五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的肾纤维蛋白沉积的作用

目的观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积的作用。方法用脂多糖(LPS)诱导的兔肾血栓模型作为本实验的研究方法。生理盐水作阴性对照组;尿激酶作阳性对照组。兔肾组织学检查及测定血浆FDP含量以观察五步蛇毒纤溶酶FⅡ对兔肾纤维蛋白沉积的溶解作用。结果阴性对照组,给药2、6h后,兔肾组织有大量的纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(7821±479)%和(8427±621)%;阳性对照组,给药2、6h后,肾组织有少量纤维蛋白的沉积,FDP含量分别为(13334±427)%和(21017±542)%。FⅡ分别以01mg·kg-1·h-1(低)、03mg·kg-1·h-1(中)、06mg·kg-1·h-1(高)3个剂量滴注。低剂量组的兔肾组织有纤维蛋白的沉积,但比阴性对照组减少;中剂量组的兔肾组织有少量纤维蛋白的沉积;高剂量组的兔肾组织几乎无纤维蛋白的沉积;血浆FDP含量在低、中和高剂量组均比阴性对照组增加,并有量效关系(P<005)。结论步蛇毒纤溶酶FⅡ对LPS诱导的兔肾纤维蛋白沉积有良好的降解作用。     

黑海参酸性粘多糖的分离纯化

采用酶法和碱法消化、醋酸钾和乙醇分级沉淀,从新鲜黑海参体壁中分离得到酸性粘多糖,分子量为10253Da,经琼脂糖电泳证实为纯一成分,多糖组成中氨基半乳糖、葡萄糖醛酸、岩藻糖、硫酸基含量分别为16.12％、17.88％、11.66％、23.52％。     

咖啡因对LY294002诱导的小脑颗粒神经元凋亡的拮抗作用

研究了咖啡因对磷酸肌醇-3-激酶抑制剂诱导的小脑颗粒神经元凋亡的作用及机制。应用神经元体外培养,凝胶电泳,ＳＡＰＫ/ＪＮＫ分析盒测定ＪＮＫ活性。结果:ＬＹ294002浓度依赖性地触发小脑颗粒神经元凋亡,但咖啡因具有浓度依赖性的保护作用。此作用不受ｒｙａｎｏｄｉｎｅ-敏感性钙释放阻断剂、Ｌ-型钙通道阻断剂和ＮＭＤＡ受体阻断剂的影响。而且,ＲＰ-ｃＡＭＰ,Ｈ89和ＫＮ62均不能抑制咖啡因的保护作用。ｃ-Ｊｕｎ的磷酸化是ＬＹ294002诱导神经原凋亡所必需,咖啡因可直接抑制ＪＮＫ的活性,降低神经元内磷酸化ｃ-Ｊｕｎ的含量。咖啡因通过…     

小剂量谷氨酸预先给药对谷氨酸致大鼠大脑皮质神经元神经毒性作用的影响

目的探讨小剂量谷氨酸预先给药对谷氨酸致大鼠大脑皮质神经元（CCNs）神经毒性作用的影响及其信号转导机制。方法出生24h内健康SD大鼠8只，雌雄不拘，原代培养CCNs，随机分为7组（n=4），对照组（C组）不加任何处理因素；G50组加入50μmol／L谷氨酸孵育24h；G10＋G50组：先加入10μmol／L谷氨酸孵育1h，再加入50μmol／L谷氨酸孵育24h；U＋G10＋G50组：加入细胞外信号调节激酶1/2（ERK1/ERK2）上游的激酶抑制剂U0126 10μmol／L孵育1h后，按G10＋G50组处理；U＋G50组：10μmol／L U0126孵育2h后，按G50组处理；U组：10μmol／L U0126孵育26h；G10组加入10μmol／L谷氨酸孵育25h。计算CCNs存活率。结果与C组比较，G50组CCNs存活率降低（P〈0．01），G10组差异无统计学意义（P〉0．05）；与G50组比较，G10＋G50组CCNs存活率增高（P〈0．01）；与G10＋G50组比较，U＋G10＋G50组CCNs存活率减低（P〈0．01）。结论小剂量谷氨酸（10μmol／L）预先给药可减轻50μmol／L谷氨酸致大鼠CCNs的神经毒性作用，其机制与激活ERK1／ERK2信号转导通路有关。     

藻酸双酯钠对蜂毒肽诱导的皮质神经元凋亡的保护作用

目的　研究藻酸双酯钠（ＰＳＳ） 对蜂毒肽（ｍａｓｔｏｐａｒａｎ）诱导的皮质神经元凋亡是否具有保护作用。方法　体外培养大鼠皮质神经元，定性定量检测细胞凋亡：①用ＦＤＡ（ｆｌｕｏ ｒｅｓｃｅｉｎ ｄｉａｃｅｔａｔｅ） 染色检测细胞存活率，用Ｈｏｅｃｈｓｔ ３３２５８ 染色，分析细胞核的形态变化；②琼脂糖凝胶电泳分析ＤＮＡ 断裂；③流式细胞仪对细胞凋亡峰进行定量分析。结果　ＰＳＳ使皮质神经元存活率增加，使ｍａｓｔｏｐａｒａｎ 引起的细胞核固缩、凝聚和断裂现象消失；ｍａｓｔｏｐａｒａｎ 使神经元的ＤＮＡ电泳图谱出现明显的“梯子状”，而ＰＳＳ使此现象消失；ｍａｓｔｏｐａｒａｎ使神经元的流式细胞仪分析图上出现明显的凋亡峰，ＰＳＳ可使此凋亡峰消失。结论　藻酸双酯钠对蜂毒肽诱导的皮质神经元凋亡具有明显的保护作用     

脑活素对原代培养大鼠小脑颗粒神经元影响的研究

目的研究脑活素(现药名施普善)对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元的影响。方法采用原代培养的大鼠小脑颗粒神经元,观察脑活素对细胞形态学及生存的影响。用噻唑蓝(MTT)法测定细胞存活率。结果脑活素在0～40mL/L浓度下,剂量依赖性诱导小脑颗粒神经元死亡。兴奋性氨基酸受体拮抗剂地佐环平(MK-801)可保护低浪度脑活素(＜50mL/L)的神经毒性。脑活素浓度＞50mL/L时MK-801无明显保护作用。而对照药物胞二磷胆碱(0～10g/L)、单唾液酸四己糖神经糖甙脂(GM-1,0～20mg/L)两者被认为具有护脑作用的药物,对小脑颗粒细胞均无毒性作用。结论脑活素对原代培养的大鼠小脑颗粒神经元具有毒性作用,其机制部分是通过兴奋性氨基酸介导的。提示脑活素的神经药理作用值得进一步探讨。     

正常人和原发性开角型青光眼患者小梁网M3受体的表达

目的 研究正常人和晚期原发性开角型青光眼（primary open angle glaucoma,POAG）患者小梁网M3受体的表达,探讨POAG患者小梁网的病理生理改变。方法 取5例正常人及10例晚期POAG患者小梁网组织标本,应用免疫组化方法检测小梁细胞M3受体,并利用计算机图像分析系统对检测结果进行分析。结果 5例正常人的小梁网组织标本的M3受体表达,阳性细胞主要分布在葡萄膜小梁网处,前至Schwalbe线,后达巩膜突。晚期POAG患者小梁网组织标本中,小梁细胞数量明显减少,M3受体阳性细胞亦相应减少且散在分布,部分标本甚至无阳性M3受体表达。结论 正常人小梁网细胞M3受体表达阳性,晚期POAG患者小梁网M3受体阳性细胞数量明显减少且分布不规则。     

大鼠小脑颗粒神经元凋亡相关的差异表达基因ARNT2的克隆

[目的]研究凋亡与非凋亡大鼠小脑颗粒神经元(cerebellar granule neuron,CGN)细胞中基因表达的差异,克隆出与大鼠CGN凋亡相关的基因.[方法]用荧光差异显示聚合酶链反应(florescent differential display polymerase chain reaction,FDD PCR)从低钾诱导的大鼠CGN凋亡模型中筛选出差异表达序列标签(expressed sequence tag,EST),反向Northern blot杂交进一步验证后,用cDNA 5′末端快速扩增技术(rapid amplification of cDNA 5′Ends,5′RACE)克隆差异表达EST的目标基因,用RT-PCR及Western blot进一步验证目标基因mRNA 及蛋白质水平的表达差异.[结果]用FDD PCR筛选出5号差异表达EST,经反向Northern blot验证后,用5′RACE法成功地克隆到5号EST完整开放阅码框,序列同源性分析证实为大鼠基因ARNT2,RT-PCR及Western blot证实低钾诱导后ARNT2mRNA与蛋白质水平的表达均显著地上调,统计学分析显示差异有显著性(P<0.001).[结论]ARNT2在低钾诱导的大鼠凋亡CGN中表达上调,提示ARNT2与CGN凋亡相关并在该过程中发挥重要作用.     

腺病毒载体介导的大鼠DNA多聚酶β重组体的构建及其在PC12细胞中的表达

[目的]为探讨DNA多聚酶β在神经细胞损伤中的作用与机制,构建其重组腺病毒载体,并在PC12细胞中表达.[方法]RT-PCR获取大鼠DNA多聚酶β(POLβ)的编码序列,TA克隆测序,酶切POLβ基因并连入穿梭质粒pAdTrack-CMV,电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183.重组腺病毒质粒(pAd-polβ)和Lipofectamine2000转染293细胞,用重组腺病毒感染PC12细胞.[结果]10个TA克隆中有3个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLβ cDNA序列完全一致,同源重组检测时30个克隆中有8个含目标条带.DNA序列正确的POLβ重组腺病毒质粒转染293细胞后,感染Ad-polβ的293及PC12细胞荧光显微镜下可见绿色荧光,重组腺病毒Ad-polβPCR鉴定含目标条带,Ad-polβ感染PC12细胞Western Blot检测到POLβ蛋白表达.[结论]成功构建了大鼠DNA多聚酶β的腺病毒重组体并在PC12细胞中表达     

壳聚糖改性聚醚醚酮表征及对MC3T3-E1细胞黏附、增殖的影响

背景：聚醚醚酮的生物惰性表面限制了其医学应用,如何提高聚醚醚酮的生物活性亟待解决。目的：分析壳聚糖生物活性涂层改性聚醚醚酮的表面特征及其对MC3T3-E1细胞增殖、黏附的影响。方法：取圆片状聚醚醚酮材料,依次进行NaBH4、3-氨丙基三乙氧基硅烷、戊二醛水溶液及壳聚糖溶液处理,获得壳聚糖生物活性涂层改性的聚醚醚酮材料。使用X射线光电子能谱、扫描电镜、原子力显微镜与全自动接触角测量仪观察化学处理前后聚醚醚酮材料的表面特征。将MC3T3-E1细胞分别接种于聚醚醚酮与壳聚糖改性聚醚醚酮材料表面,观察细胞的增殖与黏附情况。结果与结论：(1)X射线光电子能谱检测显示,聚醚醚酮材料仅含有C、O元素,壳聚糖改性聚醚醚酮材料含有C、O、N、Si元素;壳聚糖改性聚醚醚酮材料表面的接触角小于聚醚醚酮材料(P <0.05);(2)扫描电镜下可见,聚醚醚酮材料表面有明显的凹槽状起伏,壳聚糖改性聚醚醚酮材料表面存在壳聚糖分子,大小为1.0-2.0μm;原子力显微镜下可见,聚醚醚酮材料表面有较多的微小凹坑,大小约为0.1μm,壳聚糖改性聚醚醚酮材料表面的凹坑增大,大小为0.2-0.5μm,表面粗糙度大于聚醚...