沉默G6PD对卵巢癌细胞顺铂敏感性的影响及其作用机制

目的 探讨葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（glucose-6-phosphate dehydrogenase，G6PD）在卵巢癌细胞顺铂耐药中的作用及其潜在的机制。方法 通过低浓度加量持续诱导法构建卵巢癌顺铂耐药细胞株A2780/CDDP，采用Label-free定量蛋白质组学法分析A2780和A2780/CDDP细胞差异蛋白G6PD，Western blot和RT-qPCR检测G6PD表达情况。通过siRNA技术将siRNA-G6PD及其阴性对照（siRNA-NC）转染至A2780/CDDP细胞，然后采用Western blot验证G6PD基因沉默效果，MTT法检测细胞增殖情况，流式细胞术检测细胞凋亡情况，流式细胞仪和酶标仪检测铁死亡相关物质活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）和脂质过氧化物的表达水平。结果 与A2780细胞相比，A2780/CDDP细胞中有95个上调蛋白和102个下调蛋白，其中上调蛋白中以G6PD表达差异最为显著；这些蛋白大多富集在代谢通路，且其功能主要与细胞氧化应激反应、核糖磷酸代谢途径相关。与A2780细胞相比，A2780/CDDP细胞中G6PD mRNA和蛋白表达水平均显著升高（均P<0.05），铁死亡相关物质ROS、MDA和脂质过氧化物水平均降低（均P<0.05），而GSH水平升高（P=0.001）。沉默G6PD后的A2780/CDDP细胞中顺铂的IC₅₀值降低（P=0.012），细胞凋亡率升高（P=0.006），铁死亡相关物质ROS、MDA和脂质过氧化水平均升高（均P<0.05），而GSH水平降低（P=0.007）。结论 沉默G6PD可能通过诱导卵巢癌顺铂耐药细胞A2780/CDDP中的铁死亡水平而增强顺铂敏感性。     

铁死亡与胎盘源性疾病的研究进展

胎盘是受精卵分化后从合体滋养层细胞发育而来的。胎盘作为一个短暂的器官,在胎儿生长发育中发挥着代谢、分泌和物理屏障等重要作用。母胎间通过胎盘进行物质交换也是母亲和胎儿之间的一种沟通机制,是保证妊娠期间胎儿健康发育和母亲正常妊娠的基础。研究认为铁死亡作为一种独特的死亡方式,与胎盘生理和病理有关。尤其是病理妊娠中随着抗氧化能力和脂质过氧化修复能力的降低,胎盘逐渐损伤,最终导致胎盘源性疾病发生。通过对目前铁死亡与胎盘源性疾病的相关文献进行整合归纳,从铁死亡的方向进一步阐明其对胎盘源性疾病的影响,为探索新的治疗方法和预防措施提供可能。     

铁死亡在压力诱导的椎间盘退变中的作用及机制研究

【摘要】目的 探究铁死亡是否参与异常应力诱导的椎间盘退变及其分子作用机制。方法 将髓核细胞分为对照组、加压组和加压+铁死亡抑制剂（Fer-1）组，采用CCK-8法检测细胞的增殖活力，透射电镜观察细胞内部超微结构，脂质过氧化（MDA）试剂盒检测髓核细胞脂质氧化水平。运用免疫荧光染色和Western blot 检测髓核细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4（GPX4）蛋白表达水平；运用TargetScan 8.0预测与GPX4靶向结合的miRNA及位点；运用RT-PCR检测髓核细胞中miR-1224的表达水平。结果 异常应力作用导致髓核细胞增殖活力下降，脂质氧化水平升高，线粒体萎缩且膜密度增高，而Fer-1可有效逆转压力对髓核细胞的上述作用。与对照组相比，加压髓核细胞中GPX4蛋白表达降低，miR-1224水平升高（P < 0.05），且生物信息学预测结果显示miR-1224靶向结合于GPX4。抑制髓核细胞中miR-1224可显著升高GPX4蛋白表达并有效逆转压力诱导的髓核细胞退变表型和脂质氧化水平升高，过表达髓核细胞中miR-1224则起到相反作用。结论 异常应力导致髓核细胞中miR-1224水平增高，通过靶向结合抑制了GPX4蛋白的表达，从而促进髓核细胞铁死亡的发生并导致椎间盘退变。     

细胞铁死亡发生与调控机制的研究进展

正细胞死亡无论在生理还是在病理条件下都是无法避免的重要环节。传统意义上细胞死亡主要分为凋亡(apoptosis)和坏死(necrosis)两大主要类型,但近年来却发现在诸多病理生理情况下亦有自噬(autophagy)、胀亡(oncosis)、副凋亡(paraptosis)、焦亡(pyroptosis)等多种方式参与其中。越来越多细胞死亡方式的发现为进一步明确疾病的发生机制以及为     

艾灸对佐剂性关节炎大鼠膝关节滑膜组织中调控铁死亡相关因子的影响

目的:观察艾灸对佐剂性关节炎(AA)大鼠滑膜组织p53、胱氨酸/谷氨酸逆向转运蛋白溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达的影响,探讨艾灸治疗AA的作用机制.方法:SD大鼠随机分为正常组、模型组、艾灸组和药物组,每组20只.采用风寒湿环境因素结合完全弗氏佐剂建立AA大鼠模型.艾灸组...     

三氧化二砷对肝癌HepG2细胞铁死亡影响的研究

目的 探究三氧化二砷是否会诱导肝癌细胞铁死亡,并比较Alamar blue 法和MTT法在肝癌细胞铁死亡中检测细胞活力的差异。方法 以人肝癌HepG2细胞为研究对象,分为对照组、三氧化二砷处理组、公认的铁死亡诱导剂Erastin处理组以及联合铁死亡抑制剂Ferrostatin-1处理组,分别采用倒置生物显微镜观察各组细胞形态及存活情况,采用MTT法和Alamar blue 法检测各组细胞活力,探索三氧化二砷是否可以诱导铁死亡。结果 不同浓度三氧化二砷或Erastin处理后,HepG2细胞出现不同程度的死亡;铁死亡抑制剂Ferrostatin-1可以抑制Erastin诱导的细胞铁死亡,但不能抑制三氧化二砷诱导的细胞死亡;与MTT法相比,Alamar blue 法在检测细胞铁死亡时与显微镜观察结果一致,且各浓度组内检测值标准差较小。结论 三氧化二砷可能不会诱导肝癌细胞铁死亡;Alamar blue 法较MTT法在肝癌HepG2细胞铁死亡后活力检测中有更高的灵敏性,是细胞铁死亡研究中活力检测的首选方法。     

TXNIP/Trx-1/GPX4通路促进新生大鼠缺氧缺血后海马神经元铁死亡的作用机制

目的 观察新生大鼠缺氧缺血后海马神经细胞铁死亡的变化,并从TXNIP/Trx-1/GPX4信号通路探讨其机制。 方法 将健康7日龄Sprague-Dawley新生大鼠随机分为假手术组（n=30）、缺氧缺血性脑损伤（hypoxic-ischemic brain damage,HIBD）组（n=30）及siRNA（TXNIP siRNA）组（n=12）。采用经典Rice-Vannucci法建立新生大鼠HIBD模型。造模后6 h、24 h、72 h、7 d,Western blot法检测新生大鼠损伤侧海马组织铁死亡蛋白GPX4蛋白表达水平变化;造模后24 h,采用激光散斑成像结合苏木精-伊红染色法鉴定模型;采用NeuN/GPX4、GFAP/GPX4免疫荧光双标染色结合Western blot等方法检测各组新生大鼠损伤侧海马组织GPX4、TXNIP、Trx-1蛋白表达水平;检测新生大鼠血清铁和损伤侧海马组织铁含量的变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测各组新生大鼠TXNIP、Trx-1、GPX4 mRNA的表达水平。 结果 造模后6 h、24 h、72 h、7 d,HIBD组GPX4蛋白表达水平低于假手术组（P<0.05）。造模后24 h,HIBD组损伤侧脑血流量低于假手术组（P<0.05）,HIBD组损伤侧海马CA1区神经细胞排列疏松紊乱,形态不规则。HIBD组损伤侧海马CA1区TXNIP⁺细胞数高于假手术组,Trx-1⁺细胞数、NeuN⁺GPX4⁺/NeuN⁺低于假手术组（P<0.05）,海马CA1区几乎未见GFAP⁺GPX4⁺细胞。HIBD组和siRNA组血清铁、损伤侧海马组织铁含量高于假手术组,且siRNA组血清铁、损伤侧海马组织铁含量低于HIBD组（P<0.05）。HIBD组和siRNA组TXNIP mRNA及蛋白表达水平均高于假手术组,且siRNA组TXNIP mRNA及蛋白表达水平低于HIBD组（均P<0.05）;HIBD组和siRNA组损伤侧海马组织Trx-1、GPX4 mRNA及蛋白表达水平均低于假手术组,且siRNA组损伤侧海马组织Trx-1、GPX4 mRNA及蛋白表达水平高于HIBD组（均P<0.05）。 结论 新生大鼠缺氧缺血通过激活TXNIP/Trx-1/GPX4通路,导致新生大鼠海马神经元铁死亡,进而导致HIBD。 ［中国当代儿科杂志,2022,24（9）：1053-1060］