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11.
鸡贫血病毒VP 3基因的克隆及其体外凋亡诱导效应的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
用PCR方法扩增了鸡贫血病毒标准株的vp3基因,并将其克隆于真核表达载体pcDNA3上,构建了重组体pcDNA-vp3.经酶切鉴定及测序分析表明,该片段和预期相符.在体外利用LipofectAMINETM介导的基因转染,将pc-DNA-vp3、pcDNA3分别转入肝癌细胞系HepG2和二倍体肝细胞系L-02中,转染后的RT-PCR结果证实vp3基因在细胞中得到了表达.同时利用筛选稳定表达细胞株的技术和原位细胞凋亡检测法,证明了鸡贫血病毒是以凋亡的方式诱导细胞死亡,并且只诱导癌细胞的凋亡,而不诱导正常或二倍体细胞死亡.表明鸡贫血病毒vp3基因很可能成为一种极具潜力的抗肿瘤生物制剂.  相似文献   
12.
目的 对融合基因GM-CSF/Feγ2^-进行定点突变,去除其补体结合位点,构建GM-CSF/Feγ2^-融合蛋白真核表达载体。方法 通过设计突变引物,利用PCR定点突变技术扩增融合基因GM-CSF/Feγ2^-。并通过T-A克隆策略,把突变后的融合基因GM-CSF/Feγ2^-重组到真核表达载体pRc/CMV2中,构建真核表达质粒pRc/CMV2/GM-CSF/Feγ2^-并经过酶切和测序确证。结果 成功对融合基因GM-CSF/Feγ2^-进行突变,构建了真核表达载体pRc/CMV2/GM-CSF/Feγ2^-。结论 利用该PCR方法进行基因定点突变可行。  相似文献   
13.
用RT-PCR技术从人胎盘组织内成功地扩增全长肝细胞生长因子(HGF)cDNA基因(2 184bp),并将其克隆至pGEM-T载体,经限制性核酸内切酶NdeⅠ,BglⅡ,HindⅢ,BamHⅠ和XhoⅠ的酶谱分析和DNA测序分析证实。再将其亚克隆至逆病毒载体pLNL-XHC,可进一步用于基因表达和基因治疗的研究。  相似文献   
14.
人血管内皮细胞生长因子基因克隆、表达与纯化   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究人血管内皮细胞生长因子121(hVEGF121)基因在pET-24a(+)中的表达,获得高效表达、具有生物学活性的rhVEGF121。方法提取人原髓白血病细胞(HL60)总RNA,RT-PCR扩增hVEGF121基因,经DNA序列分析后,克隆于高效原核表达载体pET-24a(+),并转化到大肠杆菌B121(DE3)中,经IPTG诱导表达,超滤复性,DEAESephamseFastFlow阴离子交换和SephacryS-100分子筛色谱纯化后,以HUVEC测定其生物学活性。结果SDS-PAGE结果显示,目的蛋白质以包涵体形式存在,表达量达菌体总蛋白质的20%,纯化后rhVEGF121纯度达95%以上,生物学活性检测证实,具有刺激HUVEC增殖的功能。结论在原核系统中实现了hVEGF121的高效表达。  相似文献   
15.
应用RT—PCR方法,从小鼠脾脏T细胞的mRNA中,扩增获得编码小鼠趋化因子CXCL10的cDNA,并加上人单核细胞趋化蛋白1的信号肽基因,将其克隆到Pucm—T载体,经酶切及测序鉴定,进而构建CXCL10重组真核表达载体。采用脂质体法体外转染COS-7真核细胞,经Western blot和趋化指数检测,转染细胞能够表达CXCL10蛋白,其上清对淋巴细胞具有趋化作用。CXCL10的真核表达载体构建成功,为进一步研究其在肿瘤治疗中的作用奠定了基础。  相似文献   
16.
目的 表达人血小板衍生生长因子(PDGF)BB蛋白并进行生物学活性鉴定.方法 基因扩增方法获得人PDGF-B基因;原核表达PDGF-BB蛋白,并纯化、复性;免疫印迹分析重组蛋白的免疫原性;应用培养的大鼠成骨细胞对其生物学活性进行鉴定.结果 扩增出327bp目的基因,与预期结果吻合,DNA序列分析正确.SDS-PAGE和免疫印记检测表明获得新生蛋白的分子量及免疫原性均与预期符合.体外细胞学鉴定表明,获得的rhPDGF-BB可明显促进大鼠成骨细胞的增殖和DNA复制,表明重组的PDGF-BB具有较好的生物学活性.结论 PDGF-B成熟肽基因克隆成功并成功地在大肠杆菌中实现了高表达.复性后细胞学MTT和FCM鉴定表明获得的rhPDGF-BB具有较好的生物学活性,为生产活性PDGF-BB蛋白及其在促进骨组织和创伤修复方面的进一步功能研究奠定了基础.  相似文献   
17.
兔转化生长因子-β2基因的克隆及其表达的检测   总被引:1,自引:1,他引:1  
目的 克隆兔转化生长因子 β2 (TGF β2 )基因 ,并获得其在兔重要脏器及角膜中的表达。方法 利用不同物种的相似序列设计相关引物 ,制备兔肝组织的RNA并逆转录 ,RT PCR技术获得TGF β2 基因蛋白编码区序列后克隆 ,RT PCR半定量及荧光定量PCR检测TGF β2 在兔重要脏器及角膜中的表达。结果 成功地克隆了兔TGF β2 的蛋白编码区序列 ,测序证实和人、大鼠及小鼠具有高度的同源性 ,含有TGF β2 的保守结构域 ,TGF β2 基因在兔心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肾上腺和角膜组织中均有不同程度表达。结论 利用同源序列克隆进化上保守的基因是简捷快速的方法。获得兔TGF β2 的基因有助于进一步研究其在机体重要脏器纤维化、肿瘤以及角膜疾病中的作用  相似文献   
18.
目的:利用基因工程技术对 par-4 SAC 进行基因克隆并测定其序列,为进一步诱导肿瘤细胞靶向性凋亡的基因治疗奠定基础.方法:采用非对称互补引物/模板法,制备两端含有酶切位点的 par-4 SAC 的 cDNA,PCR产物克隆入 pGEM-T Easy 载体并转化感受态大肠杆菌 E.coli DH5α菌株,随机挑取数个菌落,筛选鉴定并测序.结果:经酶切鉴定、测序分析,表明所插入的基因片断为 par-4 SAC 基因,与设计完全相同.结论:应用非对称互补引物/模板法克隆 par-4 SAC 基因是成功及可行的.  相似文献   
19.
目的 构建NT4-p53(N37)-HA2-TAT融合基因表达盒并进行序列分析. 方法 应用互补引物二次PCR技术及T载体克隆法克隆p53(N37)基因,筛选阳性克隆、酶切鉴定并测序.扩增阳性重组质粒后用限制性内切酶切取p53(N37)和HA2-TAT片段连入pUC19/NT4质粒. 结果 克隆了p53(N37)基因,经酶切及测序证实结果正确;重组质粒pUC19/NT4-p53(N37)-HA2-TAT经限制性内切酶及琼脂糖凝胶电泳鉴定,结果显示酶切片段大小和理论值完全一致. 结论 通过基因克隆体外重组技术成功制备了含有NT4-p53(N37)-HA2-TAT表达盒的pUC/19质粒,为进一步开展肿瘤的基因治疗奠定了基础.  相似文献   
20.
迟缓爱德华菌(Edwardsiella tarda)属肠杆菌科,为革兰氏阴性菌,兼性厌氧,周生鞭毛,无荚膜,无芽孢[1].该菌引起的原发感染或继发感染,对人或鱼类的致病性均较严重[2,3].为了构建迟缓爱德华菌抗独特型抗体基因工程疫苗,我们应用RT-PCR的方法,从分泌迟缓爱德华菌抗独特型的杂交瘤细胞株1E11中克隆出抗体轻链可变区(VL)基因,并进行了克隆和序列分析.  相似文献   
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