枸杞多糖保护人脐带间充质干细胞对抗氧化损伤研究

目的：探讨枸杞多糖(LBP)对人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)的抗氧化损伤保护作用。方法：采用200μmol/L H₂O₂刺激HUC-MSCs 6 h建立氧化损伤模型。细胞随机分为正常对照组(NC)、H₂O₂处理的模型组(M)、VC处理的阳性药对照组(PC)、枸杞多糖低剂量组(LBP-L)、枸杞多糖中剂量组(LBP-M)和枸杞多糖高剂量组(LBP-H)。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)水平。RT-PCR技术分析细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3和Caspase-9表达水平。结果：经200μmol/L H₂O₂刺激HUC-MSCs 6 h后,细胞体积缩小,呈明显的凋亡样变,表明HUC-MSCs氧化损伤模型建立成功;CCK-8实验结果显示,与NC组比较,M组的细胞存活率明显降低(P <0.01);与M组相比,LBP处理组细胞存活率逐渐升高(P <0.05)。ROS实验结果表明,与NC...     

杂交分离手术治疗伴有脊髓压迫症状的胸腰椎转移瘤的疗效观察

目的:评估杂交分离手术治疗伴有脊髓压迫症状的胸腰椎转移瘤的临床疗效。方法 :回顾性分析2013年6月～2018年6月我院收治的28例因伴有脊髓压迫症状的胸腰椎转移瘤行手术治疗患者的临床资料,其中男18例,女10例,年龄57.0±10.8岁(41～77岁)。原发肿瘤类型:肺腺癌12例,肺鳞癌2例,肺神经内分泌癌1例,直肠腺癌6例,肾透明细胞癌3例,乳腺癌2例,肝细胞癌1例,前列腺癌1例。肿瘤侵犯脊柱部位:单发胸椎转移13例、腰椎转移11例,多发胸椎转移2例、腰椎转移1例,胸腰椎转移1例。术前Frankel分级A级1例,B级5例,C级6例,D级16例;疼痛视觉模拟评分(visual analogue scale,VAS)为7.3±0.8分;Tomita评分5.9±0.9分(4～7分);硬膜外脊髓压迫(epidural spinal cord compression,ESCC)评分1b级3例,1c级9例,2级8例,3级8例。均行杂交分离手术,具体方法包括后入路椎体肿瘤部分切除减压、骨水泥钛网支撑、骨水泥填充封闭、椎弓根螺钉内固定术。统计手术时间、术中出血量、术后住院天数,术后即刻及术后3个月时的Frankel分级,术后7d及术后3个月时的VAS评分,美国东部肿瘤协作组(Eastern Cooperative Oncology Group,ECOG)体力状况评分,术中和术后相关并发症情况以及患者生存期。结果 :手术时间为202.0±34.7min(140～285min),术中出血量为819.6±150.0ml(500～1100ml),术后住院日为13.2±3.9d(7～22d)。术中及术后并发症:脑脊液漏3例,切口感染3例,尿路感染1例,肺部感染1例,术后急性神经根刺激症状3例,随访至12个月时发生钛网移位1例。术后7d、3个月VAS评分及ECOG评分与术前比较均有显著性改善(P0.05)。中位随访时间为20.5个月(6～42个月),平均随访时间为21.3±10.0个月,至末次随访有6例存活,其中1例于术后30个月时出现椎体新发转移,行二次手术后仍带瘤生存,至末次随访时存活时间为38个月。结论:杂交分离手术治疗伴有脊髓压迫症状的胸腰椎转移瘤能够明显减轻脊髓压迫,改善患者神经功能,缓解疼痛,提高生活质量。     

ALPPS与采用不同栓塞材料PVE对肝再生及手术切除率影响研究

目的 比较不同栓塞材料的门静脉栓塞术（PVE）与联合肝脏分隔和门静脉结扎的二步肝切除术（ALPPS）对剩余肝体积（FLR）增长速率的影响,比较各组FLR的增长速率,二期手术切除率、术中数据和术后并发症。方法 采用单中心、前瞻性、非随机对照的对比研究。2014年11月至2019年12月,海军军医大学第三附属医院共126例因FLR不足导致无法切除的肝细胞癌（HCC）或肝内胆管癌（ICC）病人,将其分为4组：ALPPS组及分别采用氰基丙烯酸正丁酯（NBCA）、微球、明胶海绵作为栓塞材料的PVE组。主要终点为FLR增长速率和二期手术切除率。结果 各组的手术切除例数及二期手术切除率分别为：ALPPS组38例（99.4%）,NBCA组32例（76.2%）,明胶海绵组20例（60.6%）,微球组10例（83.3%）。ALPPS组、NBCA组、微球组的FLR增长速率分别为15.1 mL/d,10.0 mL/d和 8.5 mL/d,均高于明胶海绵组（3.7 mL/d）。结论 采用NBCA及微球作为栓塞材料的PVE导致FLR增长速率低于ALPPS,两种栓塞材料的PVE二期手术切除率相当。使用NBCA作为栓塞材料的PVE其FLR增长速率高于微球,且这两种栓塞材料的栓塞效果均优于明胶海绵。     

海藻酸钙/枸杞多糖凝胶微球对小鼠骨质疏松的作用研究

目的研究海藻酸钙(ALG-Ca)/枸杞多糖(LBPs)凝胶微球对小鼠骨质疏松的作用。方法采用静电液滴法制备ALG-Ca凝胶微球、ALG-Ca/LBPs凝胶微球,用扫描电镜观察微球结构。建立去卵巢小鼠骨质疏松模型,随机分为假手术组、模型组、单纯ALG-Ca微球组、单纯LBPs组、ALG-Ca/LBPs凝胶微球组,每组8只,每日灌胃1次,干预时间为12周,对各组小鼠股骨行HE染色观察骨组织形态变化,Micro-CT检测并经三维重建获得骨组织微观结构,对小鼠血清骨钙素(BGP)、血清碱性磷酸酶(BALP)、1型胶原羧基末端肽(CTX-1)进行检测。结果扫描电镜观察示凝胶微球呈均匀一致的微球形结构;OVX+LBPs、OVX+ALG-Ca/LBPs组的BGP、BALP、CTX-1均低于OVX+PBS组(P<0.05);OVX+LBPs、OVX+ALG-Ca/LBPs组骨体积分数(BV/TV)、骨小梁数目(Tb.N)及骨小梁厚度(Tb.Th)均高于OVX+PBS组(P<0.05),骨小梁间隙(Tb.Sp)小于OVX+PBS组(P<0.05),以OVX+ALG-Ca/LBPs组为最佳(P<0.01)。结论ALG-Ca凝胶微球是LBPs治疗骨质疏松的良好药物缓释载体;LBPs为天然植物成分,通过LBPs/ALG-Ca凝胶微球可以改善骨质疏松小鼠的骨代谢及骨微结构。     

黄芪多糖治疗对去卵巢诱导骨质疏松大鼠骨密度、骨量和骨代谢的影响

目的探索黄芪多糖对去卵巢大鼠骨量和骨代谢以及BMP-2/Smads信号通路的影响。方法30只雌性SD大鼠进行去卵巢手术或假手术。正常饲养12周后被分为黄芪多糖组(ASNT组)、对照组(CON组)和去卵巢组(OVX组),其中黄芪多糖组每天给予400 mg/kg黄芪多糖治疗。通过骨密度、骨代谢指标、Micro-CT以及WB检测评估ASNT对骨质疏松症大鼠骨量、骨代谢以及BMP-2/Smads信号通路的影响。结果经过12周治疗,ASNT组大鼠骨密度较OVX组显著增加(P<0.05);ASNT治疗12周可以降低血清ALP和OC水平,增加血钙含量,增加股骨骨密度。经过12周治疗,ASNT组大鼠骨体积分数(BV/TV)、表面积体积分数(BS/TV)、骨小梁厚度(Tb.Th)、骨小梁数目(Tb.N)较OVX组显著增加;而骨小梁间隙(Tb.Sp)较OVX组显著降低,差异比较有统计学意义(P<0.05)。WB结果表明OVX大鼠骨组织的BMP-2/Smsds信号通路受到抑制;ASNT可以通过上调BMP-2、p-Smad1和p-Smad5的表达显著激活BMP-2/Smsds信号通路传导。结论研究表明ASNT对去卵巢大鼠骨密度和骨量具有保护作用,可能和激活BMP-2/Smads信号通路有关。     

无问中西,磨砺自成芳华

各位《中华创伤骨科杂志》的读者朋友们:大家好!庚子年即将过去,我们将迎来簇新的2021年,在这新旧交替之际,我谨代表赛灵药业科技集团,向大家致以最真诚地新年祝福!庚子年多灾多难自然是无稽之谈,但一场惊心动魄、感天动地的疫情阻击战就爆发在眼前,无论中医西医,为了取得最后的胜利,都奋不顾身地投入到这场没有硝烟的战争,让我们由衷地向时代画卷中壮丽的白色长城致敬!     

应用远红外线(FIR)治疗乳腺癌相关的淋巴水肿的肿瘤安全性研究

目的探讨应用远红外线(FIR)治疗乳腺癌相关的淋巴水肿的肿瘤安全性。方法选取乳腺癌切除术后5年以上,且伴有1年以上上肢淋巴水肿的患者,分为FIR组和对照组,分别采用FIR治疗和绷带加压保守治疗。观察指标包括肿瘤标志物(CA153、CA125)、相关结构的超声检查,并对治疗后1年的不良反应进行监测。通过体外试验观察FIR对人乳腺癌细胞系(MCF7、MDA-MB-231)和人皮肤成纤维细胞的影响,分析比较乳腺癌细胞系和人真皮成纤维细胞系的活力、增殖、细胞周期和凋亡情况。结果两组患者治疗1年后,肿瘤标志物(CA153、CA125)浓度均未升高,且数据无统计学差异(P>0.05)。两组均未发现淋巴结肿大或新增大的淋巴肿瘤,无不良反应产生。体外试验表明,FIR辐射对成纤维细胞及MCF-7和MDA-MB-231的活力、增殖、细胞周期、凋亡均没有影响。结论用FIR治疗乳腺癌术后5年的上肢淋巴水肿是安全的。     

香菇多糖预处理对急性弓形虫感染小鼠中枢神经系统损伤的保护性作用研究北大核心CSCD

目的探究香菇多糖预处理对急性弓形虫感染小鼠脑中枢神经系统的保护性作用。方法将C57BL/6小鼠随机分为对照组(NC)、模型组(TDI)和香菇多糖预处理组(pre-10dLNT TDI)。弓形虫感染前10d,pre-10dLNT组小鼠连续10d腹腔注射LNT(1mg/kg体重,1次/d),弓形虫感染后无任何处理;TDI组小鼠腹腔注射弓形虫悬液0.5 mL/只鼠;NC组小鼠感染前10d开始腹腔注射同等体积的生理盐水(1次/d)。通过观察小鼠的死亡时间及数量计算各组小鼠的存活率,使用流式细胞仪检测感染后第8d小鼠脑组织中CD8+IFN-γ+T细胞百分比,ELISA法检测感染后第4d和第8d小鼠外周血中IFN-γ、GABA和DA水平,应用SoftMax Pro 4.3.1LS软件绘制标准曲线计算各项指标的含量(pg/ml)。采用Grapad 8.0软件进行处理和分析。结果TDI组小鼠第8d存活率为0%,pre-10dLNT TDI组小鼠第8d存活率为60%;与NC组相比,TDI组和pre-10dLNT TDI组CD8+IFN-γ+T细胞亚群水平均明显增高;与TDI组小鼠相比,pre-10dLNT预处理明显降低了弓形虫感染的C57BL/6J小鼠脑组织中CD8+IFN-γ+细胞数量(P<0.01)、明显降低了小鼠第4d和8d的外周血中IFN-γ产生水平(P<0.05;P<0.01)、第8d小鼠外周血中DA和GABA的产生水平显著增加(P<0.01)。结论LNT预处理可以显著提高急性弓形虫感染小鼠的存活率,通过减少CD8+T细胞通过血脑屏障进入CNS,降低神经系统的广泛炎症反应,通过降低脑组织中CD8+IFN-γ+T细胞数量,调节神经递质的分泌水平,从而改善小鼠脑部的炎症反应,对急性弓形虫小鼠中枢神经系统的损伤具有明显的保护作用。     

新型冠状病毒RDRP的原核表达、多克隆抗体制备及生物信息学分析北大核心CSCD

目的应用原核表达系统制备重组新型冠状病毒依赖RNA的RNA聚合酶(RNA-dependent RNA polymerase,RDRP),纯化后免疫新西兰大白兔获得高效价多克隆抗体,并对RDRP进行生物信息学分析。方法鉴定正确的pET-22b RDRP质粒转化表达载体,诱导表达RDRP蛋白,纯化后免疫大白兔,间接ELISA法检测其多克隆抗体效价。运用Expasy PortParam、SWISS MODEL等生物信息学软件对RDRP蛋白的等电点、分子质量、亲疏水性等理化性质、蛋白的空间结构、跨膜结构域、磷酸化位点、蛋白信号肽进行预测;构建系统进化树,进行亲缘性分析。结果pET-22b RDRP重组质粒酶切鉴定正确,经诱导重组蛋白以包涵体的形式表达,8 mol/L尿素梯度复性后得到纯度高的RDRP蛋白。用纯化蛋白免疫大白兔,间接ELISA检测血清抗体效价>1∶256000,Western blot检测抗体具有良好特异性。经生物信息学分析RDRP蛋白为亲水性,非跨膜蛋白,且无信号肽。11种病毒系统进化树显示,SARS-CoV-2 RDRP蛋白与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近。结论成功获得重组SARS-CoV-2 RDRP蛋白,用该蛋白免疫大白兔能刺激产生高效价的多克隆抗体。预测与SARS-CoV RDRP亲缘关系较近,为亲水性非跨膜蛋白,为研究SARS-CoV-2 RDRP蛋白的生物学功能及其疫苗的制备奠定了基础。     

古尔图病毒核蛋白的原核表达纯化及ELISA检测方法的建立

目的获得纯化的GTV-rNP蛋白抗原, 并建立快速准确检测GTV抗体的ELISA法。方法人工合成密码子优化的 GTV-NP 编码基因, 克隆至 pET32a(+)载体, 构建重组表达质粒, 转化至 BL21(DE3)。将优化表达获得的蛋白经Ni柱纯化后用SDS-PAGE和Western blot鉴定。以纯化蛋白为抗原, 建立并优化GTV IgG抗体间接ELISA检测方法, 并对其进行评价和初步应用。结果成功构建原核表达质粒pET32a-NP, 重组蛋白以包涵体形式在大肠杆菌中高效表达, 大小约为44 kD, Western blot结果表明重组蛋白与GTV阳性血清具有良好的抗原性。建立的ELISA法特异性强、敏感性高、批内和批间的变异系数均小于10%具有较好的重复性;检测结果与IFA检测结果符合率达到92.77%。结论建立的GTV NP 抗体检测ELISA方法的敏感性、重复性和特异性均较好。