/+组)或PKCα基因敲除(PKCα-/-组)小鼠T细胞,体外培养,在T细胞表面受体(TCR)信号刺激下,利用3H胸腺嘧啶掺入法、CSFE/Annexin V染色结合流式细胞技术检测T细胞增殖及凋亡情况;收集细胞培养上清,用ELISA方法检测细胞因子IL-2、IL-4、IFN-γ和IL-17的生成。分离PKCα+/+组或PKCα-/-组小鼠CD4+T细胞,在TCR信号刺激下,按Th17细胞、iTreg分化条件进行体外诱导,用流式细胞技术检测细胞分化结果。结果与PKCα+/+组相比,PKCα缺失时,在TCR信号刺激下,T细胞的增殖降低,IL-2生成增多,IL-4和IL-17生成减少,Th17细胞分化减少,iTreg生成增加(均P结论 PKCα具有促炎作用。