猪深低温停循环长程时间窗脑保护机制研究

目的研究深低温停循环长程时间窗90min行间歇性一侧颈动脉顺行灌注脑保护液的辅助脑保护作用。方法实验小猪(10～15kg)22只分三组:空白对照组6只,18℃不停循环90min,不加灌注脑保护液;阳性对照组8只,18℃停循环90min,不加脑保护液灌注;实验组8只,18℃停循环90min一侧颈动脉顺行灌注保护液。采用改良开胸体外循环法建立猪深低温模型,转流降温至鼻咽温18℃时停循环90min,分别在停循环期间、降温和复温时加用脑保护液间歇灌注,观察停循环长程时间窗及辅助灌注的脑血流量和生理指标变化、神经血红蛋白(Neuroglobin,Ngb)的表达和电镜下海马组织神经元的超微结构变化。结果实验组脑血流量在辅助灌注下由(22.2±2.5)ml.min-1.100g-1上升到(38.5±2.6)ml.min-1.100g-1。空白对照组检测到少量神经元形态学改变,阳性对照组电镜下可以观察到神经元线粒体明显肿胀,而实验组线粒体形态正常,突触有大量囊泡聚集,RT-PCR神经血红蛋白表达上调,c-fos蛋白表达增加。结论1,6-二磷酸果糖 氧和冷晶液是一种较好的脑保护液;停循环90min内辅助灌注有较好的脑保护作用;深低温下的氧耐受可能源于Ngb有较好的携氧脑保护作用。     

ERK在榄香烯抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖中的作用

目的:探讨莪术提取物榄香烯抑制神经胶质瘤细胞体外增殖的机制及其对神经胶质瘤细胞体内增殖的影响。方法:采用细胞计数、Western印迹等方法分别检测不同浓度和不同作用时间榄香烯对胶质瘤细胞的增殖影响和对ERK、Akt蛋白质表达的影响,并观察接种胶质瘤细胞裸鼠受榄香烯作用后肿瘤增殖的变化。结果:榄香烯对大鼠C6胶质瘤细胞具有明显的抑制增殖作用,该增殖抑制效应呈剂量、时间依赖性。榄香烯可明显下调磷酸化ERK表达,同样呈剂量、时间依赖性,而对Akt表达无明显影响。榄香烯可明显抑制C6胶质瘤细胞的体内增殖。结论:榄香烯能有效抑制胶质瘤细胞的体内和体外增殖,下调磷酸化ERK蛋白质表达可能是榄香烯抑制C6细胞增殖的机制。     

日本关于ITP研究的新进展

特发性血小板减少性紫瘢(Idiopathicthrombocytopenic purpura,ITP)是以血小板减少为基础的一种出血性疾病。表现为皮肤粘膜自发性出血,可有大片瘀斑,出血时间延长,血块收缩不良,毛细血管脆性试     

细胞外信号调节激酶在缺糖缺氧/复糖复氧神经元中的表达与银杏叶提取物的调节作用

目的研究细胞外信号调节激酶(ERK1/2)在缺糖缺氧/复糖复氧神经元中的表达以及银杏叶提取物的调节作用。方法利用原代培养的皮层神经元,通过去除培养液中的糖和氧(oxygen and glucose deprivation,OGD)模拟缺血缺氧,恢复糖氧供给模拟再灌注。通过免疫蛋白印迹法测定ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达。再灌注时加用银杏叶提取物(EGB761)观察其对神经元保护作用以及时ERK1/2表达的调节作用。结果缺糖缺氧/复糖复氧后神经元p-ERK1/2表达明显下降,EGB761可剂量依赖地保护神经元活性,并可上调p-ERK1/2蛋白的表达。结论EGB761对培养的神经元缺糖缺氧/复糖复氧损伤有保护作用,该作用可能与激活ERK信号转导通路有关。     

NVP-LDE225与放射联用治疗黑色素瘤的潜在作用机制

目的初步探讨音猬因子(SHH)信号通路抑制剂NVP-LDE225与放射联用治疗黑色素瘤的潜在作用机制以及可行性。方法通过qPCR的方法检测处理前后黑色素瘤细胞Melan-A及SK-MEL-2中Gli1的mRNA的表达量。NVP-LDE225、GDC-0449与放射联合处理24 h后, 通过细胞计数法和CCK-8法检测黑色素瘤细胞Melan-A及SK-MEL-2的细胞数量与细胞活性, 细胞克隆法检测Melan-A及SK-MEL-2的生存以及增殖能力, 流式细胞术检测Melan-A细胞周期的变化, Western blot检测Melan-A细胞中凋亡蛋白Bax及Caspase3的表达变化。结果单纯给予Smo抑制剂NVP-LDE225能够抑制黑色素瘤细胞中Gli1的mRNA表达, 减少黑色素瘤细胞的增殖, 诱导其凋亡, 且将黑色素瘤细胞阻滞于G0/G1期。NVP-LDE225处理后1 h给予γ射线照射将进一步抑制SHH信号通路, 使黑色素瘤细胞阻滞于G2/M期, 进一步抑制黑色素瘤细胞的增殖。结论 Smo抑制剂NVP-LDE225能抑制黑色素瘤细胞中SHH信号通路, 抑制细胞增殖, 与放射联...     

TRPC6对肝癌细胞增殖的介导

目的 瞬时受体势(TRP)是一种新发现的钙通道,是当前细胞信号转导领域内的研究热点之一.以往有关TRP通道的研究主要集中在神经系统,现已开始向其它研究领域扩展.笔者推测,TRP通道可能与肝癌细胞的增殖有关.该研究将证实此推测.方法 应用TRPC通道抑制剂(SKF-96365)和RNAi技术抑制该通道蛋白在肝癌细胞中的表达和功能,观察TRPC被抑制前后肝癌细胞体外增殖能力的改变.结果 研究发现,应用SKF-96365和siRNA方法阻滞TRPC6的通道功能后,肝癌细胞(HepG2和SMMC-7721)的增殖被明显抑制.结论 该研究证明TRPC6通道介导了肝癌细胞的增殖,为肝癌细胞增殖机制的研究提供了新的思路,探索了肝癌临床治疗新的细胞膜上的靶点,同时也拓展了TRP通道的研究领域.     

NVP‐LDE225与放射联用治疗黑色素瘤的潜在作用机制

目的 初步探讨音猬因子（SHH）信号通路抑制剂NVP‐LDE225与放射联用治疗黑色素瘤的潜在作用机制以及可行性。方法 通过qPCR的方法检测处理前后黑色素瘤细胞Melan‐A及SK‐MEL‐2中Gli1的mRNA的表达量。NVP‐LDE225、GDC‐0449与放射联合处理24 h后,通过细胞计数法和CCK‐8法检测黑色素瘤细胞Melan‐A及SK‐MEL‐2的细胞数量与细胞活性,细胞克隆法检测Melan‐A及SK‐MEL‐2的生存以及增殖能力,流式细胞术检测Melan‐A细胞周期的变化,Western blot检测Melan‐A细胞中凋亡蛋白Bax及Caspase3的表达变化。结果 单纯给予Smo抑制剂NVP‐LDE225能够抑制黑色素瘤细胞中Gli1的mRNA表达,减少黑色素瘤细胞的增殖,诱导其凋亡,且将黑色素瘤细胞阻滞于G₀/G₁期。NVP‐LDE225处理后1 h给予γ射线照射将进一步抑制SHH信号通路,使黑色素瘤细胞阻滞于G₂/M期,进一步抑制黑色素瘤细胞的增殖。结论 Smo抑制剂NVP‐LDE225能抑制黑色素瘤细胞中SHH信号通路,抑制细胞增殖,与放射联用后,进一步增加抑制细胞增殖的效果。其可以作为一个潜在的与放疗联合治疗黑色素瘤的药物,值得进一步研究。     

特异性投射神经元的单细胞分离与测序

目的:开发一种适用于特异性投射神经元转录组测序的单细胞分离方法。方法:用逆行示踪腺相关病毒(AAV)特异性标记成年小鼠丘脑底核(STN)投射至丘脑前核(ANT)的神经元,通过梯度离心将其制备成单细胞悬液,利用显微操纵器逐个吸取被荧光标记的神经元,运用Smart-seq2构建基因文库并进行质检和测序。结果:利用该方案成功分离到STN投射至ANT神经元;所构建的cDNA文库质量满足测序要求;通过测序结果比对,在目标神经元内检测到病毒表达的荧光蛋白基因。结论:本研究建立了一种适用于转录组测序的单细胞分离方法,可高效、高质量分离特异性投射神经元,为未来在靶细胞数目稀少的组织样本中进行转录组学研究提供了一种新的方案。     

糖原合酶激酶-3β在肝癌细胞迁移过程中的作用

目的通过调节糖原合酶激酶-3β(GSK-3β)来观察其对肝癌细胞迁移能力的影响,研究GSK-3β在肝癌细胞迁移过程中发挥的作用。方法分别应用GSK-3特异性抑制剂LiCl和SB216763抑制GSK-3β的活性,或转染GSK-3βWT、GSK-3βS9A、GID5-6质粒影响GSK-3β的活性,通过划痕实验、小室迁移实验、微管组织中心体(MTOC)实验等观察处理前后肝癌细胞系SMMC-7721和Hep3B迁移能力的改变,并用免疫细胞化学法观察肝癌细胞迁移后磷酸化GSK-3β(pGSK-3β)的分布。结果划痕实验发现,用LiCl和SB216763处理后,SMMC-7721细胞的相对迁移率分别下降36.44%和41.78%,Hep3B细胞的相对迁移率都下降26.66%。转染GSK-3βWT后,GSK-3β和pGSK-3β表达上调,SMMC-7721细胞相对迁移率降为61.27%;转染GSK-3βS9A后,GSK-3β表达上调,pGSK-3β变化不明显,SMMC-7721细胞相对迁移率降为38.61%;转染GID5-6后,GSK-3β变化不明显,pGSK-3β表达增多,SMMC-7721细胞相对迁移率降为36.49...     

亲肺军团杆菌的遗传型和细胞脂肪酸组成分析

本文报告了亲肺军团杆菌的遗传型和细胞脂肪酸分析的结果.我国分离的第一株亲肺军团杆菌血清6型的DNA Mol%是37,与同型标准株芝加哥2号的杂交率是94.6%.含量最多的脂肪酸是饱和的含支链十六碳酸(i-16∶0),其次是不饱和的直链十六碳酸(16∶1),最少的是十八烷酸(18∶0).支链酸的含量为总脂肪酸含量的62～66%.