小鼠骨髓抑制和再生过程中Sod/Gpx/Cat抗氧化酶基因的动态表达研究

 目的 研究 Sod/Gpx/Cat 抗氧化酶系列基因在小鼠骨髓抑制和再生过程中的动态表达，了解氧化应激在骨髓再生过程中的作用。 方法 制备经 5-氟尿嘧啶（5-Fu）注射后的骨髓抑制和再生 C57BL/6 小鼠模型，分别在 5-Fu注射前（第 0 天）和注射后第 3、7、11、14 天各断颈处死 6 只小鼠（分别记为 0 d 组、3 d 组、7 d 组、11 d 组、14 d 组），收集小鼠骨髓单核细胞。Trizol 试剂抽提小鼠骨髓单核细胞总 RNA，采用 Affymetrix 小鼠全基因组 cDNA 430A 芯片检测小鼠骨髓细胞 Sod/Gpx/Cat 系列基因的表达，并对检测结果进行半定量 RT-PCR 鉴定。 结果 Sod1/Sod2/Gpx1/Gpx3b/Gpx4b/Cat 在各组小鼠骨髓细胞中均有较高的表达，Sod3/Gpx2 则在 7 d 组开始表达，11 d 组和 14 d 组表达量持续减少。其中 Sod2/Gpx3b/ Gpx4b/Cat 从 0 d 组到 14 d 组均为表达量先增加后减少；Sod1/Gpx1 则为表达量先减少后增加；在各组小鼠骨髓细胞中未检测到 Gpx3a/Gpx4a/Gpx5/Gpx6 的表达。 结论 Sod/Gpx/Cat 抗氧化酶系列基因在小鼠骨髓抑制和再生过程中呈现特征性的动态变化，这种变化提示了骨髓细胞氧化应激反应过程的组织特异性和调控特定的细胞信号通路的过程。     

慢性肾功能不全患者血清及尿液超氧化物歧化酶含量的变化

用放射免疫分析测定７５例肾病患者血清和尿液含铜锌离子超氧化物歧化酶（Ｃｕ－Ｚｎ－Ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅｄｉｓｍｕｔａｓｅ，简称Ｃｕ－Ｚｎ－ＳＯＤ或ＳＯＤ－１）的含量，并与５１名健康人对比。结果显示，慢性肾功能不全（ＣＲＦ）血透组患者血清ＳＯＤ－１含量显著增高（Ｐ＜０．０１），随着血液透析期的延长，其含量有渐升趋势；非血透组略有降低（Ｐ＞０．０５；其它肾病组明显降低（Ｐ＜０．０１）。三组患者尿液ＳＯＤ－１含量呈不同程度增高（Ｐ均＜０．０１），并随着病变的严重程度而增幅更明显，血／尿ＳＯＤ－１比值也随之降低。本文初步分析了这些变化的原因及意义。     

绿色荧光蛋白、菲立磁体外双标记神经干细胞及其活性的研究

目的探索用绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)重组逆转录病毒和菲立磁(超顺磁性氧化铁,,Superparamagnetic Iron Oxide,SPIO)体外双标记神经干细胞的可行性及其对细胞活力的影响。方法用病毒介导的GFP基因转导大鼠胚胎神经干细胞。用SPIO和Lipofectamine体外磁化标记经GFP标记的胚胎神经干细胞。用荧光显微镜观察双标记神经干细胞,并行普鲁士蓝染色,了解转染成功率。MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测标记神经干细胞的细胞增殖活力。结果双标记神经干细胞分化的细胞荧光显微镜下观察见发出绿色荧光,普鲁士蓝染色呈阳性。而未标记神经干细胞荧光显微镜下观察未见发出绿色荧光,普鲁士蓝染色呈阴性。MTT法检测发现GFP和SPIO双标记神经干细胞的增殖活力与未标记神经干细胞相比无改变。结论绿色荧光蛋白重组逆转录病毒和菲立磁可以有效地标记体外分离培养的大鼠胚胎神经干细胞。双标记神经干细胞的增殖、分化活力与未标记神经干细胞相比无改变。     

Lucigenin-dependent chemiluminescence as a new assay for NAD(P)H-oxidase activity in particulate fractions of human polymorphonuclear leukocytes

The enzyme responsible for the respiratory burst in human neutrophils is an oxidase that catalyzes the reduction of oxygen to superoxide anion (O-2). Superoxide anion production may be measured by chemiluminescence (CL) in the presence of lucigenin (10,10'-dimethyl-9,9'- biacridinium dinitrate). We established an assay of the oxidase, by measuring the CL of particulate fractions of PMN in the presence of lucigenin . This CL required the addition of NAD(P)H and was very low in fractions of resting cells. In particulate fractions of PMNs stimulated with PMA selectively, the NADPH-dependent CL was found to be increased. CL was linear with protein concentrations up to 100 micrograms and was shown to be at least 10 times more sensitive for the detection of O-2 than the assay based on the spectrophotometric determination of superoxide mediated cytochrome c reduction. CL was abolished by inactivating the enzyme at 56 degrees C.     

自由基清除酶（剂）对SMAO休克大鼠保护作用的研究

夹闭大鼠肠系膜上动脉1h后松夹,于松夹前分别给予超氧化物歧化酶(superoxide dismutasv, SOD)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、别嘌呤醇(allopurinol, ALLO)、SOD+CAT、SOD+ALLO和SOD+CAT+ALLO。结果表明,除单用CAT外,其他单用或伍用自由基清除酶(剂)均有抗脂质过氧化损伤效应,表现为应用自由基清除酶(剂)能明显抑制肠、心、肝、肺组织中丙二醛(malodialdehyde, MDA)含量的升高,稳定组织内源性SOD的活力,同时血浆溶酶休酶的释放减少,休克动物血压升高,死亡率下降,平均存活时间明显延长。实验结果尚表明,应用自由基清除酶(剂)可以明显减轻肠系膜上动脉夹闭(superior mcsenteric artery occlusion, SMAO)休克大鼠小肠粘膜的病理改变。     

从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制

目的:从氧自由基、一氧化氮探讨四逆汤抗急性失血性休克的肝脏机制。方法:复制急性失血性休克大鼠模型, 分为假手术对照组;单纯休克模型组;休克+生理盐水复苏组;休克+四逆注射液复苏组。四逆注射液(浓度1000g生药/L), 剂量0.1mL/200g大鼠。用生理盐水或四逆注射液治疗3h后处死动物并取组织。测定各组肝脏超氧化物歧化酶(SOD)活性、丙二醛(MDA)水平, 一氧化氮(NO)水平。采用免疫组化染色法, 观察诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在肝细胞中的变化特点。RT-PCR观测肝细胞iNOS和内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因表达的变化。结果:模型组在休克1h后SOD活性明显低于对照组(P＜0.01)、MDA水平明显高于对照组(P＜0.01)。四逆汤组复苏3h后肝组织SOD明显高于生理盐水组(P＜0.01)、MDA低于生理盐水组(P＜0.01)、NO水平明显高于生理盐水组(P＜0.01)。生理盐水组iNOS在肝细胞中染色阳性单位明显高于四逆汤组(P＜0.05)。生理盐水组促进iNOSmRNA的表达。四逆汤组eNOSmRNA的表达增强。结论:四逆汤通过清除氧自由基, 升高NO, 改善肝组织微循环, 减少诱导型iNOS表达的各种因素, 理论上减轻了NO与氧自由基生成的ONOO的细胞毒作用和血管的低反应性, 并对肝脏起到保护作用。     

KMG03粉针剂对大鼠实验性急性心肌缺血的保护作用

采用结扎大鼠冠脉造成急性心肌缺血模型。观察KMG03粉针剂的抗心肌缺血作用。结果：KMG03粉针剂50mg/kg和100mg/kg对大鼠实验性急性心肌缺血均有一定程度的保护作用。在改善心电图S——T段的上移、降低血清CPK,LDH方法两个剂量组均有显著作用。在缩小心肌塞范围方面,以100mg/kg组为明显,KMG03粉针剂和丹参均能保护超氧化物岐化酶活性,显著降低丙二醛含量,还能显著增加缺血心肌前列环素合成。结果表明：KMG03粉针剂对心肌缺血的保护作用与抗脂质过氧化作用有关,其促进前列环素合成作用可能与其抗心肌缺血有关。     

老年Ⅱ型糖尿病患者血清NO水平与肾功能变化的相关性研究

目的探讨一氧化氮(NO)在老年Ⅱ型糖尿病肾病发病过程中的变化规律及其与肾功能的关系。方法采用Griess法检测48例Ⅱ型DM病人血清NO值在水平及与肾功能有关的指标,并与17例正常人进行比较,结果血清NO值在正常尿蛋白(DMI)组(88.86±9.61umol/l)和微量尿蛋白(DMII)组(90.00±17.94umol/l)明显高于对照组(56.70±9.53umol/l)(P＜0.01),至临床肾病期血浆NO浓度明显降低(63.25±8.64umol/l)(P＞0.05);NO与BUN、BCR呈负相关,而与CCR呈正相关。结论血清NO水平的动态变化与Ⅱ型DM肾病的发生、发展有密切联系。     

天麻素对缺血再灌注损伤星形胶质细胞的保护作用及其对一氧化氮合成酶活性的影响

观察天麻素对脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞胶原纤维酸性蛋白 (GFAP)表达、乳酸脱氢酶(LDH)漏出量以及一氧化氮合成酶 (NOS)活性的影响。结果 :天麻素大、小剂量组GFAP纤维样改变减轻 ,强阳性反应细胞数减少 ;LDH漏出量下降 ;NOS活性减弱。提示 :天麻素对模拟脑缺血再灌注损伤星形胶质细胞有良好的保护作用 ,其途径之一可能是通过抑制NOS活性的反应性增强来实现的。     

围体外循环期脂质过氧化损伤的临床研究

目的探讨血清超氧化物歧化酶(superoide dismutase,SOD)和脂质过氧化产物丙二醛(malonyldialdehyde,MDA)在围手术期心肌再灌注损伤中的浓度变化、相关性及临床意义.方法心脏手术组30例,分别在术前1 d,主动脉开放后 10 min,术后 1 d 和 7 d采血,化学比色法测定血清SOD和MDA.结果心脏手术组SOD术前(143.7±22)μU/L,再灌注 10 min(113.5±23.5)μU/L(P＜0.01),术后1 d(141.3±23.2)μU/L,术后 7 d(143.5±24.2)μU/L,MDA术前(5.26±2.19) μmol/L,再灌注10 min(9.97±3.68)μmol/L(P＜0.01),术后1 d (7.17±2.16) μmol/L,术后7 d (5.75±2.87) μmol/L,并且血清SOD和MDA呈现负相关(r=-0.563,P＜0.05).结论 CPB患者血清SOD活性下降,MDA水平增高,大量氧自由基的产生是造成心肌再灌注损伤的重要原因.