水通道蛋白4对一氧化碳中毒后迟发性脑病大鼠神经损伤的影响

目的 探讨水通道蛋白4(Aquaporin 4,AQP4)对一氧化碳(Carbon monoxide,CO)中毒后迟发性脑病(Delayed encephalopathy,DEACMP)大鼠神经损伤的影响。方法 将210只雄性SD大鼠随机分为空白对照(Blank control,BC)组、CO中毒(CO)组、钠-钾-氯共转运体(Na⁺-K⁺-Cl^- cotransporter,NKCC)抑制剂处理(布美他尼)组、p38-丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen activated protein kinase,MAPK)抑制剂处理(MAPK)组和AQP4特异性抑制剂处理(AQP4抑制剂)组,每组各42只; 根据造模后不同时间点将每组大鼠进一步分为染毒3、6、12、24、48、72 h和7 d后共7个亚组,每亚组各6只; 取大鼠脑前额叶皮质组织,计算脑皮质含水量,采用HE法观察脑皮质形态; 采用免疫组化链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(Streptavidin-perosidase,SP)染色法测定大鼠脑皮质AQP4,p38 MAPK,NKCC1、胶质纤维酸性蛋白(Glial fibrillary acidic protein,GFAP)和S100钙结合蛋白B(S100 calcium binding protein B,S100B)蛋白表达水平。结果 与BC组比较,CO组大鼠在染毒3、6、12、24、48、72 h后尾静脉COHB水平和脑皮质含水量显著升高,脑皮质AQP4,p38 MAPK,NKCC1,GFAP和S100B蛋白表达水平显著升高,染毒7 d后恢复正常(P<0.05); 与CO组比较,布美他尼组、MAPK组和AQP4抑制剂组大鼠脑皮质含水量显著降低,脑皮质AQP4,p38 MAPK,NKCC1,GFAP和S100B蛋白表达水平显著降低,且AQP4抑制剂组变化更明显(P<0.05)。结论 p38-MAPK/NKCC信号通路可能参与调控CO中毒DEACMP大鼠脑皮质AQP4表达,抑制AQP4表达可有效减轻大鼠脑水肿并改善预后,有望成为预防和治疗DEACMP的新靶点。     

医用臭氧对宫颈癌细胞增殖和迁移抑制作用的初步研究

【摘要】 目的 探讨医用臭氧是否通过核因子（NF）-κB信号通路调控上皮-间质细胞转化（EMT）相关蛋白表达抑制宫颈癌细胞增殖和迁移。 方法 选用人宫颈癌Hela细胞,分别设空白组、N-乙酰-L-半胱氨酸（NAC）处理组、NAC和臭氧共处理组、臭氧组。细胞在臭氧处理前以60 mmol/mL NAC溶液预处理20 min,随后将细胞悬液与等体积半最大效应浓度（EC50）臭氧混合15 min。细胞计数试剂盒（CCK）-8和细胞集落实验检测细胞增殖抑制。二氯二乙酸酯（DCFH-DA）探针通过流式细胞术检测活性氧（ROS）水平。划痕实验和Transwell实验验检测臭氧处理后Hela细胞迁移能力。蛋白质印迹法检测NF-κB和EMT相关蛋白表达水平。 结果 臭氧处理后Hela细胞增殖能力下降,臭氧EC50为10 mg/mL,同时其迁移能力也下降。臭氧处理后,Hela细胞NF-κB和κB抑制性蛋白激酶（IKK）α表达及其磷酸化水平均降低,同时EMT相关波形蛋白（vimentin）和β-连环蛋白（β-catenin）表达水平降低,而NAC预处理可逆转臭氧的作用。 结论 医用臭氧可能通过抑制NF-κB信号通路下调vimentin、β-catenin抑制宫颈癌Hela细胞增殖和迁移,ROS在其中发挥重要作用,表明医用臭氧有望成为宫颈癌新的辅助治疗手段。     

中长期静脉通路互联网平台的构建与应用

【摘要】 目的 了解超声引导下中长期静脉通路带管患者居家自我管理的现状,开发互联网平台,解决中长期静脉通路带管患者在静脉治疗间歇期对导管的自我管理、相关问题辨识及处理、远程问诊、维护提醒等问题。方法 收集2018年9月至2019年4月首次进行超声引导下中长期静脉通路穿刺的患者,对照组、观察组各40例。对照组按中长期静脉通路护理常规进行宣教、门诊维护及咨询。观察组按中长期静脉通路护理常规外,同时使用互联网平台,以协助患者对中长期静脉通路的自护管理。 结果 两组患者带管期间的依从性、带管期间获得信息资源的满意度,观察组均优于对照组,差异具有统计学意义（P＜0.05）,观察组并发症发生率低于对照组（P＜0.05）。 结论 中长期静脉通路互联网平台可以有效地帮助带管患者进行居家自我管理,降低静脉导管相关并发症的发生,提高患者导管自我管理能力、导管维护依从性及获得信息资源满意度。     

JAK2/STAT3通路槲皮素对先兆流产大鼠的保胎作用及对激素水平的影响

 目的 探讨槲皮素对先兆流产大鼠的保胎作用和对激素水平的影响。方法 50只妊娠大鼠随机分为正常组、模型组、槲皮素组、AG490组和槲皮素+AG490组,各10只,槲皮素组、AG490组和槲皮素+AG490组分别给予2.5 mg/ml槲皮素、0.5 mg/kg AG490和2.5 mg/ml槲皮素+0.5 mg/kg AG490灌胃干预,1次/d,连续7 d,正常组、模型组灌胃等量生理盐水,妊娠8 d除正常组外其余各组大鼠以米非司酮和米索前列醇建立先兆流产模型,妊娠9 d各组大鼠按原剂量继续灌胃4 d;妊娠14 d处死大鼠,检测血清激素及免疫因子水平,计算流产率、胚胎吸收率和脏器系数,HE染色观察子宫组织形态学变化。结果 与模型组比较,槲皮素组血清雌二醇、β-人绒毛膜促性腺激素(β-HCG)、孕激素、白细胞介素-10(IL-10)水平和子宫组织磷酸化Janus激酶2(p-JAK2)、磷酸化信号传导及转录激活因子3(p-STAT3)蛋白相对表达量升高,血清干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平降低,卵巢、子宫合重增加,脏器系数升高,流产率、胚胎吸收率降低(P＜0.05),AG490组血清雌二醇、β-HCG、孕激素、IL-10水平和子宫组织p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量降低,血清IFN-γ、TNF-α水平升高,卵巢、子宫合重减小,脏器系数降低(P＜0.05);与槲皮素组比较,槲皮素+AG490组血清雌二醇、β-HCG、孕激素、IL-10水平和子宫组织p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量降低,血清IFN-γ、TNF-α水平升高,卵巢、子宫合重减小,脏器系数降低,胚胎吸收率升高(P＜0.05);与AG490组比较,槲皮素+AG490组血清雌二醇、β-HCG、孕激素、IL-10水平和子宫组织p-JAK2、p-STAT3蛋白相对表达量升高,血清IFN-γ、TNF-α水平降低,卵巢、子宫合重增加,脏器系数升高,胚胎吸收率降低(P＜0.05)。结论 槲皮素对先兆流产大鼠具有保胎作用,可提高其激素水平,机制可能与调控JAK2/STAT3通路有关。     

姜黄素对胸部爆震致小鼠肺组织氧化应激损伤的影响

 目的 探讨姜黄素对胸部爆震致小鼠肺组织氧化应激损伤的影响。方法 将30只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、模型+姜黄素组,伤后24 h处死小鼠,左肺进行10%甲醛固定,石蜡包埋切片,右肺-80 ℃保存。HE染色观察肺组织爆震后病理改变;活性氧生成(reactive oxygen species,ROS)检测肺组织氧化应激损伤情况;Western blot检测氧化应激相关蛋白MDA5、SOD-1、IRE-α和信号通路相关蛋白p-PI3K、Nrf2、Keap1的表达。结果 胸部爆震后,模型组肺组织细胞排列明显紊乱、可见细胞变性和炎性细胞浸润;ROS检测显示,在紫外光激发下,模型组与对照组相比肺组织内蓝色荧光减少,红色荧光明显增加;Western blot检测结果显示模型组MDA5、IRE-α、SOD-1、Nrf2和Keap1的灰度值的相对表达分别为0.68±0.08、0.63±0.04、0.38±0.02、0.32±0.03和0.98±0.11,相比于对照组的0.33±0.03、0.29±0.02、0.81±0.09、0.43±0.05和0.44±0.04变化明显,而模型组p-PI3K/PI3K的灰度值的相对表达为0.74±0.05,相比于对照组的0.30±0.02显著升高,上述差异均有统计学意义(P<0.05)。姜黄素干预后,HE染色显示小鼠肺组织变性坏死明显缓解,炎性细胞浸润减轻;ROS检测显示模型+姜黄素组与模型组相比,肺组织内蓝色荧光增加,红色荧光明显减少;Western blot检测结果显示模型+姜黄素组MDA5、IRE-α、SOD-1、Nrf2和Keap1的灰度值的相对表达分别为0.48±0.07、0.36±0.06、0.51±0.07、0.71±0.08和0.53±0.06,p-PI3K/PI3K的灰度值的相对表达为0.56±0.07,上述差异与模型组两两比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论 姜黄素对胸部爆震所致的肺组织氧化应激损伤有保护作用,其机制可能是通过PI3K/Nrf2/Keap1信号通路来实现的。     

FLAIR和SWI序列评估缺血性脑卒中二级侧支循环

【摘要】目的：探讨液体衰减反转恢复（FLAIR）序列上显著高信号血管（HSV）征与磁敏感加权成像（SWI）上明显不对称多发低信号血管（MLSV）征的相关性及两者对缺血性脑卒中的诊断及预后评估价值。方法：回顾性分析2016年7月－2017年12月经MRA或CTA证实为大脑中动脉M1段完全闭塞的72例缺血性脑卒中患者的临床和MRI资料。以美国国立卫生研究院卒中量表（NIH Stroke Scale,NIHSS）来评估患者脑梗死临床表现的严重程度,并根据出院NIHSS评分将患者分为预后较好（<13分）和预后差（13~38分）两组。对FLAIR图像上HSV征和SWI上MLSV征的严重程度评分（取值范围分别为0~8分和0~12分）进行Spearman相关性分析。采用卡方检验比较两个预后组之间性别、疾病史、HSV征分级（高：HSV评分≥7、中等：HSV评分5~6、低：HSV评分≤4）和MLSV分级（高：MLSV评分>4;低：MLSV评分≤4）的差异,采用非参数检验比较年龄、入院NIHSS评分和入院DWI上梗死灶体积评分（取值范围为0~10分）的差异。比较高、低MLSV分级组及高、低HSV分级组（分别为评分>4和≤4）之间性别、疾病史、年龄、入院NIHSS评分和入院DWI上梗死灶体积评分（取值范围为0~10分）的差异。采用Logistic回归分析对出院NIHSS评分与入院NIHSS评分、DWI梗死灶体积评分、HSV和MLSV分级之间的相关性进行评估。结果：72例中,FLAIR序列上HSV严重程度评分与SWI序列上MLSV严重程度评分之间呈中度正相关（r=0.452,P=0.010）。Logistic回归分析结果显示,入院NIHSS评分越高则出院NIHSS评分越高（OR=1.493,P=0.001）,相应预后越差;HSV严重程度分级越高（OR=0.513,P=0.010）或MLSV严重程度分级越高（OR=0.199,P=0.041）,出院NIHSS评分越低,提示相应预后越好。明显不对称MLSV征与入院时NIHSS评分及入院DWI上梗死灶体积评分之间均无显著相关性（P>0.05）。HSV分级高的患者有较低的入院NIHSS评分（P=0.022）和较低的入院DWI上梗死灶体积评分（P=0.042）。结论：对FLAIR序列上高信号血管征和SWI序列上不对称多发低信号血管征的严重程度进行评分,有助于缺血性脑卒中患者的预后评估,并可为临床治疗提供有价值的信息。     

安罗替尼对人肾癌细胞ACHN增殖和迁移的抑制作用

目的 观察安罗替尼(anlotinib)对人肾癌细胞增殖和迁移能力的影响,探讨其抑制肾癌细胞生长、迁移能力的机制,以及在肾癌治疗领域的临床应用前景.方法 体外培养肾癌ACHN细胞,采用不同浓度(0、1.25、2.5、5和10 μmol/L)的安罗替尼处理ACHN细胞24、48和72h,MTT法检测安罗替尼对ACHN细胞增殖的影响,计算半数抑制浓度(IC50);划痕修复实验检测安罗替尼对ACHN细胞迁移能力的作用,计算迁移率;克隆形成实验检测细胞贴壁后细胞的成活能力,计算克隆数目;Western印迹法检测安罗替尼对PI3K/AKT信号通路相关蛋白表达和活性的影响,用灰度分析方法计算其灰度值.结果 安罗替尼能显著抑制ACHN细胞增殖,具有明显的浓度依赖性;与对照组相比,安罗替尼处理后,能明显抑制ACHN细胞的克隆形成、迁移和信号通路相关蛋白的活化(P＜0.05).结论 安罗替尼能显著抑制人肾癌ACHN细胞的增殖、克隆形成和迁移能力,其机制与PI3K信号通路的抑制相关.     

Ras-MAPK通路在食管癌中的研究进展

Ras is best known for the ability of regulating cell growth, proliferation and differentiation. Mutations in Ras are associated with abnormal cell proliferation, resulting in the incidence of all human cancers. Mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathways are the most well described pathways in carcinogenesis, which has been identified as a key downstream effector in Ras signaling as well as playing important roles in prognosis of tumors. Recently, evidence has gradually accumulated to demonstrate that mutation in Ras or aberrant expression of MAPK has profound effects on the incidence of esophageal carcinoma, and applications of some chemotherapeutic drugs can not lead to the expectant function. Further understanding of the relevant molecular mechanisms of Ras-MAPK signaling pathways will be helpful for development of efficient targeting therapeutic approaches to the treatment of esophageal cancer. In this article, the advances of Ras-MAPK signaling pathways in esophageal carcinoma are reviewed.     

JNK信号通路对NaAsO2诱导NIH3T3细胞中hnRNP K蛋白聚集体形成的影响

 目的：观察核不均一核糖核蛋白(hnRNP)K的表达与定位以及亚砷酸钠（NaAsO2）刺激NIH3T3细胞的反应情况及氧化应激变化,探讨JNK信号通路在hnRNP K蛋白聚集体形成中的作用。方法：构建重组载体pcDNA3-hnRNP K-HA,转染NIH3T3细胞,荧光显微镜观察内源性hnRNP K在细胞中的表达与定位,以及在NaAsO2不同刺激时间该蛋白聚集体的形成情况,并利用活性氧（ROS）检测试剂盒测定胞内ROS水平;给予JNK、MEK、PI3K/Akt、NF-κB和核转运等5种信号通路的抑制剂预处理后,观察聚集体的变化情况。结果：重组质粒构建正确,荧光显微镜观察显示hnRNP K主要定位于胞核中,而重组质粒转染NIH3T3细胞后,可见胞内有蛋白聚集体形成并随NaAsO2刺激时间的延长而递增,且过表达hnRNP K可抑制NaAsO2刺激细胞生成ROS;JNK信号通路抑制剂SP600125明显抑制聚集体的形成。结论：hnRNP K主要定位在NIH3T3细胞的胞核中,胞浆少量分布;NaAsO2可诱导NIH3T3细胞形成hnRNP K蛋白聚集体,此聚集体可抑制胞内ROS生成,且该聚集体的形成有赖于JNK介导的信号通路。     

侧壁开窗法上颌窦底提升术植入Bio-Oss后骨生成的mRNA表达谱

 目的：探讨侧壁开窗法上颌窦底提升术这种特殊的引导性骨再生（guided bone regeneration, GBR）过程的转录组特点。方法：3只Beagle犬,随机选择一侧经侧壁开窗行上颌窦底提升术,同时植入Bio-Oss骨粉,术后2周,对另一侧用相同的方法行上颌窦底提升术。第2次术后2周,收集植入的Bio-Oss骨粉组织块,提取总RNA,全基因组表达谱芯片检测分析上颌窦底提升后2周和4周时的差异表达基因。利用基因本体论（gene ontology, GO）对差异表达的基因进行功能分类,以及京都基因与基因组百科全书（Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes, KEGG）进行信号通路分析。结果：在2周时表达升高的基因与刺激反应、免疫-炎症反应和细胞增殖有关,同时,与神经元分化、破骨细胞分化和早期血管化过程相关的基因也高表达。在4周时,与细胞代谢和发育相关的基因表达升高,重要的是,与血管生成和骨骼发育相关的基因都高表达,与骨骼发育相关的基因包括骨生成相关的生长和分化因子［转化生成因子β1（transforming growth factor beta 1, TGFB1）和骨形态发生蛋白4（bone morphogenetic protein 4, BMP4）］、软骨和骨胞外基质［软骨黏附素（chondroadherin, CHAD）、Ⅰ型胶原α1链（collagen type I, alpha 1 chain, COL1A1）、Ⅰ型胶原α2链（collagen type I, alpha 2 chain, COL1A2）、Ⅴ型胶原α2链（collagen type Ⅴ, alpha 2 chain, COL5A2）、核心蛋白聚糖（decorin, DCN）、骨连接蛋白（osteonectin, SPARC）和骨钙素（osteocalcin, BGLAP）］等相关的基因。信号通路分析显示4周时表达升高的基因与转化生长因子β/骨形态发生蛋白（transforming growth factor beta/bone morphogenetic protein, TGF-β/BMP)信号通路有关。无翅型MMTV整合位点家族（wingless-type MMTV integration site family, WNT）信号通路中的关键基因WNT5A和卷曲蛋白受体9（frizzled receptor 9, FZD9）在2周时表达升高,而连环蛋白β1（catenin beta 1, CTNNB1）在4周时表达升高。结论：侧壁开窗法上颌窦底提升术2周后转录表达谱变化以免疫-炎症反应和破骨反应下调、骨生成相关基因表达升高为特点,骨再生的过程还与神经生成和血管生成过程相关。在骨再生的过程中,TGF-β/BMP和WNT信号通路起重要作用,WNT信号通路的作用复杂。