自噬和蛋白酶体降解途径在突变型α-突触核蛋白PC12细胞凋亡中的作用

目的 利用建立好的转染A53T突变型α-突触核蛋白的大鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞株,探讨自噬和泛素-蛋白酶体通路在细胞凋亡途径中的具体作用.方法 选择特异性蛋白酶体抑制剂和大自噬抑制剂及诱导剂作用于稳定转染的A53T细胞株,四甲基偶氮唑盐法和流式细胞仪检测细胞活力和各组细胞凋亡率,电镜观察超微结构,并测定细胞培养液中NO的活力和热休克蛋白70(Hsp70)及Caspase-3蛋白表达.结果 蛋白酶体抑制剂环氧霉素(100 nmol/L)和(或)大自噬抑制剂3-MA(10 mmol/L)处理A53T细胞24 h后环氧霉素组、3-MA组和环氧霉素+3-MA组细胞活力(A值分别为0.23±0.01、0.19±0.01、0.17±0.01)较对照A53T细胞组(A值为0.32±0.06)明显下降(P<0.05);而大自噬诱导剂雷帕霉素(0.2 μg/ml)处理后细胞存活率(A值为0.44±0.08)显著高于其余用药组.与对照组(1.55%±1.15%)相比,3-MA、环氧霉素、环氧霉素+3-MA组作用24 h后A53T细胞的凋亡百分率(分别为4.74%±0.91%、4.59%±1.18%、5.40%±1.75%)显著增高(P<0.05),而大自噬诱导剂下调蛋白酶体抑制剂导致的凋亡;蛋白酶体抑制剂组NO和Hsp70蛋白含量也明显高于对照组.结论 大自噬和蛋白酶体途径障碍促进了凋亡发生,抑制或诱导自噬对Hsp70和NO的影响不如蛋白酶体途径对其影响大.     

4种中药复方对大鼠实验性急性应激行为及下丘脑-垂体-肾上腺轴的影响

目的:观察四逆散、半夏厚朴汤、甘麦大枣汤、桂枝甘草龙骨牡蛎汤4种中药复方对大鼠实验性急性应激行为及下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)的影响。方法:将大鼠分为7组:正常组、模型组、四逆散组、半夏厚朴汤组、甘麦大枣汤组、桂枝甘草龙骨牡蛎汤组,测试各组大鼠应激行为、放射免疫法测定大鼠下丘脑促肾上腺皮质激素释放激素(CRH)、血浆促肾上腺皮质激素(ACTH)及血清皮质酮(CORT)。结果:四逆散减少旷场实验的爬格次数(P<0.01),降低CRH,CORT的含量(P<0.01,P<0.05);半夏厚朴汤延长尾悬挂试验静止时间(P<0.05),降低CRH含量(P<0.05);甘麦大枣汤延长尾悬挂试验静止时间(P<0.05),减少挣扎次数(P<0.01),降低CRH,ACTH,CORT的含量(P<0.01,P<0.05);桂枝甘草龙骨牡蛎汤减少旷场实验的爬格次数(P<0.01),延长尾悬挂试验静止时间(P<0.05),减少尾悬挂试验挣扎次数(P<0.01),降低CRH,ACTH,CORT的含量(P<0.01,P<0.05)。结论:4种中药复方分别通过理气、化痰、补气、温阳等作用于HPA轴不同环节,改变应激行为方式,从而增强机体应对急性应激的能力。     

中药防治氨基糖苷类药物耳毒性的研究进展

该文介绍了氨基糖苷类抗生素耳毒性的发生机制,回顾了中药对氨基糖苷类抗生素耳毒性防治作用的研究资料,总结并分析了10味中药(川芎、丹参、刺五加、当归、黄芩、葛根、茯苓、骨碎补、儿茶素、月见草)和多种复方制剂(复聪片、耳聋左慈丸、金匮肾气丸、天鼓冲剂、复方丹参、补肾聪耳片等)对氨基糖苷类抗生素实验性耳毒性的防治作用及可能机制。     

可视法膜片钳术观察大鼠黑质-纹状体脑片中黑质细胞电生理特性

目的 建立大鼠黑质-纹状体脑片,探讨中脑黑质细胞的电生理特性.方法 应用红外微分干涉相差(IR-DIC)技术在直视下对黑质-纹状体脑片中100个黑质细胞动作电位及超极化激活的内向电流(Ih)进行观察和分析.结果 可视法脑片膜片钳术可对脑片中黑质细胞进行准确定位和功能状态的筛选.记录的100个细胞中94个可见自发动作电位,其中频率<10 Hz的85个(A类细胞),平均为(5.0±2.7)Hz;>10 Hz的9个(B类细胞),平均为(14.0±2.6)Hz.后者电位变化过程与前者相比缺少明显的超极化.92.9%(79/85)的A类细胞诱发出明显的,Ih电流(-120 mV,47.5pA±5.8 pA),提示为多巴胺能细胞;B类细胞则没有或只有很小的,Ih电流(-120 mV,4.9 pA±1.5pA),提示为γ-氨基丁酸能细胞.两者比较P<0.001.结论 通过在可视条件下对黑质-纹状体脑片黑质细胞进行基本电学特征观察,可有效地识别黑质细胞的类型,为深入研究黑质-纹状体通路电信号的发生和传递提供了基础.     

大鼠中脑黑质器官型脑片与在体发育黑质结构的形态学比较

目的：比较不同时间离体培养黑质脑片与在体发育黑质结构的形态学变化。方法：选出生当天SD大鼠，制备中脑黑质器官型脑片（厚度350μm）。用Millicell-CM微孔膜脑片离体培养技术分别培养脑片至7、14、21和28d，光镜观察，常规苏木精-伊红染色及酪氨酸羟化酶（TH）免疫组化反应染色，并与同龄SD大鼠作形态学及TH阳性反应细胞计数比较。结果：培养0-28d内器官型脑片黑质细胞的体积及细胞密集程度均小于同期在体发育的黑质结构；离体培养与同期在体发育的黑质结构比较，TH阳性反应细胞趋于幼稚，细胞间连接也出现较晚，两者细胞计数比较有统计学意义（P〈0．05）。结论：SD大鼠黑质发育的成熟时间约为生后14d；离体培养的黑质脑片与在体生长的黑质结构发育过程相似，但离体培养的黑质脑片发育滞后于在体发育的黑质结构。     

心理应激动物模型的研制及其应用

心理应激是指机体通过认知、评价而感觉到应激原的威胁时引起心理生理机能改变的过程 [1]。心理应激与疾病的关系以及心理应激的发生机制是当前医学界研究的热点,国内外各学科各专业的科研人员对此从许多方面进行了探讨和总结,取得了一定的进展和成果。然而,由于心理应激的强度     

四种中药复方对急性心理应激大鼠IL-1β和IL-2的影响

目的通过观察理气、化痰、补气、温阳方药对急性心理应激大鼠白细胞介素1β(IL1β)、白细胞介素2(IL2)的影响,研究中药复方对急性应激免疫内分泌的调节作用。方法将大鼠分为7组:正常组、模型Ⅰ组、模型Ⅱ组、四逆散组、半夏厚朴汤组、甘麦大枣汤组、桂枝甘草龙骨牡蛎汤组;观察各组大鼠的胸腺指数、脾指数及肾上腺指数,采用放免法测定各组大鼠血清IL1β、IL2的含量。结果急性心理应激后大鼠血清IL1β升高,IL2降低,胸腺指数、脾指数降低(P<0.01),肾上腺指数无变化(P>0.05);四逆散升高胸腺指数、脾指数(P<0.01、P<0.05),降低IL1β(P<0.01);半夏厚朴汤降低IL1β(P<0.01、P<0.05),升高IL2(P<0.05);甘麦大枣汤升高脾指数,降低IL1β(P<0.05);桂枝甘草龙骨牡蛎汤升高胸腺指数(P<0.01),降低IL1β的含量(P<0.01),升高IL2的含量(P<0.01)。结论四种中药复方通过作用于应激大鼠细胞因子及下丘脑-垂体-肾上腺轴的不同环节,调节急性心理应激后大鼠的免疫内分泌。