猴免疫缺陷病毒(SIV)在艾滋病模型恒河猴组织中的分布和载量测定

目的研究当艾滋病恒河猴模型的血浆病毒载量处于低水平或阴性时,猴免疫缺陷病毒（simian immunodeficiency viruses,SIV）在宿主组织中的分布情况。方法SIVmac251感染恒河猴10只,定期检测其血浆载量,感染病毒平均高峰时间第14天时,活检取淋巴结。选取感染18个月后病毒载量最低水平和阴性的2只艾滋病猴（SAIDS）,经安死术后取淋巴结、脾、肝、肺、肾、脑等组织,用原位杂交和实时荧光定量PCR的方法检测病毒在组织中的分布和组织中的病毒载量。结果感染后14d,10只猴血浆病毒载量达到10^7copies/mL,淋巴结组织病毒载量为10^5-10^8copies/g,原位杂交方法在腹股沟淋巴结中检测到强阳性斑点。感染后第18个月的2只猴,血浆病毒载量下降并维持不高于10^2copies/mL水平或阴性,但组织分布不尽相同,在肠系膜淋巴结、肾上腺、海马回、空肠、脾脏等组织中检测到10^5-10^6copies/g的病毒载量,于一只猴的脑积液中检测到10^3copies/mL的病毒载量。用原位杂交的方法在肠系膜淋巴结和空肠中检测到强阳性斑点,其它组织中未检测到阳性斑点。结论实验证实SAIDS猴在血浆病毒载量低甚至阴性时,病毒在不同组织中仍有分布,有些组织中甚至出现高病毒载量,提示在制备SIV/SAIDS模型中,尤其在药物筛选和疫苗评价时,应考虑组织病毒载量指标的测定和药物、疫苗对组织病毒的治疗清除作用的评价。     

cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型的建立

目的建立cTnTR141W扩张型心肌病的转基因小鼠模型。方法把cTnTR141W基因插入-αMHC启动子下游,构建转基因表达载体,通过显微注射法建立cTnTR141W转基因C57BL/6J小鼠。PCR鉴定cTnTR141W转基因小鼠的基因表型,实时PCR检测基因的拷贝数,Northern blotting检测基因表达,光学显微镜和超声检测cTnTR141W转基因小鼠心脏的病理改变。结果建立了3个系的cTnTR141W转基因小鼠。3个系的基因拷贝数分别是15、20和59拷贝。cTnTR141W基因在心脏组织的表达水平高于内源性cTnT。病理分析显示cTnTR141W转基因小鼠心房心室明显大于野生型,心室壁明显变薄,心肌细胞不均匀肥大,心肌间质纤维增多。超声检查显示心室腔明显扩大,收缩期容积和舒张期容积显著增大,射血分数、短轴缩短率、室壁运动度明显降低。结论cTnTR141W转基因小鼠的全心扩大,室壁变薄,心肌细胞肥大,间质纤维化以及心肌收缩力下降,说明成功建立了cTnTR141W转基因小鼠扩张型心肌病模型,为研究扩张型心肌病发病机制和药物研发提供了有价值的动物模型。     

链脲佐菌素和高脂饮食诱导2型糖尿病中国地鼠模型的建立和稳定性观察

目的为研究2型糖尿病机理和糖尿病药物提供动物模型和基础资料,探讨建立2型糖尿病地鼠模型的方法并观察模型的稳定性。方法采用高能量高脂饮食结合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)的方法建立2型糖尿病地鼠模型,并监测不同时间点空腹血糖、血脂、体重、胰岛素等指标,进行统计分析。结果地鼠注射STZ后第2天大部分血糖值达到成模标准,并逐渐出现不同程度糖尿病的表现,其中雄鼠约在给药第14天,雌鼠约在给药第6天,血糖达到稳定,观察至第14周,均满足成模标准。结论高能量高脂饮食结合小剂量STZ腹腔注射建立2型糖尿病地鼠模型的方法,是目前制备2型糖尿病动物模型的较好方法。其稳定成模时间与性别有关,雌鼠稳定成模时间较雄鼠早,而成模率及模型稳定性与性别无关。     

恒河猴感染SARS-CoV的病毒学、血清学检测

目的对感染SARS-CoV的8只恒河猴进行病毒学、血清学指标检测。方法SARS-CoV经鼻腔接种8只恒河猴,在感染的第1天开始到5、7、10、15、20、30和60天分别安乐处死时,不同时间取咽拭子、血液和脏器,进行病毒分离,RT-PCR检测和抗体测定。结果RT-PCR证实感染病毒检出时间为5~16d,8只猴中的5只分离到了病毒,感染15d后可检测到抗体。结论感染SARS-CoV的恒河猴不仅出现与SARS患者类似的临床和病理学改变,也在一定时期内排毒,出现特异免疫反应,这些指标均可作为药物筛选、疫苗评价等方面的重要参数。     

从诊疗到防控：马尔尼菲篮状菌病全程管理的设想

马尔尼菲篮状菌病发病率呈上升趋势,通过大量的基础及临床研究,人们对该病的了解已逐渐深入,但仍存在许多局限。本文结合最新的研究进展,针对马尔尼菲篮状菌病的流行传播特点、诊疗方法及防控措施等方面进行探讨,为实现该病的有效管理提供借鉴。     

清热安宫丸中黄芩苷和盐酸小檗碱的含量测定及分析

目的：建立HPLC法测定清热安宫丸中黄芩苷与盐酸小檗碱的含量并对不同企业样品的含量差异开展评价。方法：采用Diamonsil Plus C18柱（4.6 × 250 mm,5 μm）;以乙腈(A)-0.05 mol ?L-1磷酸二氢钾溶液(B)为流动相,梯度洗脱;流速为1.0 mL?min-1;柱温为35 ℃;检测波长为278 nm;进样量为10 μL。利用统计软件对5家企业共34批样品的测定结果进行分析。结果：黄芩苷和盐酸小檗碱分别在3.996～399.631 μg?mL-1、1.834～183.397 μg?mL-1范围线性关系良好,相关系数r分别为0.999 9和1.000 0 （n=6）,且二者的重复性、精密度、稳定性和加样回收率均符合测定要求。测定值比较及聚类分析结果显示不同企业间以及各企业不同批次间样品均无显著含量差异。结论：所建方法简便、准确、可靠,可用于清热安宫丸的质量控制。     

保济丸HPLC指纹图谱研究

目的 建立保济丸的HPLC指纹图谱.方法 色谱柱为Agilent Extent-C18（250mm×4.6mm,5μm）,流动相为乙腈-水（梯度洗脱）,检测波长为225nm,流速为2.0mL·min-1,柱温为35℃.结果 通过对10批样品进行检测,拟定了保济丸的HPLC指纹参照图谱;以和厚朴酚峰为参照峰,确定了图谱中22个共有峰,并对15个特征峰进行了归属性研究.10批样品相似度均在0.95以上.结论 本方法准确、可靠,建立的指纹图谱能较全面客观地反映保济丸的质量水平.     

黄连素调节BMP4转录通路基因表达改善2型糖尿病地鼠内脏白色脂肪组织胰岛素抵抗的研究

研究黄连素对2型糖尿病地鼠内脏白色脂肪组织(VWAT)中BMP4转录通路和白/棕脂组织转换通路基因mRNA表达的影响并探讨相关机制。应用高脂饮食诱导肥胖胰岛素抵抗地鼠模型,给予小剂量链脲菌素建立2型糖尿病地鼠模型。造模结束后随机分成正常对照组、肥胖胰岛素抵抗组、2型糖尿病组和2型糖尿病黄连素治疗组。治疗9周后,应用实时定量PCR方法检测各组地鼠VWAT中BMP4通路、白/棕脂组织转换通路及靶基因的mRNA表达改变。结果显示,模型地鼠VWAT中BMP4,BMPRⅡ,BMPRl A,Smad1,Smad5,Smad8,p38/MAPK,ATF2,PRDM16,C/EBPβ,PGC1α,PPARγ及棕脂组织特异基因的mRNA表达降低,而Smad6,Smurf1和白脂组织特异基因的mRNA表达增加。黄连素治疗调节VWAT中BMP4转录通路和棕脂组织转录通路,诱导棕脂组织特异基因mRNA的表达,诱导白色脂肪棕色化基因表型,改善脂诱性胰岛素抵抗。结果表明,BMP4转录通路参与脂诱性内脏白色脂肪组织胰岛素抵抗(FIVWATIR)的形成及黄连素诱导白色脂肪棕色化的分子机制。     

2型糖尿病中国地鼠模型构建与小檗碱对肝脏过氧化物酶体增殖体激活受体及其靶基因表达的影响

背景:研究表明小檗碱可用于治疗2型糖尿病,但小檗碱治疗糖尿病胰岛素抵抗尤其是肝脏脂诱性胰岛素抵抗的分子机制仍不明确。目的:观察小檗碱对2型糖尿病中国地鼠模型肝脏过氧化物酶体增殖体激活受体及其靶基因表达的影响。方法:以高脂饮食及结合小剂量链脲菌素的方法建立胰岛素抵抗和2型糖尿病中国地鼠模型。建模后随机分成4组:对照组给予普通饮食,胰岛素抵抗组给予高脂饮食,2型糖尿病组给予高脂饮食+小剂量链脲菌素,2型糖尿病小檗碱治疗组给予高脂饮食+小剂量链脲菌素+小檗碱,治疗9周。结果与结论:实时定量PCR结果显示与对照组相比,胰岛素抵抗及2型糖尿病组地鼠肝脏过氧化物酶体增殖体激活受体α,β/d,酰基辅酶A氧化酶,肉碱棕榈酰转移酶1和中链酰基辅酶A脱氢酶的表达降低(P<0.05),而固醇调节元件结合蛋白1c,2,过氧化物酶体增殖体激活受体γ,脂蛋白脂酶,脂肪酸转运者(FAT/CD36)和脂肪酸结合蛋白(ap2)的表达增加(P<0.05)。结果证实,小檗碱可改善胰岛素抵抗,并逆转了氧化物酶体增殖体激活的受体及其靶基因表达的改变,小檗碱治疗2型糖尿病地鼠脂诱性胰岛素抵抗的分子机制与氧化物酶体增殖体激活的受体及其靶基因表达的改变相关。     

黄连素对2型糖尿病中国地鼠肝脏肝X受体及其靶基因表达的影响

目的研究黄连素对2型糖尿病中国地鼠肝脏肝X受体(LXR)及其靶基因表达的影响,探讨黄连素治疗肝脏脂诱性胰岛素抵抗的分子机制。方法以高脂饮食及结合小剂量链脲菌素的方法建立胰岛素抵抗和2型糖尿病中国地鼠模型。成模后随机分成正常对照组、胰岛素抵抗组、2型糖尿病组和黄连素治疗组,治疗9周。应用实时定量PCR方法检测各组地鼠肝脏LXR s及其靶基因的表达。结果模型地鼠脂肪变的肝脏中LXRα、胆固醇7α羟化酶1(CYP7A1)和葡萄糖激酶(Gck)的表达降低,磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PEPCK)、葡萄糖-6-磷酸酶(G6Pase)和过氧化物酶体增殖体激活的受体γ共激活因子-1α(PGC-1α)的表达升高,而LXRβ的表达未改变。黄连素有效地改善胰岛素抵抗,同时逆转了LXRα及其靶基因表达的改变而未影响LXRβ的表达。结论 LXRα及其靶基因参与黄连素治疗2型糖尿病地鼠脂诱性胰岛素抵抗的分子机制。