氧糖剥夺再灌注后BV2细胞中差异表达关键基因的筛选及鉴定

目的 筛选氧糖剥夺再灌注后BV2细胞中差异表达的基因.方法 取小鼠小胶质细胞BV2分为正常组(control组)和氧糖剥夺再灌注组(OGD/R组),对两组细胞进行转录测序筛选差异表达基因,在线网站(ht-tps://www.xiantao.love/products)对差异表达基因进行基因本体论(GO)和京都基因与基因...     

史他汀类药物对抗β- 淀粉样肽神经毒性的非胆固醇依赖性作用机制实验研究

目的：研究史他汀类药物通过其非胆固醇依赖性作用对抗β- 淀粉样蛋白（Aβ）的 过程中β- 淀粉样肽前体蛋白（APP）代谢、尼古丁型乙酰胆碱受体（nAChRs）表达以及丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路的相互作用关系,探讨史他汀类药物对阿尔茨海默氏病（AD）的可能性干预途径。方法：选择原代培养神经细胞及过表达APP670/671 的SHSY-5Y 细胞,用史他汀类药物（包括洛伐他汀、阿托伐他汀、罗苏伐他汀和辛伐他汀）、Aβ、nAChR 拮抗剂或细胞外信号调节白白激酶（ERK）抑制剂分别或合并处理。用生化方法测定细胞存活率、胆固醇含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、丙二醛（MDA）含量;用蛋白印迹法检测nAChR 多种亚单位蛋白表达水平,APP 代谢途径中α分泌型淀粉样前体蛋白（αAPP）、β分泌型淀粉样前体蛋白（βAPP）、β淀粉样前体蛋白裂解酶1（BACE1）、β淀粉样前体蛋白裂解酶2（BACE2）及解聚素金属蛋白酶结构域蛋白10 （ADAM10）等的蛋白表达水平,MAPK 通路中ERK、c-Jun 氨基末端激酶（JNK）及p38 磷酸化水平;实时荧光定量PCR 测定nAChR 亚单位mRNA 表达水平。结果：用Aβ或Aβ寡聚体处理体外培养神经细胞48 小时后见细胞存活率下降、SOD 的活性降低和MDA含量增高等毒性作用,用史他汀类药物预处理细胞24 小时,均能减轻Aβ引起的神经毒性作用。用洛伐他汀处理培养细胞24 小时后,发现α7 nAChR 蛋白及mRNA 表达水平均升高,而α4、α3 和bβ2 未见明显改变;洛伐他汀处理引起αAPP 分泌增加、βAPP减少、BACE1 蛋白表达水平降低、而BACE2 和ADAM10 增高。洛伐他汀处理亦导致phospho-ERK1/2 蛋白表达水平升高,而phospho-JNK 和phospho-p38 未见明显改变。联合应用洛伐他汀与MAPK/ERK1/2 抑制剂U0126 或α7 nAChR 拮抗剂MLA 处理培养细胞,结果显示U0126 可以抑制细胞phospho-ERK1/2 的磷酸化,降低α7 nAChR 蛋白表达水平,减少αAPP 的分泌,同时阻断洛伐他汀引起的MAPK/ERK1/2 信号转导通路活化、α7 nAChR 蛋白表达水平升高以及αAPP 分泌增加等作用;MLA 处理神经细胞仅能减少αAPP 的分泌,对其自身的蛋白表达及phospho-ERK1/2 的磷酸化均无明显影响,MLA 与洛伐他汀共同处理细胞后仅见洛伐他汀诱导的αAPP 分泌增加作用被减弱,而MAPK/ERK1/2 的活化以及α7 nAChR 蛋白表达水平的上调均未被减弱。结论：采用不引起细胞胆固醇水平改变的史他汀类药物剂量处理培养细胞,能减轻Aβ引起神经细胞毒性作用,引起MAPK/ERK1/2 信号转导通路活化、α7 nAChR 蛋白表达水平升高以及αAPP 分泌增加;其作用机制可能是首先活化phosphor-ERK1/2 信号转导通路,该通路的活化刺激α7 nAChR 的表达,最终增强APP 的非淀粉样代谢过程,活化α- 分泌酶,从而促进αAPP 的分泌,产生对抗Aβ的神经保护作用。     

nm23-H_1/NDPK与原发性胆囊癌生物学行为的关系

采用抗nm2 3-H1/NDPK单克隆抗体进行免疫组织化学SP法染色 ,检测原发性胆囊癌4 3例 ,胆囊腺瘤 10例 ,慢性胆囊炎 4 5例 ,其中nm2 3 H1/NDPK表达阳性率依序为 4 8 8%、90 0 %、77 8% ,原发性胆囊癌表达阳性率低于胆囊良性病变 (P <0 0 5)。nm2 3 H1/NDPK在原发性胆囊癌的表达 :按Nevin分期 ,早期高于晚期 (P <0 0 5) ,高分化癌高于低分化癌 (P <0 0 5) ,未发生转移者显著高于转移者 (P <0 0 2 5) ,其表达水平与转移呈负相关。nm2 3 H1基因可能在原发性胆囊癌转移过程中起负性调控作用 ;nm2 3 H1基因在原发性胆囊癌分期、分化程度及转移过程中起不同的调节作用。     

尼古丁上调星形胶质细胞内源性Cryab抑制Aβ聚集的研究

目的研究尼古丁激活星形胶质细胞α7胆碱能受体(α7 nicotinic receptors,7 n AChRs)上调内源性B-晶状体蛋白(αB-crystallin,Cryab)并抑制β淀粉样蛋白(Amyloid,Aβ)集聚的现象及其机制。方法分离24 h内新生乳鼠大脑皮质培养原代星形胶质细胞并鉴定;体外制备Aβ_(1-42)寡聚体;将细胞分为对照组、尼古丁组、α7n AChRs阻断剂(methyllycaconitine,MLA)组、Aβ_(1-42)组、尼古丁+Aβ_(1-42)组、PI3K信号通路阻断剂LY294002+尼古丁+Aβ_(1-42)组。用蛋白印迹法(Western blotting)检测细胞内Cryab、P-Akt(ser473)、Aβ寡聚体的表达水平。结果尼古丁可以显著上调星形胶质细胞内源性Cryab蛋白(P0.05);尼古丁能够显著上调磷酸化Akt蛋白水平(P0.05);在细胞裂解液及培养基中,尼古丁显著增强星形胶质细胞对Aβ聚集的抑制作用(P0.01)。结论尼古丁通过激活星形胶质细胞α7 nAChRs上调内源性Cryab从而抑制Aβ集聚;PI3K/Akt信号通路可能参与尼古丁激活星形胶质细胞α7 n AChRs上调内源性Cryab蛋白抑制Aβ集聚的过程。为进一步研究尼古丁抑制Aβ集聚的可能机制提供了实验基础。     

胃肠癌患者T细胞亚群与SIL-2R的关系

目的研究自行设计的导管和应用介入放射学方法对阻塞性输卵管疏通的价值.方法对1 008例不孕症妇女的1 584条不通的输卵管进行了选择性输卵管疏通术.结果插管成功率97.3%(1 542/1 584),疏通率92.5%(1 465/1 584)插管失败42支(2.7%),受孕率396例(39.3%).并发症:73例(7.2%)产生逆流,两支输卵管穿通.结论导管设计合理,具有简单、安全、成功率高,便于基层开展的特点.     

原发性胆囊癌基因研究的一些进展

恶性肿瘤的防治虽然随着早期发现、早期诊断、早期综合治疗在不断进展，但其病因从未阐明。７０年代以来随着分子遗传、分子生物学的迅猛发展，使肿瘤病因的研究进人分子水平。原癌基因激活而异常表达可致ＤＮＡ异常合成、增殖、突变。抑癌基因失活使畸变的细胞逃脱免疫监控，反而异常增殖发生癌变。为了初步探索原发性胆囊癌的癌基因与抑癌基因，笔者试作并报道下列一些初步研究。１．增殖细胞核抗原在原发性胆囊癌中的表达及意义：采用增殖细胞核抗原／周期素（ＰｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｎｇＣｅｌｌｎｕｃｌｅａｒａｎｔｉ－ｇｅｎ／ｃｖｃ…     

ApoE通过影响mir-30a-5p调控BDNF表达

目的研究ApoE基因型是如何影响脑源性神经营养因子(brain derived neurotrophic factor,BDNF)的表达,以更好的理解AD的发病机制。方法在SH-SY5Y细胞系和大鼠原代神经元中加入Apo E3和Apo E4重组蛋白,用real-time PCR、Western blot和ELISA检测BDNF的表达水平;用luciferase assay、real-time PCR和Western blot证实BDNF是mir-30a-5p的靶基因;用Taq Man技术检测mir-30a-5p的水平。结果与对照组相比,Apo E3增加了BDNF的mRNA、蛋白水平和培养基中的BDNF浓度,而ApoE4减少了BDNF的mRNA、蛋白水平和培养基中的BDNF浓度; hsa-mir-30a-5p抑制BDNF的3’UTR的luciferase活性,mRNA和蛋白水平。ApoE3降低mir-30a-5p的表达,Apo E4增加mir-30a-5p的表达,而过表达mir-30a-5p inhibitor可以逆转ApoE4对BDNF的抑制效果。结论BDNF是mir-30a-5p的靶基因,ApoE是通过影响mir-30a-5p的水平来调控BDNF的表达。     

α-硫辛酸通过mTOR通路抑制缺血再灌注诱导的PC12细胞自噬性凋亡

目的 研究α-硫辛酸(LA)对PC12细胞缺血再灌注损伤的保护作用及其分子机制.方法 传代培养PC12细胞,PC12细胞缺氧/复氧(氧糖剥夺4 h,复氧18 h)模拟缺血再灌注损伤模型.实验分为正常组、缺氧/复氧组、缺氧/复氧+α-LA、缺氧/复氧+自噬抑制剂巴弗洛霉素(Baf)A1组.CCK8筛选α-LA的有效作用浓...