UPLC-ESI-MS/MS法同时测定胡黄连中4种环烯醚萜

目的建立UPLC-ESI-MS/MS法同时测定胡黄连Picrorrhiza scrophularaeflora Pennell中胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅲ、獐牙菜苷的含有量。方法胡黄连甲醇提取物的分析采用ACTUITY UPLC~? BEH Amide柱(2.1 mm×100 mm, 1.7μm);流动相0.1%甲酸-乙腈;体积流量0.4 mL/min;柱温40℃。采用负离子模式,MRM多反应监测扫描模式。结果胡黄连苷Ⅰ、胡黄连苷Ⅱ、胡黄连苷Ⅲ、獐牙菜苷分别在15.28～305.60 ng/mL(r=0.999 3)、 11.54～230.80 ng/mL(r=0.999 4)、11.20～224.00 ng/mL(r=0.999 5)、10.06～201.20 ng/mL(r=0.997 4)范围内线性关系良好,平均加样回收率分别为101.62%、101.03%、102.37%、99.41%,RSD分别为1.30%、1.62%、2.45%、0.72%。结论该方法准确稳定,重复性好,可用于胡黄连的质量控制。     

放射性肺纤维化基质重构与肌成纤维细胞凋亡抵抗的相关性

目的肌成纤维细胞(MFB)凋亡抵抗是肺纤维化进行性发展的关键原因,但MFB发生凋亡抵抗的机制尚未明确。MFB的状态与微环境-细胞外基质密切相关,而纤维化时细胞外基质呈现硬化、重构的特征。前期研究发现,体外3D拟基质不能诱导MFB凋亡抵抗。本研究通过制作去细胞基质(DM)而真实呈现肺基质结构特征,以探讨放射性肺纤维化(RIPF)基质重构与MFB凋亡抵抗的相关性。方法 C57BL/6小鼠全肺照射(总剂量18 Gy)形成RIPF模型;照射后2个月收取肺组织,采用化学加酶学方法制备DM;将分离获得的肺原代纤维细胞分别培养于不同组的DM切片上,TUNEL法比较细胞凋亡情况,组学技术比较转录水平的差异,Western印迹和免疫荧光法检测FAK,AKT和Bcl-2水平。结果 (1)小鼠胸部照射后2个月收集肺组织样本,免疫荧光染色显示,MFB(α-SMA+)表达Bcl-2增强,表现抗凋亡特征。(2) HE染色、电镜检测显示肺组织DM在体外重现肺纤维化基质紊乱、重构的原貌。(3)分别收集培养在正常组DM切片(C-DM)和RIPF组DM切片(RIPF-DM)上的肺纤维细胞,发现RIPF-DM上的MFB凋亡比例低于C-DM,活化胱天蛋白酶3/胱天蛋白酶3下调;KEGG通路富集发现,RIPF-DM可诱导MFB中PI3K-AKT-CREB通路水平上调。(4) Western印迹结果证实,RIPF-DM可上调pFAK/FAK,p-AKT/AKT和Bcl-2水平。结论 RIPF基质重构可诱导MFB凋亡抵抗,其机制与AKT通路上调有关。     

不同照射方式下核黄素-A波紫外线兔巩膜胶原交联术对兔巩膜成纤维细胞生物力学特性的影响

目的　研究不同照射方式下核黄素-A波紫外线兔巩膜胶原交联术对兔巩膜成纤维细胞生物力学特性的影响。方法　取健康新西兰大白兔24只，随机将兔平均分为A、B两组，每组选取左眼为实验眼，右眼为对照眼。麻醉后暴露左眼鼻上方巩膜。在该处巩膜滴加5-磷酸核黄素5 min后，用波长为370 nm的紫外线灯照射。A组的照射时间为30 min，能量密度为3.0 mW·cm^-2；B组的照射时间为9 min，能量密度为10.0 mW·cm^-2。照射期间，每2 min滴加1次5-磷酸核黄素溶液，以保持巩膜的湿润。术后60 d，处死实验兔，培养实验眼交联部位及对照眼相应部位的巩膜成纤维细胞，用细胞微管吸吮实验检测巩膜成纤维细胞的杨氏模量、表观黏性。结果　A、B两组实验眼巩膜细胞的杨氏模量、表观黏性均较各自对照眼显著增强，差异均有统计学意义（均为P＜0.05）；而A、B两组实验眼间、及对照眼间巩膜细胞的杨氏模量、表观黏性差异无统计学意义（均为P＞0.05）。以上结果表明，交联术后巩膜细胞的黏弹性发生了明显的变化，黏弹性显著升高。而两种照射方式之间巩膜细胞的黏弹性无显著差异。结论　两种不同的照射方式，均能使巩膜成纤维细胞的生物力学性能发生显著增强，而两种照射方式之间并未见明显的差别。     

Ⅰ类手术切口患者术后医院感染特征及影响因素分析

目的分析Ⅰ类手术患者术后医院感染的特征与影响因素,为制定有效的防控措施提供科学依据。方法回顾性分析2015年1月-2017年12月某部队医院收治的Ⅰ类手术住院患者5 751例的临床资料,监测患者术后感染情况,分析患者性别、年龄、手术方式,住院时间和侵入性操作等临床资料,归纳Ⅰ类手术切口患者医院感染的影响因素。结果Ⅰ类手术患者术后医院感染率为4.26%(245/5 751);感染部位下呼吸道为主;共培养分离病原菌261株,其中革兰阴性菌122株占46.74%,以鲍氏不动杆菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌为主;革兰阳性菌86株占32.95%,以金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌为主;真菌53株占20.31%,以白假丝酵母、光滑假丝酵母、热带假丝酵母为主;基础疾病、住院时间、抗菌药物使用时间、呼吸机使用时间、中心静脉插管时间、尿管插管时间是Ⅰ类手术切口患者术后医院感染的影响因素(P<0.05)。结论Ⅰ类手术患者术后感染率高,应采取积极措施控制风险因素,积极观察患者术后体征,合理使用抗菌药物,尽早拔除不必要的导管,减少交叉感染风险,降低医院感染发生率。     

诺考哒唑介导的细胞骨架重塑对人间充质干细胞成骨分化的影响

[目的]探究诺考哒唑(nocodazole)介导的细胞骨架重塑对人间充质干细胞(human mesenchymal stem cells, hMSCs)成骨分化的影响。[方法]取hMSCs培养至P3代分为对照组(成骨诱导)和加药组(成骨诱导+诺考哒唑)。分别于细胞培养后1、3、5、7 d收集细胞,利用CCK-8法检测细胞增殖能力;成骨诱导后1 d,显微镜下观察细胞形态变化,并通过鬼笔环肽染色和免疫荧光检测细胞骨架的变化;利用Real-Time PCR检测成骨相关基因ALP、OCN、RUNX-2的mRNA表达;利用碱性磷酸酶染色和茜素红染色方法检测hMSCs成骨分化能力。[结果]诺考哒唑对细胞的增殖无影响,差异无统计学意义(P0.05);诺考哒唑可以引起细胞形态和骨架发生明显的变化;加药组成骨基因ALP、OCN、RUNX-2的mRNA表达量显著低于对照组(P0.05);加药组碱性磷酸酶染色和茜素红染色明显浅于对照组。[结论]诺考哒唑可以介导细胞骨架发生变化,抑制hMSCs成骨分化。     

急性ST段抬高型心肌梗死患者血清成纤维细胞生长因子23动态变化及临床意义

目的:探讨ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者急性期血清成纤维细胞生长因子23(FGF-23)水平动态变化情况及其临床意义。方法:选择2016年1月至2018年1月,治疗的158例STEMI患者作为病例组,以同期100例健康体检者作为对照组。采用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测病例组患者发病第1,3,7,14,28天时的FGF-23水平。绘制ROC曲线评价血清FGF-23水平对STEMI的诊断价值。并根据血清FGF-23水平将病例组患者再分为高FGF-23亚组和低FGF-23亚组,比较两亚组发病6个月后超声心动图心功能指标及主要不良心脑血管事件的发生率。结果:STEMI组患者发病第1,3,7,14,28天时血清FGF-23水平分别为[(326.2±64.3)、(371.6±67.4)、(324.8±60.9)、(319.3±61.1)和(315.7±58.6)ng/L,均明显高于对照组(274.5±54.3)ng/L(均P<0.05)。STEMI组患者发病第1天血清FGF-23水平与Gensini评分呈正相关关系(r=0.313,P<0.05)。ROC曲线分析结果示:血清FGF-23诊断STEMI曲线下面积(AUC)为0.836,cut-off值为320.5ng/L时,对应的的灵敏度和特异度分别为71.2%和89.0%。高FGF-23亚组与低FGF-23亚组比较,发病6个月超声心动图LVEDV,LVEF和舒张早期与舒张晚期二尖瓣血流速度比值(E/A)值,差异均有统计学意义[LVEDV:(93.5±8.1)vs.(84.8±7.8)mL;LVEF:(45.9±5.6)%vs.(55.1±5.4)%;E/A:(0.9±0.4)vs(1.2±0.3),均P<0.05]。高FGF-23亚组主要不良心脑血管事件发生率为22.4%,显著高于低FGF-23亚组的8.5%(P<0.05)。结论:STEMI患者血清FGF-23水平显著增高,有可能成为STEMI诊断和评估预后的新指标。     

蒙特卡罗模拟法评价第一代头孢菌素预防手术部位感染的给药方案

目的：探讨第一代头孢菌素预防Ⅰ类切口手术部位感染的既往方案在目前微生物药敏下的预防效果。方法：基于药动学/药效学（PK/PD）理论利用蒙特卡洛模拟法进行探讨。以头孢唑林和头孢噻吩为考察药物，金黄色葡萄球菌、凝固酶阴性葡萄球菌和链球菌属为目标菌群，给药间期内游离药物浓度位于最低抑菌浓度（MIC）之上的时间占一个给药间期的百分比（fT>MIC）为PK/PD靶指数，利用蒙特卡罗模拟头孢唑林和头孢噻吩既往方案对抗目标菌群达到PK/PD靶指数的累积反应分数（CFR）≥90%为标准探讨给药策略及预防效果。结果：对于成人（体质量以60 kg计），头孢唑林仅“1 g，q 2 h”“2 g，q 4 h”“3 g，q 4 h”和“术前1 g；术中0.5 g，q 2 h”的方案，头孢噻吩仅“2 g，q 3 h”和“术前2 g；术中1 g，q 3 h”的方案对各目标菌群的CFR≥90%，两者其他的既往方案均无法达到CFR≥90%标准。结论：应用第一代头孢菌素预防Ⅰ类切口手术部位感染时，应注意选择合适的给药方案（CFR≥90%），以确保预防效果。