△Np63 mRNA在食管鳞癌患者外周血中的表达及意乙

近年研究表明,非血液系统恶性肿瘤在发展过程中,可能早期即有部分肿瘤细胞脱离原发灶并播散形成微小肿瘤细胞灶,常无临床表现,称为肿瘤微转移.     

基因芯片检测拉米夫定引起的乙型肝炎病毒基因YMDD变异的研究

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)变异基因诊断芯片,对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断。方法:设计特异性寡核苷酸探针。用点样法制备HBV变异基因诊断芯片。选择住院患者30例服用拉米夫定后,HBVDNA转阴[<500拷贝(opies/ml)]68周后又反跳≥5000copies/ml的患者进行基因芯片杂交检测。同时用PCR直接测序法对30例患者血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果:30例服药后HBVDNA反跳患者中基因芯片测得HBVYMDD变异21例,其中YVDD变异11例,YIDD变异10例。直接序列测定发现有核苷酸A741变为G,使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD)11例,有6例核苷酸A669变为C,使氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸;核苷酸G743变为T,使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YIDD)10例。其中有3例伴有核苷酸T781变为C,使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸。其结果与基因芯片完全一致。结论:HBV变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异,同PCR直接测序法比较,准确率达100%,无假阳性。     

DNA芯片技术诊断乙、丙型病毒性肝炎的研究

目的：研究病毒性肝炎基因芯片的制备,用肝炎基因诊断芯片,病毒抗原抗体及DNA/RNA（PCR）检测方法对照检测乙型和丙型肝炎血清,比较两种方法的优缺点。方法：血清来自乙型肝炎患者40例,丙型肝炎患者20例和健康人40例,乙型肝炎确诊用雅培设备试剂,荧光微离子法;抗HCV检测丙型肝炎及PCR法检测HCVRNA,确诊后用健康人血清一起进行双盲混合编组,用肝炎基因诊断芯片检测。结果：40例乙型肝炎病毒标志阳性血清,基因诊断芯片检测阳性30例,阴性10列;12例HCVRNA阳性血清,基因诊断芯片检测阳性8例;抗HCV阳性,HCVRNA阴性血清8例,基因诊断芯片检测阳性2例,阴性6例;40例健康人血清,乙型和丙型肝炎基因诊断芯片检测均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可以同时检测乙型和丙型肝炎,诊断乙型肝炎的准确率可达80%,假阳性率低;诊断丙型肝炎的阳性率低,技术有待完善。     

DNA芯片检测肝组织及血清中乙型肝炎病毒DNA的临床研究

目的：研究DNA芯片检测乙型肝炎和肝硬化患者肝组织及血清中乙型肝炎病毒（HBV）DNA的应用价值。方法：用点样仪将聚合酶链反应（PCR）扩增的HBV DNA探针制成基因芯片。对15例慢性乙型肝炎病人的血清和肝活检组织，99例乙型肝炎后肝硬化肝组织，分别用基因芯片、原位分子杂交、免疫组织化学和雅培试剂检测HBV DNA、乙型肝炎核心抗原(HBcAg)、乙型肝炎表面抗原（HBsAg)和乙型肝炎e抗原（HBeAg)。结果：用基因芯片对15份HBsAg,HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清进行检测，HBV DNA均阳性，阳性率符合率为100％；15份肝活检组织标本，免疫组化法检测HBcAg阳性15例，原位分子杂交法和基因芯片检测HBV DNA均阳性14例，阳性率93％。99份肝炎后肝硬化患者肝组织标本，HBcAg阳性67份，HBV DNA阳性53份，基因芯片检测HBV DNA阳性46份，阳性率分别为69％、88％。32例HBcAg、HBV DNA阳性的肝组织中，基因芯片检测HBV DNA均为阴性。结论：肝炎基因诊断芯片可检测肝组织及血清中HBV DNA，诊断准确率高，假阳性率低。     

DNA芯片对乙型肝炎肝硬化患者肝组织中病毒的检测

我们从基因库中筛选出乙型肝炎病毒（HBV）高度保守序列片段,通过分子克隆操作,用芯片点样仪点到特制的玻片上,制成乙型肝炎基因诊断芯片,检测了99例乙型肝炎肝硬化患者肝组织标本,同时用免疫组织化学法、原位分子杂交法检测乙型肝炎核心抗原（HBcAg）和HBV DNA。1.资料与方法:（1）芯片制备:玻片购自Sigma公司,HBV DNA靶基因和对照植物基因由博华公司提供,用通用引物进行PCR扩增,PCR产物用Cartesia7500点样仪进行点样制成芯片。（2）标本处理和DNA提取:采集本院病理科1995～2000年乙型肝炎后肝硬化肝活检     

基因芯片法对丙型肝炎病毒RNA的基因型分析

目的：制备丙型肝炎病毒(HCV)基因的分型诊断芯片，检测其对丙型肝炎患者血清HCVRNA基因分型诊断的价值。方法：根据HCV 5′端非编码区末端(5′UTR)和C区设计引物和特异性探针，将设计的20条特异性寡核苷酸探针用核苷酸合成仪合成后，配制成50μmol／ml的点样液，用点样仪点到特殊处理的玻片介质上，制成HCV基因分型诊断芯片。收集HCVRNA阳性的丙型肝炎患者血清30份作为实验组，健康人血清30份作为对照组。用荧光定量PCR仪对两组血清进行HCVRNA定量检测，实验组血清HCVRNA含量均大于5()()copies／ml，对照组血清HCVRNA均为阴性。两组血清进行HCVRNA分离纯化、逆转录反应、巢式PCR扩增后，分别用基因芯片与核酸序列测定法进行双盲HCV基因分型检测。结果：实验组血清基因诊断芯片检测均为阳性；基因分型1b型23例，3a型2例，3b型1例，2a型1例，2b型1例，混合型1b 2a1例，1b 3b型1例；核酸序列测定分型1b型25例，3a型2例，3b型1例，2a型1例，2b型1例；两种方法检测的基因分型符合率为93．3％。对照组血清基因芯片检测均阴性。结论：制备的HVC基因诊断芯片可以用于检测血清HCVRNA，并进行基因诊断分型，准确率较高。     

慢乙肝患者血清及肝组织HBVDNA表达及基因芯片检测研究

用点样仪将 PCR扩增的 HBVDNA探针制成基因芯片 ,对 15例慢性乙型肝炎 (下称慢乙肝 )患者的血清及肝活检组织 ,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法、雅培试剂检测 HBVDNA、HBc Ag、HBs Ag、HBe Ag。结果 15例患者的血清 HBs Ag、HBe Ag及基因芯片检测均阳性。15例肝组织标本中 ,免疫组化法HBc Ag阳性 15例 ,HBVDNA原位分子杂交法阳性 14例 ,基因芯片检测阳性 14例。认为肝炎基因诊断可同时检测乙肝患者血清及肝组织中的 HBVDNA。     

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后引起的HBV YMDD变异

目的 建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断方法。方法 设计特异性寡核苷酸探针数组，特别处理芯片载体，用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。选择30例服用拉米夫定后，HBV DNA转阴(＜500copies／m1)，68周后又反跳≥500copies／ml的病人进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对病人血清标本进行双盲HBV DNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBV DNA反跳病人中，基因芯片测得HBV YMDD变异21例，其中YVDD变异11例，YIDD变异10例。HBV DNA PCR直接序列测定结果为有核苷酸A741变为G，使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD)，6例核苷酸A669变为C，氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸；核苷酸G743变为T，使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸。(氨基酸基序TM—DD变为YIDD)。其中有3例伴有核苷酸T781变为C，使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异，与PCR直接测序法比较，准确率达100％。     

病毒性肝炎基因芯片检测肝炎肝硬化患者肝组织中HBV DNA的研究

目的:研究病毒性肝炎基因芯片的制备及其检测HBV DNA的准确性.方法:将PCR扩增的HBV DNA探针用点样仪点于玻片介质上,并经过点样处理后制备成基因芯片;收集肝炎后肝硬化肝组织标本99份,分别用基因芯片、原位分子杂交法、免疫组织化学法检测HBV DNA和HBcAg,比较各种方法的优缺点.结果: 53例HBcAg、HBV DNA阳性组织中基因芯片检测阳性40例; HBcAg阳性22例中基因芯片检测阳性6例; 32例HBcAg HBV DNA阴性组织中基因芯片检测均阴性.结论:肝炎基因诊断芯片可以检测肝组织中HBV DNA,准确率可达75%,假阳性率低.