胶体金免疫层析法测定HBsAg同时判定HBeAg结果

目的　在金标HBsAg测定的商品试纸条上,尝试一种可同时获得HBsAg和HBeAg两项检验结果的方法。方法　收集400份乙肝患者血清标本,采用四种商品金标HBsAg检测试纸条在检测HBsAg的同时,根据阳性反应和对照两条色带特异变化直接判定是否存在HBeAg,并与EIA“两对半”测定结果进行比较。结果　HBeAg检出率为99.2%,符合率为96.7%。结论　采用一种HBsAg金标试纸既可进行HBsAg的急诊检验,又能立即判定HBeAg的结果。方法简便、快速、经济适用、结果可靠,颇有实用价值。     

一例脊肌萎缩症患者及其家系的SMN基因突变分析

目的 对1例脊肌萎缩症(spinal muscular atrophy,SMA)患者及其家系成员的SMN基因行突变分析.方法 采用多重连接依赖性探针扩增(multiplex ligation-dependent probe amplification,MLPA)技术、逆转录聚合酶链反应及T克隆-测序技术对患者SMN基因进行拷贝数分析和点突变的鉴定,应用MLPA和针对点突变区域的SMN基因第5外显子PCR-直接测序法对患者父母SMN基因进行拷贝数分析和点突变的证实,同时用200名正常人外周血进行相关位点对照研究.结果 患者具有1个拷贝的SMNl基因和1个拷贝的SMN2基因,在这个SMNl基因第230位密码子上存在1个未见报道的错义突变S230L(TCA→TTA);父亲具有两个SMN1和两个SMN2拷贝,其中1个SMNl基因存在S230L突变;母亲具有1个SMN1拷贝,而SMN2基因是纯合缺失的.200名对照中未发现该位点突变.结论 在1个SMA家系中发现了1个新的SMNI基因点突变,即S230L,并准确分析了此家系各成员的SMN基因型.     

循环游离核酸的检测及意义

游离核酸与肿瘤、妊娠相关性疾病、自身免疫病、移植排斥反应、创伤、急救医学等有着密切关系,其检测对疾病的早期诊断、分期、监测、预后判断等有重要意义.     

MEKK3基因siRNA重组腺病毒表达载体的构建及其对胃腺癌AGS细胞MEKK3的表达抑制

目的 构建人MEKK3基因的小干扰RNA(siRNA)重组腺病毒载体表达载体,观察其在胃腺癌AGS细胞中对MEKK3的表达抑制.方法 设计并合成针对人MEKK3基因3个不同部位siRNA靶点的模板DNA序列,以MluⅠ及XhoⅠ克隆入pRNAT-H1.1/Adeno穿梭载体中,得到的质粒用PmeⅠ线性化后在大肠埃项菌BJ5183中与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组.卡那霉素筛选后,用PacⅠ酶切鉴定.鉴定正确的质粒经PacⅠ酶切、乙醇沉淀后转染293A细胞,包装得到具有感染能力的pAd-MEKK3-siRNA重组腺病毒.病毒体外转导人胃腺癌AGS细胞,Western印迹法检测其对MEKK3蛋白表达的抑制.结果酶切和测序鉴定表明3个MEKK3 siRNA重组腺病毒表达载体正确无误.Western印迹检测结果显示3个pAd-MEKK3-siRNA重组腺病毒表达载体中有两个可有效地抑制胃腺癌AGS细胞中MEKK3基因的表达,其中以pAd-MEKK3-siRNA3的抑制作用最显著,有效率达89 %.结论 成功构建了针对MEKK3基因的siRNA重组腺病毒载体,为进一步研究MEKK3基因在人胃腺癌AGS细胞中的作用和功能奠定了基础.     

抗角蛋白单克隆抗体5G5对培养角质形成细胞增殖的影响

目的 研究抗角蛋白单克隆抗体5G5在无血清培养的角质形成细胞中的免疫学活性,观察其对角质形成细胞增殖的影响。方法 免疫组化观察5G5对角质形成细胞的反应性;从培养的角质形成细胞中提取角蛋白,免疫印迹法检测5G5所识别的角蛋白区带;四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT法)测定5G5对细胞增殖的影响。结果 5G5仅识别角质形成细胞中相对分子质量为50000的角蛋白区带,呈现为一条很强的染色带,而未与其它分子质量的角蛋白反应;免疫组化染色明显呈胞浆阳性;该单克隆抗体明显抑制培养的角质形成细胞增殖,并且存在剂量依赖关系。结论 特异性抗相对分子质量为50000角蛋白的抗体可能是角蛋白抗体家族中影响角质形成细胞增殖的有效成分。     

圆头精子症患者的致病基因变异分析4例

目的对4例圆头精子症患者的致病基因进行分析, 明确其遗传学病因。方法选取2017年6月至2020年9月在中国人民解放军联勤保障部队第九〇〇医院被确诊为圆头精子症的4例患者作为研究对象, 采集其精液和血液样本, 进行精子浓度、活力、存活率、形态等常规检测以及精子顶体抗原CD46免疫荧光检测, 提取外周血样基因组DNA进行全外显子组测序(WES), 对疑似致病变异通过Sanger测序进行验证。结果 WES检测显示4例患者均携带DPY19L2基因变异, 其中患者1 ～ 3携带DPY19L2基因纯合缺失, Sanger测序显示患者3在重组断裂点区域BP2存在断裂, 通过非等位基因同源重组造成DPY19L2基因完全缺失。患者1存在第2 ～ 22外显子纯合缺失, 患者2存在第14 ～ 15外显子纯合缺失, 患者1和2的缺失既往未见文献报道, 患者4为DPY19L2基因杂合缺失, 且3′ UTR区存在罕见的纯合缺失。结论 DPY19L2基因变异可能导致的圆头精子症的发生, 其方式符合常染色体隐性遗传, 同时也符合基因组病的特点。