耐多药结核分支杆菌基因突变在耐药性检测中的应用

目的探讨耐多药结核病（MDR-TB）临床分离株rPOB、KatG和rpsL基因突变在耐药性检测中的应用价值。方法采用聚合酶链反应-单链构象多态性（PCR-SSCP）技术分析了54株同时耐异烟肼（INH）、利福平（RFP）、链霉素（SM）的多耐药临床分离株和45株药物敏感株的rPOB、KatG、rpsL基因突变。结果以结核分支杆菌H37RV为对照，45株药物敏感株的rPOB、rpsL基因SSCP图谱正常，其特异性为100％；KatG基因有2株图谱异常，特异性为95．6％。89株结核分支杆菌临床分离株均未发现rPOB、KatG、rpsL基因缺失，其PCR扩增产物SSCP分析结果表明：54株多耐药临床分离株中，49株rPOB基因图谱异常；32株KatG基因图谱异常；40株rpsL基因图谱异常。其敏感性分别为rPOB（90．7％）、KatG（59．3％），rpsL（74．1％）。结论结核分支杆菌耐肿、INH、SM耐药性的产生主要是由于rPOB、KatG和rpsL基因突变所致。PCR-SSCP技术有望成为结核分支杆菌耐药性检测的方法之一。     

成人肺结核不典型影像学表现分析

目的研究成人肺结核不典型的影像学表现,探讨诊断中存在的问题。方法回顾性研究分析了32例成人肺结核的X线、CT表现,其中6例做CT增强扫描,8例做纤维支气管镜检查,全部经临床或病理确诊。结果肿块型8例,表现为叶、段实变型6例,粟粒结节型5例,支气管内膜结核6例,空洞型4例,下叶结核3例。共误诊14例,其中误诊为肺癌7例,误诊为肺炎6例,1例误诊为转移癌。结论肺结核的发病出现上升趋势,发病率升高,老年结核增多,X线、CT表现各有特点,检查要全面,切勿单纯依赖一种检查,要密切结合临床,才能减少误诊。     

结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达及鉴定

目的构建结核分枝杆菌Rv2994基因原核表达载体并进行表达,为进一步研究奠定基础。方法PCR扩增Rv2994基因编码序列,定向克隆入融合蛋白原核表达载体pGEX-1λT获得重组表达质粒pGEX-2994,转化大肠杆菌测序后诱导表达,纯化目的蛋白并免疫新西兰大白兔获取多价抗体。结果从结核分枝杆菌H37Rv株基因组DNA中扩增出Rv2994基因,成功构建了融合表达质粒pGEX-Rv2994,转化大肠杆菌JM109后,经IPTG诱导,表达出约73kDa重组融合蛋白,用Western blotting证实其有良好的抗原性,纯化蛋白免疫新西兰大白兔,获得了高效价的抗体。结论成功构建了原核表达载体pGEX-2994,获得并纯化了GST-Rv2994融合蛋白,制备了高效价的多价血清,为Rv2994基因的功能研究奠定了基础。     

NRAMP1基因INT4和3’UTR位点多态性与肺结核易感性的研究

目的 探讨人类自然抵抗相关巨噬细胞蛋白1（NRAMP1）基因INT4和3＇UTR位点多态性与中国北方汉族成人肺结核发病的关系.方法 采用1：1配对的病例对照研究设计,用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法检测NRAMP1基因中INT4和3＇UTR两个多态性位点,对与肺结核相关的危险因素进行问卷调查,进行单因素和多因素条件logistic回归分析,同时对基因型与肺结核病变的性质和程度进行研究.结果 对124对研究对象进行了INT4和3＇UTR两个多态性位点的基因分型,3＇UTR TGTG＋/del基因型病例组频率显著高于对照组,粗OR值（95%CI）为2.923（1.557～5.487）.病例组和对照组INT4各基因型频率比较差异均无统计学意义.对17个环境危险因素进行了单因素分析,在多因素分析中调整卡痕、体重指数、人均居住面积、家族史4个因素后,3＇UTR TGTG＋/del基因型仍与肺结核显著相关,调整OR值（95%CI）为2.955（1.369～6.381）.在INT4不同基因型中,病例组和对照组肺结核病变性质差异具有统计学意义（x2=9.634,P＜0.05）.结论 NRAMP1基因3＇UTR位点多态性可能是中国北方汉族成人肺结核的易感因素,而INT4多态性可能与肺结核的病变性质有关系.     

前路病灶清除一期植骨内固定治疗胸腰椎结核

目的探讨前路病灶清除,一期植骨钛钢板内固定治疗胸腰椎结核的疗效。方法2000-05/2005-06采用前路病灶清除,一期植骨钛钢板内固定治疗胸腰椎结核52例。男32例,女20例,年龄21~65岁,平均38岁。影像学显示单椎体破坏塌陷9例,双椎体破坏塌陷楔形变43例,脊柱后凸畸形35例,cobb’s角14~41°,平均24°。不全截瘫19例。血沉40~110mm/h。术前抗结核药物治疗2~4周。术后继续抗结核药物治疗10~12个月。结果切口均一期愈合,随访1·2~4年,平均2·2年。植骨块6~7月融合,无移位,折断和吸收。19例不全截瘫者术后2~4月恢复到E级。35例脊柱后凸角度平均矫正14°。血沉于术后3~5月恢复到正常。随访期内结核病灶无复发。结论前路病灶清除、一期髂骨植骨钛钢板内固定是治疗脊柱结核较安全有效的治疗方法。     

结核分枝杆菌热休克蛋白65与汉坦病毒G2糖蛋白融合基因真核表达载体的构建与表达

目的 构建以结核分枝杆菌热休克蛋白65（HSP65）和汉坦病毒G2糖蛋白重组融合基因为基础的真核表达载体。为进一步研究其在结核病和出血热防治中的作用奠定基础。方法 采用聚合酶链反应从结核分枝杆菌H37Rv株基因中．扩增出HSP65的编码基因，从T-H8205G2质粒扩增出G2糖蛋白的编码基因．经相应限制性核酸内切酶消化后．插入真核表达载体pcDNA3．1／His，并将此重组质粒通过脂质体介导转染NIH3T3细胞．用SDS-PAGE、免疫组织化学及免疫荧光方法分别测定表达产物的相对分子量及特异性。结果 获得正向插入的pcDNA3.1/ His-HSP65-G2重组表达质粒，表达产物的相对分子量为105kD．与理论预期大小一致．并且可与汉坦病毒H8205株的腹水抗体和HSP65单抗起特异反应。表明构建的pcDNA3．1／His-HSP65-G2能在哺乳动物细胞中表达并具有抗原性。结论 编码HSP65和G2抗原基因的重组基因的真核表达载体构建成功。     

肺结核患者外周血腺苷脱氨酶活性与淋巴细胞的相关性研究

目的探讨肺结核患者外周血淋巴细胞内腺苷脱氨酶(ADA)活性和全血淋巴细胞绝对值的相关性。方法用全自动生化分析仪及全血细胞计数仪分别测定肺结核患者外周血的ADA活性和淋巴细胞绝对值、比值。结果肺结核活动期组与非活动期组外周血ADA活性均显著高于正常人组(P<0.05),肺结核活动期组与非活动期组患者外周血ADA活性与淋巴细胞绝对值的相关系数分别为0.191和0.154,P>0.05。结论肺结核患者淋巴细胞内ADA活性升高,淋巴细胞绝对值及比值减低,肺结核患者淋巴细胞内ADA活性升高与淋巴细胞绝对值无明显相关。     

PCR-SSCP快速检测耐多药结核分枝杆菌

目的:了解本地区结核病耐药基因突变情况,探讨PCR-SSCP作为新的分子药敏试验方法在临床的应用价值。方法:通过提取耐INH、RFP、SM的肺结核患者痰中结核分枝杆菌DNA,进行PCR-SSCP分析,检测结核分枝杆菌rpoB、katG、rpsL基因是否存在突变,并与传统L-J药敏实验对照。结果:30株耐多药株中,耐RPF、INH、SM基因突变阳性率为90%(27/30)、63%(19/30)、53%(16/30)。3个基因联合突变共8株(26.7%),2个基因联合突变共18株(60%),即26株(86.7%)。单基因突变共2株,2株无基因突变。结论:通过PCR-SSCP方法可检测出绝大部分耐多药结核病的耐药基因,rpoB、katG、rpsL基因突变与本地区结核杆菌对RFP、INH、SM耐药性有关。与传统L-J药敏实验对比,PCR-SSCP是一种敏感、快速的指导临床用药的先进检测方法。     

外出打工者肺结核病危险因素分析

目的 分析外出打工者肺结核病危险因素。方法 采用病例对照研究，选取51名近3年具有外出打工史的25～60岁的涂阳肺结核病人为病例组，同时从病例住所左右邻居中选取57名年龄在25～60岁之间、近3年有外出打工史的健康人作对照；制定统一的调查表进行入户调查；采用非条件Logistic回归进行分析。结果单因素分析显示，有统计学意义（P〈0．05）的因素有工作场所条件不舒适、每天工作时间较长（〉8h）、每周无休息日、不能按时吃饭，以及婚姻史中的单身、不良嗜好中的吸烟2个因素。其OR值分别为4．80，4．56。3．96。3．94，4．53，2．72；多因索分析进入模型的因素（P〈0．05）有工作场所条件不舒适、每天工作时间较长（〉8h）、每周无休息日以及婚姻史中的单身，其OR值分别为3．82．4．45，3．30，5．61。结论工作场所条件不舒适、每天工作时间超过8h、每周没有休息日是外出打工者肺结核病的危险因素；改善打工者的工作环境、维护打工者的合法休息时间，有助于保障外出打工者的身体健康及结核病疫情的控制。     

Primary lingual tuberculosis presenting as cold —Abscess tongue: A case report

Oral manifestation of tuberculosis is uncommon Tongue is the most common oral site of involvement, where the presentations are varied. Here we report a case of primary lingual tuberculosis with an unusual presentation as a cold abscess.