土拨鼠白细胞介素15的克隆、表达和活性分析

目的对土拨鼠白细胞介素15（woodchuck interleukin 15，wIL-15）分子进行克隆、表达并鉴定其活性，为进一步研究IL-15在嗜肝病毒感染中的作用以及评价IL-15用于治疗慢性HBV感染奠定基础。方法用IL-15的保守引物将wIL-15基因克隆、测序并进行分析，构建wIL-15的原核表达质粒，在大肠杆菌中表达，分离纯化后用淋巴细胞增殖试验检测其生物学活性。结果wIL-15的完整编码序列为489nt（与其他哺乳动物IL-15编码序列的同源性高达78％～87％），编码162AA长度的前体蛋白（与其他哺乳动物IL-15蛋白的同源性高达70％～80％），其信号肽为N端的48AA，成熟蛋白由114AA组成。土拨鼠IL-15与灵长动物IL-15的同源性高于啮齿动物。带有His-tag的成熟蛋白，可以在大肠杆菌中表达，分离纯化后，可以刺激Con A活化的小鼠脾细胞和土拨鼠PBMC增殖（其SI值可高达10以上），并存在明显的剂量依赖性。结论（1）wIL-15与其他哺乳动物IL-15高度同源，并且与灵长类动物的IL-15更接近。（2）wIL-15可以在大肠杆菌中表达，并在纯化后能刺激小鼠和土拨鼠淋巴细胞增殖，表现出较好的生物学活性。     

不同微创术式剥除子宫肌瘤的临床疗效观察

目的:探讨不同微创术式剥除子宫肌瘤的临床疗效。方法:子宫肌瘤患者100例根据入院顺序分为治疗组与对照组各50例,对照组采用传统的开腹子宫肌瘤剥除术,治疗组采用微创腹腔镜子宫肌瘤剔除术。结果:经过观察,治疗组的手术时间和术中出血量都明显少于对照组(P<0.05)。随访3个月,治疗组的月经周期与持续天数与对照组类似(P>0.05)。结论:微创腹腔镜手术剥除子宫肌瘤可明显减少术中出血,减少手术时间,也有利于术后月经恢复,是临床上安全有效的方法。     

人微小病毒B19感染的血液学异常

人微小病毒B19(HPVB19)骨髓感染引起造血功能紊乱,为了解该类感染的发生率和临床表现,我们调查血红蛋白<90g/L的患者121例,其中33例HPVB19-DNA阳性,阳性率27.3%;临床可表现为白细胞减少或增加,全血细胞减少、肝炎并发再生障碍性贫血、继发性骨髓增生异常综合征等.缺铁性贫血可并发HPVB19感染.因此,对不易解释的血液学改变,检测HPVB19-DNA,有助于明确病因.     

PML小体的组成、结构及其在细胞生物学和人类疾病中的作用

PML小体,亦称为核小体(NBs),是位于细胞核内的一些特异性区域,其内含有一些在人类多种疾病(从自身免疫性疾病、白血病、肿瘤到病毒感染性疾病)的发生中发挥重要作用的蛋白质。近来的研究证据表明这些小体还与细胞的基本生物学功能如染色质结构、转录调控、凋亡及DNA修复有关。最近我们在这个领域的研究主要聚焦在肿瘤抑制蛋白P53的研究上,因为我们新近发现P53也是核小体的组成成分。我们可以间接证实P53是通过与特异性的PML异构体(PML3)结合被募集到NBs内的,PML3是PML小体的基本组成成分。P53的募集也可由SUMO-1和Ubc9的共同表达而产生。SUMO-1是一种辅酶Q样蛋白,我们已知它对早幼粒细胞性白血病蛋白(PML)的共价修饰是NBs装配的必要条件,而Ubc9是负责SUMO-1与PML、NBs的其它细胞成分以及其它多种胞内蛋白共价连接的连接酶。我们发现P53在NBs内的重新定位能以启动子特异性的方式增强P53的反式激活作用并能影响细胞存活。我们的结果表明在PML和P53依赖的生长抑制途径间存在交叉环节,这提示NBs及其内的蛋白质可能是作为P53功能的调控因子而发挥重要作用的。这些研究结果提示NBs可能在DNA修复、凋亡、细胞衰老和肿瘤发生中都有重要作用。     

原发性肝细胞癌中TRADD蛋白表达与细胞凋亡的关系

肿瘤发生过程中细胞增多的原因除了细胞过度增殖外 ,还与细胞死亡相对不足有关。近年来 ,ｃａｓｐａｓｅ家族在细胞凋亡中的作用越来越受到重视 ,ＴＮＦ浕与细胞表面的受体结合后 ,受体的胞浆内部分形成三聚体 ,通过其死亡域与ＴＲＡＤＤ结合 ,由后者再与ＦＡＤＤ蛋白结合并进一步激活启动性ｃａｓｐａｓｅ导致细胞凋亡。因此 ,我们检测了ＨＣＣ中ＴＲＡＤＤ的表达并探讨其与细胞凋亡的关系。1　材料与方法1 1　标本选用我院 1 996年～ 1 997年外科手术切除肝细胞癌标本 39例及癌旁非癌肝组织 8例 ,其中男性 34例 ,女性 5例 ;年龄 2 4～ 71…     

非疟流行区49例疟疾患者临床特征与趋势分析

多年来,中南地区疟疾发病率一直很低。然而,近年来随着国内外经济交流的不断扩大,人员流动不断增加,疟疾的发病也逐渐增多。其发病以及临床表现等呈现出一些新的特征和趋势。为此,我们总结分析了同济医院1990～1999年49例疟疾患者的临床特点,现报道如下。1　临床资料1.1　病例选择　49例患者均为同济医院住院患者,其中男性30例,年龄1.4～49岁;女性19例,年龄4～57岁。1.2　疟疾类型　49例患者中,恶性疟10例,其中脑型疟2例,间日疟39例,其中输血疟疾14例。这些患者均经反复多次血涂片和(或)骨髓涂片找到疟原虫而确诊。49例患者中有35例为近4年…     

CCK-8法检测表没食子儿茶素没食子酸酯对胰腺癌PANC-1细胞增殖的抑制作用

目的 检测表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate,EGCG)对体外培养的人胰腺癌细胞系PANC-1增殖的影响.方法 缺氧条件下体外培养胰腺癌PANC-1细胞,外源性给予不同剂量的EGCG(10、20、40、60、80、100、160 μg/mL)作用细胞不同时间(12、24、48 h),CCK-8法检测不同浓度药物对胰腺癌细胞增殖的影响.结果 EGCG可显著抑制人胰腺癌细胞PANC-1的增殖,其抑制率在药物浓度和时间上呈剂量依赖性和时间依赖性关系;160 μg/mL EGCG作用48 h后,PANC-1细胞的生长抑制率高达(91.03±2.32)%.结论 EGCG对体外缺氧培养的人胰腺癌细胞系PANC-1的增殖有显著抑制作用.     

带有6肽组氨酸的HBV S/S145真核表达载体的构建及应用

目的 构建稳定表达带有6肽组氨酸的HBV S/S145蛋白的真核载体.方法 应用PCR技术及体外基因重组技术,将S基因和nt587突变的S基因插入带有his-tag的pxF2RH载体中,扩增6个组氨酸和S/S145基因,最后与经Nhe I、Sal I双酶切的线性载体pCI-neo连接,构建成带有6肽组氨酸的稳定表达S/S145的真核表达载体(简称pCI-his-SY/S145).用脂质体转染的方法将质粒转至人宫颈癌细胞,通过酶联免疫吸附试验(ELISA)检测细胞上清中抗原的分泌情况.用Western-blot方法检测细胞中外膜蛋白的表达情况.结果 真核表达载体pCI-his-SY/S145的测序结果与预期大小一致.ELISA方法可检测到细胞上清中的野生型表面抗原,但检测到145突变抗原表达水平低.应用Western-blot方法可以同时检测到野生型和G145R突变的外膜蛋白表达.结论 带有his-tag的重组质粒pCI-his-S/S145可以在Hela细胞中成功表达融合蛋白,且组氨酸可作为检测蛋白的标志.     

旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原表达的免疫组化研究

目的 从组织学和免疫学角度寻找旱獭嗜肝病毒感染的证据。方法 应用免疫组织化学技术以土拨鼠肝炎病毒表面抗原抗体检测101份旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原的表达，同时观察旱獭肝组织常规病理改变，并对抗原检出与病理组织改变的关系进行相关分析。结果 旱獭肝组织中嗜肝病毒表面抗原检出率为82．2％(83／101)。阳性抗原颗粒定位于肝细胞胞浆和／或胞膜，阳性细胞呈散在、簇状和片状分布。101份肝组织标本中14份出现肝炎的病理改变，且与抗原检出之间存在明显的相关性(r=0．92)。结论 首次应用免疫组织化学技术证实旱獭存在类似土拨鼠肝炎病毒的嗜肝病毒感染，此种动物有可能用于建立嗜肝病毒感染动物模型。