人sCD40L基因的克隆及表达

目的 克隆人sCD40L基因片段，并在原核细胞中表达。方法 用RT－PCR技术，从激活的人外周血淋巴细胞总RNA中，扩增CD40L胞外区cDNA，并克隆至载体pGEM-T。测序验证后，转至载体PQE31中，并在大肠杆菌M15中进行表达，最后通过亲和层析柱得到纯化蛋白。结果 纯化所得的产物经Western blot证实，确为人sCD40L蛋白。结论 应用基因重组法构建了人sCD40L基因片段，并在原核细胞内成功地进行了表达，为今后进一步研究CD40L与凋亡、疾病的发病机制及临床治疗奠定了基础。     

TRAIL受体在肿瘤细胞系上的表达及意义

目的 检测TNF相关凋亡诱导配体（TRAIL）的受体，在来源于血液系统、肝脏、肺脏和大肠的8个肿瘤细胞系中的表达，并探讨其意义。方法 采用半定量RT－PCR，对TRAIL受体的表达进行半定量检测。结果 TRAIL凋亡通路中，能够诱导凋亡反应的死亡受体DR4和DR5，在所检测的肿瘤细胞系中都有表达，其中DR5在所有肿瘤细胞系中的表达水平均显著高于DR4（P＜0．05）。而能够竞争性与TRAIL诱导的凋亡反应的诱骗受体DcR1和DcR2，在所有的肿瘤细胞中都呈低水平表达或不表达。结论 DR5可能在TRAIL诱导凋亡的通路中发挥最重要的作用。TRAIL死亡受体和诱骗受体在肿瘤细胞系中的表达具有差异性，这种差异性可在一定程度上解释不同细胞对TRAIL诱导凋亡的敏感度。     

siRNA抑制SK-BR-3细胞株Her2/neu的表达及细胞增殖

目的研究siRNA（small interfering RNA）对乳腺癌SK-BR-3细胞株Her2／neu基因表达的抑制作用，为RNAi技术在肿瘤生物治疗中的应用提供实验基础。方法体外合成两条针对Her2／neu基因的siRNA，转染SK-BR-3细胞株；分别应用逆转录聚合酶连反应（RT-PCR）法和流式细胞仪测定Her2／neu基因和蛋白的表达，并用MTT比色法测定细胞的增殖活性，AnnexinV检测细胞凋亡。结果两条siRNA分别使Her2／neu基因表达降低了42.88％、49．27％，蛋白表达降低了25．03％、56．59％。同时转染siRNA后细胞生长受到抑制，并发生细胞凋亡，凋亡率分别为28．51％、42．81％。结论siRNA可以有效抑制SK-BR-5细胞株中Her2／neu的表达，从而抑制细胞生长，并导致细胞凋亡。     

肝纤维化形成过程中瘦素的表达变化

目的：观察二甲基亚硝胺(DMN)诱导实验性肝纤维化模型大鼠肝纤维化形成过程中瘦素(Leptin)的表达变化。方法：模型组大鼠腹腔注射10 mg/kg体质量的DMN生理盐水溶液,于注射后的1、2、3周末处死动物,分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)及免疫组化法检测瘦素mRNA和蛋白质的表达。结果：正常肝脏无瘦素蛋白表达,给药后第1周仅见少数中央静脉的内皮细胞以及极少量的窦周细胞表达阳性。第2周,则见瘦素表达明显增强,主要分布在纤维增生区域。第3周,瘦素表达进一步增强。正常肝脏组织未检测到mR- NA的表达。而注射DMN 1、2、3周,可见清晰的346 bp瘦素mRNA的条带,表达随时间逐渐增强。结论：瘦素与肝纤维化的进展有关,在肝纤维化的中晚期起重要作用。     

通痹灵总碱对LPS(脂多糖)刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子的影响

目的：观察中药通痹灵（TBL）的有效部位-总生物碱对LPS（脂多糖）刺激后的巨噬细胞产生炎性细胞因子IL-1β、TNF-α的影响。方法：培养人类单核白血病细胞系——THP-1细胞，在PMA（Phorbol 12-mmstate 13-acetate）作用下分化为巨噬细胞。体外用LPS（Lipopolysaccharide）刺激分化的巨噬细胞，以MTX（甲氨喋呤）作为对照，培养有药物作用的细胞24小时后检测细胞上清液中炎性细胞因子IL-1β、TNF-α含量并用PR-PCR（逆转录-聚合酶链式反应）半定量测定IL—1β mRNA、TNF-α mRNA的表达。结果：LPS刺激PMA分化后的THP—1细胞，其IL-1β、TNF—α含量明显升高（与正常组比较P〈0．01），不同浓度的通痹灵总碱（200、100、50、25mg／L）及MTX明显抑制IL—1β、TNF-α的产生（P〈0．01），并下调IL-1β mRNA、TNF-α mRNA的表达。结论：通痹灵总碱抑制巨噬细胞分泌炎性细胞因子IL-1β、TNF-α，进而抑制了一系列免疫炎症反应造成的病理损伤。     

DNA结合抑制因子2在大鼠脑室管膜前下区神经干细胞发育中的表达

目的探讨DNA结合抑制因子2(Id2)在大鼠脑室管膜前下区(SVZa)神经干细胞(NSCs)发育分化中的作用。方法运用RT-PCR、Western blotting、免疫组织化学技术,观察Id2在不同发育阶段SVZa-喙侧迁移流(RMS)-嗅脑(OB)流通道中的时空表达模式。结果从空间上看,Id2在RMS表达始终最高,SVZa次之,在OB表达最弱;从发育的时间来看,Id2在各区域胚胎时期表达均比刚出生时强;在OB和RMS区,成年比刚出生时表达强,老年仍有较强表达;在成年SVZa表达比刚出生时弱。结论Id2在SVZa神经干细胞的发育学表达模式提示,Id2可能有促进SVZa神经干细胞增殖和抑制其在RMS迁移区分化的作用。     

Heparanase and basic fibroblast growth factor are co-expressed in malignant mesothelioma

Heparanase is an endoglycosidase that degrades heparan sulfate (HS) in the extracellular matrix (ECM) and cell surfaces, and fulfills a significant role in cancer metastasis and angiogenesis. We evaluated the expression of heparanase and its possible association with the expression of angiogenic molecules in malignant mesothelioma (MM), and analyzed whether expression of these proteins is site-related (pleural vs peritoneal MM, solid lesions vs effusions). Sections from 80 MM (56 biopsies, 24 effusions) were analyzed for heparanase protein expression using immunohistochemistry (IHC). Sixty MM were of pleural origin, and 20 were peritoneal. Effusion specimens consisted of 6 peritoneal and 18 pleural effusions, while biopsies consisted of 14 peritoneal and 42 pleural lesions. Fifty-four specimens were additionally evaluated for expression of basic fibroblast growth factor (bFGF), interleukin-8 (IL-8) and vascular endothelial growth factor (VEGF) proteins using IHC. Microvessel density (MVD) was studied in 28 biopsies using an anti-CD31 antibody. mRNA expression of heparanase (HPSE-1), VEGF and the VEGF receptor KDR was analyzed in 23 effusions using RT-PCR. Heparanase protein expression was seen in 69/80 (86%) tumors. Of these, 35 showed combined membrane and cytoplasmic expression, 30 cytoplasmic expression, and four exclusively membrane expression. Both total (P= 0.001) and cytoplasmic (P = 0.002) expression was significantly higher in solid tumors compared to effusions. Protein expression of VEGF, IL-8 and bFGF was seen in 21/54 (39%), 22/54 (41%) and 44/54 (81%) specimens, respectively. Protein expression of bFGF was significantly higher in solid tumors (P 0.001) and correlated with heparanase expression (P = 0.005). HPSE-1 and VEGF mRNA expression was detected in all 23 effusions using RT-PCR, while KDR mRNA was found in 12/23 MM. KDR mRNA expression correlated with that of both HPSE-1 (P = 0.005) and VEGF (P = 0.001). Our results document frequent expression of heparanase in MM, in agreement with the biological aggressiveness of this tumor. The co-expression of heparanase with bFGF is in agreement with the role of the former in releasing bFGF from the ECM. The concomitant reduction in protein expression of both molecules in effusions as compared to solid tumors, supports the hypothesis of a reduced need for pro-angiogenic stimuli in effusions, and may aid in defining tumor progression in this setting.     

RNA干扰抑制BUB1基因表达对染色体分离的影响

目的：研究 BUB1基因表达调控对染色体分离的影响。方法：用定量 RT-PCR 比较 RNA 干扰前后的胚胎细胞内源性基因 BUB1的 mRNA 水平,同时对染色体数目异常率进行比较分析。结果：干扰后 BUB1基因 mRNA 拷贝数/GAPDH 基因 mRNA 拷贝数的均值为干扰前的21．80%,染色体数目异常率均值由干扰前 5．02%上升到29．61%。经统计分析,RNA 干扰前后 BUB1基因 mRNA 水平和染色体数目异常率有显著差异。结论：BUB1基因表达的降低会导致染色体分离的异常,本研究为染色体分离相关蛋白功能研究建立了新的研究手段和实验评价体系。     

广州地区白纹伊蚊体内登革病毒的检测

目的了解广州地区登革热传播媒介白纹伊蚊携带登革病毒的情况，为登革热预防控制提供预测预警信息。方法从广州11个行政区及其登革热旧疫点捕获白纹伊蚊成蚊和幼虫（经实验室培育羽化成成蚊），提取登革病毒RNA，One step SYBR Green I实时RT-PCR进行检测。结果2005—2007年从广州地区采集的493批白纹伊蚊（6255只）中，共检测出两份阳性结果，分别来自登革热疫点和旧疫点，经测序证实为登革I型．其余为阴性。最低感染率为0．32。结论本文白纹伊蚊携带登革病毒比率较低，可能与登革病毒在蚊体内传代的递减效应、采样时间滞后以及广州登革热非连续性爆发有关。