三七苦碟子提取物对大鼠实验性缺血心肌保护作用机制的研究

目的：探讨三七苦碟子提取物（SK）对药物所致大鼠缺血心肌保护作用的机制。方法：60只健康雄性Wistar大鼠随机分成空白组、模型组、SK治疗组（灌服三七和苦碟子提取物自制剂）高、中、低剂量组、阳性对照组（灌服复方丹参滴丸）每组10只;采用异丙肾上腺素一次性多点皮下注射,复制大鼠心肌缺血动物模型。运用光镜、电镜,观察三七苦碟子提取物对缺血大鼠心肌损伤及细胞凋亡的影响,并运用免疫组化法观察作用对细胞凋亡相关基因Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的影响研究,探讨三七苦碟子提取物抗心肌缺血作用的机制。结果：不同剂量SK可不同程度地减轻心肌缺血损伤,对心肌细胞有保护作用。其中以SK高、中剂量组作用显著,其总体作用优于阳性对照组。结论：三七苦碟子提取物能有效抵抗大鼠急性心肌缺血。其作用机制可能与抑制心肌细胞凋亡,以及调节心肌Bcl-2、Caspase-3等凋亡相关蛋白表达密切相关,通过多种综合的作用机制起到保护心肌细胞、抗急性心肌缺血损伤的作用。     

稀土离子对BEL-7402细胞蛋白质构象变化的影响

应用傅立叶变换红外光谱 (FT IR)方法 ,考察了稀土离子作用于BEL 740 2细胞后所引起的整个细胞蛋白质构象的变化。结果 :在Hepes缓冲液介质中 ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1La3+对BEL 740 2细胞蛋白二级结构的影响随时间变化 ,作用 1h没有影响 ;作用 2h和 3h结果类似 ;作用 3h ,1 .0× 1 0 - 4mol·L- 1的不同稀土离子相比较 ,使Random上升的程度是Yb3+>La3+>Gd3+。提示 :稀土离子可使BEL 740 2细胞蛋白质构象发生变化 ,这种变化可能是由于蛋白质很大一部分氢键作用发生了变化和蛋白质发生了聚集造成的     

甲孕酮对K562/AO2细胞及P-gp、Bcl-2耐药蛋白表达的影响

目的：探讨甲孕酮对白血病 K562/ AO2细胞凋亡率及 P - gp、Bcl -2耐药蛋白表达的影响。方法以 MTT法检测肿瘤细胞增殖的抑制率，流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、P - gp 及 Bcl -2表达。结果甲孕酮能够提高 K562/AO2细胞的凋亡，能够下调 K562/ AO2细胞 P - gp、Bcl -2的表达。结论甲孕酮能提高 K562/ AO2细胞化疗敏感性，促进其凋亡，对 K562/ AO2细胞有一定的逆转耐药作用。     

CD24在乳腺癌组织中表达的意义及其与Ki67、Bcl-2的关系

目的 研究乳腺浸润性导管癌组织中CD24的表达及与细胞核增殖抗Ki67及凋亡抑制蛋白Bcl-2的关系,探讨CD24在乳腺癌发生发展中的作用.方法 应用免疫组化ElivisiDnTM Plus二步法检测86例乳腺浸润性导管癌组织和30例非瘤乳腺上皮组织中CD24及Ki67、Bcl-2的表达情况,分析CD24表达与Ki67、Bcl-2以及患者年龄、肿瘤大小、组织病理学分级、淋巴结转移、临床分期等临床病理学参数之间的关系.结果 在86例乳腺浸润性导管癌中CD24表达的阳性率为87.2%(75/86),与对照组比较均有统计学差异(P<0.01);CD24表达与患者年龄、肿瘤大小、组织病理学分级、临床分期未见显著相关(P0.05),与腋窝淋巴结转移呈正相关(P<0.01);乳腺癌CD24表达与Ki67表达呈正相关(P<0.01),与Bel-2表达没有相关性(P0.05).结论 CIY24蛋白的表达与乳腺癌细胞增殖及侵袭转移具有相关性,是判断肿瘤生物学行为和患者预后的重要参考指标之一.     

新型钌配合物通过内源性线粒体凋亡通路诱导Bel-7402细胞凋亡的机制

目的 研究钌配合物Ru-HMIP对肝癌细胞Bel-7402的抑制作用及其机制.方法 MTI法检测RuHMIP对Bel-7402细胞的杀伤作用;流式细胞术检测其诱导细胞凋亡情况;JC-1荧光探针检测线粒体膜电位;DCFH-DA荧光探针检测细胞内活性氧(ROS);Western blot检测细胞凋亡相关蛋白.结果 RuHMIP对Bel-7402细胞有较强的杀伤效果;其对细胞毒性作用是通过诱导细胞凋亡方式;Ru-HMIP在Bel-7402细胞中产生过量ROS,并且这种作用及其细胞毒性都可被还原剂乙酰半胱氨酸(NAC)所阻断.Ru-HMIP可以破坏Bel-7402细胞线粒体膜电位;上调Bax,下调Bcl-2,同时激活Caspase-9及Caspase-3.结论 Ru-HMIP可以在体外有效抑制Bel-7402细胞增殖,其作用机制是在细胞内诱发过量ROS,继而通过内源性线粒体凋亡通路诱导细胞凋亡.     

T—AK细胞上清液抑瘤活性的研究

本文应用ＭＴＴ比色法检测了ｒＩＬ－２和抗ＣＤ３单抗共同诱导激活的Ｔ－ＡＫ细胞培养上清液对Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制效应，并观察了Ｔ－ＡＫ上清液抑瘤活性与Ｔ－ＡＫ细胞杀伤活性的相关性，结果表明：（１）Ｔ－ＡＫ细胞能够自发分泌一些抑制Ｋ５６２细胞和ＢＥＬ－７４０２细胞增殖的抑制因子，但活性很低；（２）Ｔ－ＡＫ细胞在杀伤Ｋ５６２细胞过程中释放的抑制肿瘤细胞生长的物质，抑瘤活性比较高，共     

索拉非尼联合奥沙利铂对人肝癌ＢＥＬ-７４０２细胞抑制作用的实验研究

目的　探讨索拉非尼联合奥沙利铂对人肝癌ＢＥＬ-７４０２细胞的抑制作用。方法　选取人肝癌细胞株ＢＥＬ-７４０２,用奥沙利铂和索拉非尼单药或联合（含不同给药顺序）作用于细胞,观察最佳抑制效果。ＭＴＴ法检测奥沙利铂和索拉非尼分别对肝癌ＢＥＬ-７４０２细胞的抑制作用并计算半数抑制浓度（ＩＣ_５０）;电镜下观察细胞形态和超微结构的改变;流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡的变化。结果　奥沙利铂单药及联合索拉非尼组ＢＥＬ-７４０２细胞出现Ｓ期、Ｇ２／Ｍ期阻滞,索拉非尼单药组仅出现Ｓ期阻滞。先用奥沙利铂联合组的ＢＥＬ-７４０２细胞凋亡率最高,为（４０.９４±４.６２）％,其次为先用索拉非尼联合组的凋亡率（３０.０２±４.１５）％,联合组的ＢＥＬ-７４０２细胞凋亡率均高于索拉非尼单药组（Ｐ＜０.０５）。结论　人肝癌ＢＥＬ-７４０２细胞体外对索拉非尼和奥沙利铂均高度敏感,两药联合应用对肝癌细胞有协同抑制作用,且先用奥沙利铂联合给药的效果更好。     

肝癌细胞系BEL-7402中siRNA表达载体介导靶向c-myc基因的RNA干涉实验研究

目的:探索经载体介导的RNA干涉对肝癌细胞cmyc基因表达抑制的可行性。方法:设计并合成2条靶向癌基因cmyc的RNA干涉模板片段,分别将其连接至pSilencer1.0U6载体上构建siRNA真核表达载体;脂质体转染法将上述重组质粒转入BEL7402肝癌细胞株。半定量RTPCR分析cmyc基因的表达抑制效率,以及cmyc基因表达下调细胞中CDK4、hTERT和Gadd45β基因表达的改变。结果:获得2个能在细胞内有效转录生成靶向cmyc基因siRNA的重组载体pSicmyc1和pSicmyc2;其中pSicmyc2可有效介导肝癌细胞BEL7402cmyc基因的表达抑制,抑制率高达90%以上;在cmyc基因经RNAi抑制的细胞中,CDK4和hTERT基因的表达分别下调至85%和57%;而Gadd45β的表达上调约110%。结论:肝癌细胞BEL7402中cmyc基因的表达可被载体介导诱发的RNA干涉有效抑制,进而导致细胞中与增殖和凋亡相关基因的表达改变。     

链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人正常肝细胞生长的影响

目的观察链球菌蛋白对人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞生长增生的影响。方法常规培养链球菌,提取细菌全蛋白并通过阴离子交换层析获得蛋白分离组分SpⅠ和SpⅡ。不同浓度链球菌蛋白(10、50、100mg/L)作用于人肝癌Bel-7402细胞及人Chang氏正常肝细胞24～72h后,采用MTT法检测两种细胞的增生活性。倒置显微镜下观察50mg/L链球菌全蛋白和SpⅡ对两种细胞的形态学变化。结果MTT结果显示,链球菌全蛋白及SpⅡ能显著抑制Bel-7402细胞的生长,与蛋白剂量和作用时间呈负相关关系;SpⅠ对Bel-7402细胞未显示出明显增生抑制作用。链球菌全蛋白及SpⅡ对人Chang氏正常肝细胞显示出不同程度的刺激生长作用。倒置显微镜下观察,链球菌全蛋白及SpⅡ作用后的Bel-7402细胞,细胞稀疏、脱落、排列紊乱,失去正常形态,而人Chang氏细胞未发现明显的形态学变化。结论链球菌全蛋白及SpⅡ能抑制人肝癌Bel-7402细胞的增生,并且能在一定程度上促进人Chang氏正常肝细胞增生。     

三氧化二砷对肝癌细胞生长抑制作用差异性探讨

目的:观察三氧化二砷对肝癌SMMC-7721和BEL-7402细胞生长抑制作用差异性并且探讨其可能的作用机理。方法: 应用细胞培养和台盼蓝拒染法观察不同时间和不同浓度的三氧化二砷对肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402细胞生长的抑制作用,比较生长抑制率的差异并用谷胱甘肽检测试剂盒测定两种肝癌细胞内谷胱甘肽(GSH)的含量。结果: 三氧化二砷浓度为0.50 μmol/L、作用时间为24 h可显著抑制肝癌细胞系BEL-7402的生长,抑制作用呈时间、剂量依赖性;对SMMC-7721细胞,三氧化二砷浓度为2.00 μmol/L、作用时间为24 h才出现抑制细胞生长作用,二者的生长抑制率存在显著差异,0.25-2.00 μmol/L As₂O₃作用72 h后,BEL-7402细胞的生长抑制率均高于SMMC-7721细胞(P＜0.05)。检测SMMC-7721和BEL-7402细胞内GSH含量分别为(50.8±5.2)μmol/g protein和(18.7±1.4)μmol/g protein,存在明显差异。 结论:三氧化二砷抑制肝癌细胞SMMC-7721和BEL-7402的生长存在显著的差异;BEL-7402细胞对三氧化二砷非常敏感性,可能与其细胞内谷胱甘肽含量较低,细胞的氧化还原解毒系统不足有关。