脱脂牛奶低温法保存微生物菌种的研究

目的探索实验室常见菌种的最适合保藏方法.方法采用斜面低温法、半固体穿刺法、液体石蜡法、脱脂牛奶低温冻存法、冷冻干燥保存法进行研究,考察各方法保存后菌的存活时间和存活率.结果用斜面低温法、半固体穿刺法保藏6个月时菌种存活率在80%以上,但随后菌种迅速死亡存活率降低至0;液体石蜡法可保藏9～12个月.用脱脂牛奶低温冻存法保藏的菌种在2年后存活率仍达97.9%,且菌种的形态、生理特征基本未变.冷冻干燥保存2年后存活率100%.结论脱脂牛奶低温冻存法优于斜面低温法、半固体穿刺法等常规菌种保存法,保存2年后菌株存活率与冻干法比较无显著差异,且比冻干法操作简便,更容易开展.     

红曲霉菌对姜黄素的转化及产物自由基清除和抗脂质过氧化作用的研究

目的研究红曲霉菌对姜黄素的微生物转化及转化总产物的自由基清除和抗脂质过氧化的作用,并对转化产物进行了初步分析。方法用本实验室保存的红曲霉菌对姜黄素进行微生物转化,同时设立菌株对照和底物对照;研究转化总产物对DPPH自由基的清除能力;研究转化总产物对食饵性高脂血症小鼠肝脏和血清MDA、SOD、GSH—Px等过氧化脂质的影响。用乙酸乙酯提取转化产物,用TLC、HPLC—DAD（Agilent Zorbax Extend C18柱,0．1％乙酸和乙腈梯度洗脱,流速1．0mL-min^-1）对转化产物进行了初步分析。结果姜黄素转化总产物在10000～400mg·mL^-1（相当于含姜黄素100～4 mg·mL^-1）内有很强的自由基清除能力,总产物浓度在100mg·mL^-1还保留了47．46％的清除能力;而底物对照物在10000、2000mg·mL^-1时有一定的清除能力,但浓度在400mg-mL^-1时自由基清除能力已明显减弱,100mg-mL^-1以下已基本消失。转化总产物500,200,100mg·kg·d^-1（相当于姜黄素5,2,1mg·kg·d^-1）均能降低高脂血症小鼠肝脏和血清的过氧化脂质,而菌株对照组（500mg·kg·d^-1）和底物对照组（500mg·kg·d^-1,相当于姜黄素5mg·kg·d^-1）抗脂质过氧化作用不明显。研究超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶,发现姜黄素转化产物对此二酶的作用不明显,其抗氧化作用可能并非通过改变此二酶的活性。转化产物经HPLC—DAD分析,发现可能存在6个转化产物,其保留时间分别为16．3,22．1,23．2,28．0,33．0,36．1min,其光谱图与姜黄素存在明显差异。结论姜黄素经红曲霉菌转化后形成了由6个代谢产物组成的新组合型天然姜黄素类似物群,其自由基清除能力和抗脂质过氧化作用显著增强。     

AQP1在雷丸蛋白pPeOp 抑制胃癌细胞SGC-7901 迁移中的作用

目的：研究水调节蛋白（Aquaporin-1）在雷丸蛋白抑制胃癌细胞SGC-7901迁移中的作用。方法：以30μg/mL、60μg/mL、90μg/mL 3个浓度雷丸蛋白pPe Op干预SGC-7901细胞,以5-氟尿嘧啶（5-Fu）为阳性对照,乙酰唑胺与卡巴胆碱作为AQP1激动剂和抑制剂。细胞活力测定四氮唑蓝法（MTS）检测pPe Op对SGC-7901细胞活性影响;划痕法检测细胞迁移能力;Western blot检测AQP1蛋白表达情况。结果：加药组细胞存活率低于正常组,与pPe Op浓度呈负相关（P<0.05）;乙酰唑胺与卡巴胆碱作用后细胞存活率无明显区别;划痕法结果显示胃癌细胞的迁移能力随pPe Op作用浓度的增加而减弱;Western blot结果显示,p Pe Op处理组AQP1表达含量呈下降趋势。高浓度乙酰唑胺作用后,AQP1表达量减少;较高浓度卡巴胆碱作用后,AQP1表达量增加。结论：雷丸蛋白pPe Op对胃癌SGC-7901细胞中水通道蛋白AQP1的表达和迁移具有显著的抑制作用。     

杭麦冬丛枝菌根真菌孢子的筛选及萌发研究

目的:研究杭麦冬根际菌根真菌孢子的筛选及萌发.方法:采集杭麦冬块根及其根际土壤.块根切片、透明、染色、脱色后镜检观察菌根真菌.土壤湿筛倾析-蔗糖离心法分离菌根孢子,并研究孢子的萌发.结果:麦冬块根内发现丰富的菌根真菌菌丝和泡囊,偶见丛枝.根际土壤分离鉴定了10种菌根孢子,球囊霉属和巨孢囊霉属为主要优势类群.球囊霉属孢子体外可萌发,能形成次级菌丝,但168h后自溶;含10～1 000 μg·mL-1的麦冬汁能促进孢子的萌发,100 μg·mL-1时萌发率最高.结论:杭麦冬块根组织含丰富的丛枝菌根真菌,根际土壤含丰富菌根真菌孢子.菌根孢子实验条件下可萌发,但随后出现自溶,麦冬汁能促进萌发.     

小檗碱对DC联合CIK杀伤HepG-2活性的影响

目的：探讨小檗碱对树突状细胞（DC）联合细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）杀伤HepG-2细胞活性的影响。方法：常规分离外周血单个核细胞并诱导生成DC和CIK;DC分成小檗碱组和阴性对照组,小檗碱组在培养48h时加入小檗碱;第8d观察形态并计数;收集培养上清液并测定IL-12水平：将Dc与cIK按不同比例共培养7d,计数各组CIK;MTT法检测CIK对HepG-2的杀伤率。结果：培养第8d小檗碱组DC较阴性对照组多（P〈0．01）;细胞培养上清液中IL-12水平无差别：小檗碱组DC诱导CIK数较阴性对照组多,两组CIK对HepG-2的杀伤率无明显区别。结论：小檗碱主要通过促进DC和CIK增殖发挥增强Dc—CIK群体杀伤肿瘤活性。     

药用真菌雷丸菌丝冻干粉对小鼠的毒性实验研究

目的：研究雷丸菌丝冻干粉的急性毒性作用。方法：通过深层液体发酵获取雷丸菌丝并进行真空冷冻干燥,以高、中、低3个剂量组对ICR小鼠进行灌胃,采用一次性给药方式给药,连续观察14天。实验结束后取血清,测ALT和AST,取肝、心、脾、肺、肾5脏器进行石蜡病理切片检查。结果：各实验组均未见小鼠死亡,但用药组小鼠表现行为异常。病理切片显示,与对照组相比,用药组小鼠脾脏有极轻微病变,但未见细胞坏死;其余脏器未见异常。AST和ALT分析显示,各处理组间未见显著性差异。结论：雷丸菌丝冻干粉对小鼠有极轻微毒性,仍需进一步研究以确定毒性的原因。     

小檗碱对DC-CIK增殖和杀瘤活性影响的初步研究

许多中药及中药复方可诱导细胞产生细胞因子或具有细胞因子样作用,且能增加免疫细胞活性,故可用于肿瘤的生物治疗.本课题研究了小檗碱(Berberine,Ber)对外周血来源DC和CIK增殖和杀HepG-2活性的影响,探讨小檗碱应用于肿瘤过继免疫治疗的潜能.     

姜黄素经红曲霉菌发酵后对高脂血症小鼠脂代谢的影响

目的:利用红曲霉菌对姜黄素进行发酵,研究发酵后姜黄素对高脂血症小鼠脂代谢的影响.方法:选择本实验室保存的不产洛伐他汀的红曲霉菌,制成适量的孢子悬液,加入到装有1%姜黄素的发酵培养基中,恒温培养进行姜黄素的发酵.设只含1%姜黄素而不接种菌株的底物对照,考察转化液中是否存在非微生物引起的药物分解产物;设不含姜黄素的菌株对照,排除菌株的发酵产物和培养基残留成分的干扰.昆明种小鼠喂饲高脂饲料15d形成高脂血症模型,以高、中、低剂量(质量浓度分别为500、200、100 mg/kg)的发酵姜黄素灌胃;设底物对照和菌体对照治疗组(500 mg/kg);模型组、正常组等容积生理盐水灌胃.治疗10 d后禁食12 h,摘眼球取血,酶法测定TC、TG、HDL-C;取肝脏匀浆后,提取上清液,测定TC、TG、HDL-C.结果:发酵后姜黄素高、中、低剂量治疗均能显著减低高脂血症小鼠血清TC、TG,血清TC降低幅度分别为38.7%、34.5%、32.7%,TG降低幅度分别为38.3%、28.6%、30.1%,而底物对照组和菌体对照组的治疗效果不明显.发酵后姜黄素亦能降低高脂血症小鼠肝脏TC、TG,且同等质量浓度的底物姜黄素疗效不明显.结论:姜黄素发酵后能显著提高高脂血症小鼠的血脂调节能力.     

僵蚕生产菌白僵菌胞外分泌蛋白对小鼠的毒性实验研究

目的：通过研究白僵菌胞外分泌蛋白对小鼠毒性作用，判断是否为僵蚕入药引起不良反应的原因之一。方法：提取球孢白僵菌胞外分泌蛋白，以高、中、低3个剂量组对ICR小鼠进行腹腔注射，另设Tris-HCl和空白两对照组，连续注射7天。实验结束后取血清，测ALT和AST，取肝、心、脾、肺、肾5脏器进行石蜡病理切片检查。结果：各实验组均未见小鼠死亡，蛋白处理组小鼠表现行为异常。病理切片显示，与对照组相比，蛋白处理组小鼠肝脏及肺脏有极轻微病变，但未见细胞坏死；其余脏器未见异常。AST和ALT分析显示，各处理组间未见显著性差异。结论：综合各指标来看，球孢白僵菌胞外分泌蛋白有可能是僵蚕入药引起不良反应的因素之一，如若确定尚需进一步深入研究。     

浙麦冬根际菌根真菌多样性及土壤性状研究

目的：研究浙麦冬根际菌根真菌多样性以及种植地土壤性状。方法：用湿筛法获得麦冬根际土壤的丛枝菌根真菌孢子,计数孢子密度、物种丰富度及各物种的出现频率;分析浙麦冬种植地土壤性状及金属含量和农药残留。结果：浙麦冬根际土壤中丛枝菌根资源丰富,孢子密度平均824.33个/100g土壤,球囊霉属、巨孢囊霉属和无梗囊霉属为优势类群;菌种丰富度平均为5。丛枝菌根真菌孢子的分布呈明显的季节性变化。种植土壤含有丰富的钙、镁、锌、铜、铬等金属元素,无农药残留。结论：浙麦冬根际含有丰富的球囊霉属、巨孢囊霉属和无梗囊霉属等菌根真菌,其分布具有明显的季节性;根际土壤含有丰富的钙、镁、锌、铜、铬等金属元素。