survivin的siRNA靶向干扰膀胱癌的实验研究

目的实验研究靶向转染survivin的小分子干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）对膀胱癌生物学行为的影响。方法设计1对survivin编码基因序列特异的siRNA，用脂质体转染T24膀胱癌细胞株。采用流式细胞术检测转染效率和细胞凋亡；荧光实时定量PCR检测干扰前后survivin的mRNA表达；用survivin的siRNA片段插入空载体后建立重组载体pRNAT-U6、1／Neo-survivin。结果脂质体转染T24细胞后的转染效率为92．3％；survivin编码基因序列特异的siRNA能有效下调survivin基因的表达，呈时间和剂量依赖性，最大效应浓度为100nmol／L，此时survivin表达水平下调了75．91％，并显著地抑制了细胞生长，抑制率达55．29％，差异有统计学意义（P〈0．01）；细胞凋亡率亦增至45．70％，与对照相比差异有统计学意义（P〈0．01）。用限制性内切酶将空载体线性化，T4DNA连接酶将siRNA片段插入空载体中，对该重组表达载体进行鉴定，获得RNA干扰质粒载体pRNAT-U6．1／Neo-survivin。结论siRNA．survivin能显著下调膀胱癌细胞survivin基因表达水平，促进细胞凋亡，抑制肿瘤细胞增殖，可能成为膀胱癌基因治疗的新工具。成功构建的靶向survivin基因表达的RNA干扰质粒载体为进一步应用RNA干扰技术进行survivin基因功能研究奠定了基础。     

The distribution of metastases in the liver

Summary Seventy-five livers with metastases were cut sagitally into 1 cm thick slices. A total number of 11,581 metastases sections was exactly mapped. There was an average of 154 metastases sections per liver. The average diameter of the metastases was 1 cm. 40% of the metastases reached to the hepatic surface, and 60% were invisible due to their deposition in the internal parenchyma. In 8% of the livers there were only superficial metastases (average 3.2 metastases), and in 12% were only deep metastases detected (average 2.6). The total number of superficial metastases increased with increasing diameter of the secondary tumors.An approximately homogeneous distribution of hepatic metastases within the liver parenchyma has been demonstrated.     

Wolffian附件肿瘤的临床病理观察

目的 观察Wolffian附件肿瘤的临床病理特点，探讨其病理诊断与鉴别诊断。方法 对3例Wolffian附件肿瘤进行HE及免疫组化染色（EnVision法），并进行病理观察。结果 3例Wolffian附件肿瘤均为单侧，位于阔韧带或输卵管系膜。镜下肿瘤细胞呈弥漫实体状分布，可见成片的梭形或多边形细胞及排列紧密的管状结构。管腔内衬立方或柱状上皮，细胞无明显异型，核分裂象少见。管周有PAS阳性的基膜物质。免疫组化示肿瘤细胞vimentin、AE1／AE3、α-inhibin、calretinin和WT1均呈阳性，CD99呈灶性阳性，EMA和CK7呈阴性。结论 Wolffian附件肿瘤是具有独特发病部位和组织病理学特点的妇科肿瘤，需要和一系列其他妇科肿瘤鉴别。     

PTEN基因对人肝癌细胞系HHCC作用的研究

目的：研究PTEN基因对人肝癌细胞系HHCC细胞恶性表型及凋亡的影响。方法：将PTEN真核表达载体pBabe-PuroPTEN及空质粒pBabe-Puro，通过脂质体介导的基因转染方法，转入该基因表达缺失的HHCC细胞系中，嘌呤霉素筛选获得稳定表达PTEN基因的转染细胞。通过平板克隆形成试验、DNA凝胶电泳、相差显微镜和电镜，观察PTEN基因对人肝癌细胞系HHCC恶性表型及凋亡的影响。结果：转染后的细胞，经原位杂交、免疫组织化学检测证实，有PTEN mRNA及其蛋白的表达；平板克隆形成试验证实，转染PTEN基因后，细胞形成克隆的能力降低；转染PTEN的细胞在相差显微镜和电镜下可出现典型的凋亡形态学改变；DNA琼脂糖凝胶电泳呈现出明显的梯状条带。结论：外源性PTEN基因导入HHCC细胞后，可降低HHCC的细胞的恶性表型，并促进凋亡发生。     

软组织平滑肌肉瘤中p16基因的甲基化检测

目的 探讨软组织平滑肌肉瘤（ＬＭＳ）中p16基因ＩＮＫ４Ａ的甲基化状态及其与p16表达的关系。方法 应用ＭＳＰ法检测３８例软组织平滑肌肉瘤,１０例平滑肌瘤及５例正常平滑肌组织中p16基因ＩＮＫ４Ａ的甲基化状态,用免疫组织化学ＳＰ方法检测p16蛋白表达情况。结果 ３８例ＬＭＳ中９例发生异常甲基化,异常甲基化率为２３.7%（９／３８）。其中,７例p16蛋白表达阴性,２例p16蛋白弱阳性,在p16蛋白表达阴性的ＬＭＳ中,异常甲基化率为５０％（７／１４）。结论 p16基因第一外显子启动子区５‘CpG岛的异常甲基化是导致p16基因失活、蛋白缺如的重要基因外机制,并可能参与肿瘤的发生。     

端粒酶转录酶及其调节相关蛋白与增殖细胞核抗原在卵巢上皮性肿瘤中的表达及临床意义

目的　探讨端粒酶转录酶 (hTERT)及端粒酶调节相关蛋白 (TRAP)与增殖细胞核抗原(PCNA)在卵巢上皮性肿瘤中的表达和临床意义。方法　收集 10 6例卵巢上皮性肿瘤 (恶性 5 4例 ,交界性 33例 ,良性 19例 )的临床资料 ,行hTERT、TRAP和PCNA 3种抗体的免疫组织化学标记链霉素卵白素生物素 (LSAB)法染色。对 87例恶性和交界性患者进行了随访 ,4 5例获结果 ,随访时间为 2～6 0个月。结果　hTERT蛋白的表达在良性 (4/ 19)和交界性 (90 9% ,30 / 33)以及良性和恶性(94 4 % ,5 1/ 5 4 )间的差异均有显著性 (P均 <0 0 0 1) ,TRAP蛋白的表达在良性 (4/ 15 )和恶性(77 8% ,2 8/ 36 )间的差异有显著性 (P <0 0 0 1) ;hTERT和TRAP蛋白的表达在卵巢癌Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ、Ⅳ期两组病例中的差异均无显著性 (P >0 0 5 ,P >0 3)。PCNA的表达在良性 (6 9± 5 9) %和交界性 (2 6 4± 17 8) %、良性和恶性 (5 1 8± 2 2 1) %以及交界性和恶性间的差异均有显著性 (P <0 0 1,P <0 0 0 1,P <0 0 5 )。 33例交界性患者全部存活 ,5 4例恶性患者中 35例 (6 4 8% )有转移 (包括 5例淋巴结转移 ) ,4例 (7 4 % )死亡。结论　hTERT和TRAP蛋白的表达与卵巢上皮性肿瘤的良恶性有关 ,但与其临床分期无关 ;hTERT和TRAP蛋白的表达相似     

抗VEGF单克隆抗体偶联5-FU纳米微粒的初步研究

目的： 为了提高5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil, 5-FU)的抗癌活性，采用抗VEGF单克隆抗体与 5-FU 聚乳酸纳米微粒交联结合制备具有靶向功能的免疫纳米微粒。 方法： 采用抗VEGF单克隆抗体与已制备的 5-FU 聚乳酸纳米微粒(5-FU-NPs)以化学键偶联连接的方法制备具有靶向功能的5-FU免疫纳米微粒(5-FU-Ab-NPs)，考察其形貌、粒径分布、体外释放和免疫活性等性能。结果： 5-FU-Ab-NPs仍呈规则球形，粒径约为（202±23）nm，体外释放实验表明该5-FU-Ab-NPs与5-FU-NPs具有相似缓释特性，免疫学检测和电镜检视显示偶联后的抗VEGF单克隆抗体免疫活性保持原活性的80%以上。结论： 5-FU-Ab-NPs保持原5-FU-NPs缓释药物的特点，具有双重活性功能，即免疫导向和缓释药物,有利于提高肿瘤局部药物浓度。     

乳腺癌切除标本内导管内增生性病变的免疫表型观察

目的探讨乳腺癌切除标本内导管内增生性病变的形态和免疫表型特点及其与浸润癌的关系。方法筛选出浸润性导管癌切除标本内有较多癌旁组织的病例36例和同期乳腺良性病变28例(对照组),选用CK5、CK34βE12、S100蛋白、SMA、CK8、Ecad、cerbB2等7种抗体做免疫组化染色。结果乳癌组36例中28例伴导管内增生性病变,单纯或复合出现的病变包括:普通性导管增生7例,柱状细胞病变12例,不典型导管增生4例,导管原位癌24例,伴两种以上病变者10例,4种病变同时存在者2例。对照组中计普通性导管增生23例,柱状细胞病变9例。免疫组化提示CK5在旺炽型UDH中腺系上皮细胞有大量表达,不典型导管增生、导管原位癌及浸润性导管癌中其表达明显降低直至完全失表达;CK34βE12表达类似于CK5,但较CK5为强,二者并不完全重合;S100蛋白表达于肌上皮细胞和增生的腺系上皮细胞,其在UDH的腺系上皮中的表达近似于CK34βE12,却不表达SMA;在24例高级DCIS中,11例肌上皮对S100蛋白的反应性先消失,但对SMA仍呈强反应;Ecad在导管原位癌、浸润性导管癌中出现再表达和(或)阳性等级升高;cerbB2在高级DCIS和IDC中呈清晰的膜表达。结论77.87%浸润性导管癌伴有不同的导管内增生性病变,这些病变不仅形态学表现不同,且免疫表型有异,可据此协助诊断与鉴别诊断。仅据对活检诊断的导管内增生性病变患者长期随访而得出的后来发生浸润性乳腺癌危险度的结论,与当初诊断的病变并无直接相关,而更可能与当初残留或后来发生的导管内增生性病变有关。     

非小细胞肺癌中HIF-1α、GLUT1与COX-2表达的关系

目的探讨非小细胞肺癌(non-sm all cell lung cancer,NSCLC))急慢性乏氧状况、乏氧与COX-2过度表达及与临床病理特征的关系。方法应用兔抗人H IF-1α、GLUT1抗体和鼠抗人COX-2抗体对手术切除的46例肺癌组织进行免疫组化染色,并与临床病理资料进行相关性分析。结果肺癌患者46例,其中ⅠA期12例,ⅠB期20例,Ⅱ期8例,ⅢA期6例。H IF-1α、GLUT1和COX-2的阳性表达率分别为58.70%(27/46)、39.11%(18/46)和67.39%(31/46)。COX-2表达与H IF-1α、GLUT1的表达相关(P<0.01)。GLUT1表达与肺癌患者淋巴结转移(P<0.05)、组织学类型(P<0.01)有关,而H IF-1α、COX-2表达与年龄、性别、分期、肿瘤大小、淋巴结转移、组织学类型和肿瘤分化程度均无相关性。结论NSCLC患者同时存在着急、慢性乏氧,而肿瘤转移主要与慢性乏氧有关。另外,乏氧可能参与了COX-2增强表达的机制。     

抗体蛋白质芯片检测卵巢癌耐药细胞株细胞因子改变的研究

目的： 抗体蛋白质芯片初步筛选常见细胞因子在卵巢癌耐药细胞株中的表达。 方法： 对6株卵巢癌细胞分别进行平行药敏试验及细胞因子抗体蛋白质芯片检测，同时筛选78种细胞因子的表达差异，并进行两两比较。 结果： 不同种类卵巢癌细胞系对于ADM的IC50值从高到低前3位依次为SKOV3，OVCAR5，OVCAR4；CBPDA为IGROV1，SKOV3，OVCAR3；TAXOL为OVCAR4，SKOV3，IGROV1；VP16为OVCAR4，OVCAR5，OVCAR8。在对一线化疗药ADM和 CBPDA耐药性较高的SKOV3细胞中GRO，IL-6，IL-8和TIMP-2均较其余5株相对敏感细胞增高，对二线化疗药TAXOL，VP16耐药性较高细胞株OVCAR4中IL-6，IL-8较之IGROV1，OVCAR3，OVCAR5升高。 结论： 在常见分泌型细胞因子中，GRO，IL-6，IL-8和TIMP-2升高与一线化疗药ADM和CBPDA耐药性相关，IL-6，IL-8与二线化疗药TAXOL，VP16耐药性相关，不同来源的卵巢癌细胞分泌型蛋白作用机制可能存在共同的上述几种蛋白参与的调节体系。