The Neuroprotection of Verbascoside in Alzheimer’s Disease Mediated through Mitigation of Neuroinflammation via Blocking NF-κB-p65 Signaling

Verbascoside (VB) is a phenylethanoid glycoside extracted from the herbaceous plant Verbascum sinuatum and plays a neuroprotective role in Alzheimer’s disease (AD). The goal of this study was to explore the neuroprotective mechanism of VB. Based on the proteomics analysis, immunohistochemistry, immunofluorescence, Western blot, and ELISA were utilized to explore the neuroprotective mechanism of VB in context of neuroinflammation in APP/PS1 mice, LPS-induced BV2 cells, and/or Aβ_1-42-stimulated N2a cells. Proteomic analysis demonstrated that the neuroprotection of VB correlated closely to its anti-inflammatory effect. VB significantly blocked microglia and astrocyte against activation in brains of APP/PS1 mice, suppressed the generation of IL-1β as well as IL-6, and boosted that of IL-4, IL-10 and TGF-β in vivo, which were analogous to results acquired in vitro. Furthermore, VB effectively restrained the phosphorylation of IKKα+β, IκBα, and NF-κB-p65 in APP/PS1 mice; LPS-induced BV2 cells, and Aβ_1-42-stimulated N2a cells and lowered the tendency of NF-κB-p65 translocation towards nucleus in vitro. These results demonstrate that the neuroprotective effect of VB correlates to the modulation of neuroinflammation via NF-κB-p65 pathway, making VB as a hopeful candidate drug for the prevention and treatment of AD.     

RP-HPLC同时测定民族药红药中苯乙醇苷类 化合物plantainoside D和毛蕊花糖苷

目的:建立同时测定民族药红药中苯乙醇苷类化合物plantainoside D和毛蕊花糖苷含量的方法.方法:采用反相高效液相色谱法,用Agilent C18(4.6 mm×250 mm,5μm)柱,以乙腈-1%醋酸溶液(16:84)为流动相,流速1.0 mL·min-1,检测波长332 mm,柱温30℃.结果:RP-HPLC测定的plantainoside D和毛蕊花糖昔线性范围分别在6.250～100.0 mg·L-1(r=0.9998)和12.50～500.0mg·L-1(r =0.9998),平均回收率分别为101.3%,100.8%,RSD分别为2.6%,2.2%(n=9).结论:方法简便,精密度、重复性良好,结果准确可靠,可以作为红药药材及相关制剂质量控制的一个有效方法.     

不同产地管花肉苁蓉中有效成分的定量分析

目的建立管花肉苁蓉药材中松果菊苷、毛蕊花糖苷和半乳糖醇的HPLC测定方法。方法采用Agilent ZORBAX SB C18色谱柱,甲醇-0.1%甲酸梯度洗脱,体积流量为1.0mL/min,在检测波长330nm、柱温为35℃的条件下对松果菊苷和毛蕊花糖苷的量进行测定;采用Prevail Carbohydrate ES聚合凝胶柱色谱柱,以乙腈-水(77∶23)为流动相,体积流量为0.7mL/min,以ELSD为检测器,在柱温为25℃的条件下对半乳糖醇进行测定。结果松果菊苷的平均回收率为100.29%,RSD为1.32%;毛蕊花糖苷的平均回收率为102.10%,RSD为1.14%;半乳糖醇的平均回收率为99.42%,RSD为2.83%。结论本方法对管花肉苁蓉质量标准的制定和栽培基地的选择具有很好的参考价值。     

HPLC同时测定杞菊地黄口服液12种成分

目的建立一种快速、准确和实用的HPLC方法,用于同时测定杞菊地黄口服液中5-羟甲基糠醛(5-HMF)、莫诺苷、绿原酸、隐绿原酸、马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、丹皮酚的含量。方法采用YMC ODS柱(250 mm×4.6 mm,5μm),柱温35℃,以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱,体积流量为1.0 mL/min,检测波长为254、325 nm,进样量10μL。结果 5-HMF、莫诺苷、绿原酸、隐绿原酸、马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、丹皮酚进样量在0.08～1.60、0.12～2.40、0.09～1.80、0.06～1.20、0.10～2.00、0.30～6.00、0.01～0.20、0.01～0.20、0.01～0.20、0.005～0.10、0.005～0.10、0.01～0.20μg与峰面积呈良好的线性关系,精密度、重复性、稳定性均良好,RSD均小于3.5%,加样回收率均在96%～103%,RSD分别为2.13%、3.45%、2.86%、2.59%、3.15%、3.49%、2.19%、3.25%、2.37%、2.53%、2.91%、3.35%,测定5批样品中各成分含量稳定,所测12种成分质量浓度分别为98.56～102.56、204.28～212.10、18.53～18.89、1.95～2.05、12.31～12.54、87.01～87.12、5.35～5.43、16.08～16.15、8.69～8.72、8.89～8.95、5.12～5.19、1.87～1.94μg/m L。结论本方法可以同时测定杞菊地黄口服液中5-HMF、莫诺苷、绿原酸、隐绿原酸、马钱苷、芍药苷、毛蕊花糖苷、木犀草苷、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C、丹皮酚的含量,适用于杞菊地黄口服液的质量控制。     

Box-Behnken响应面法优化毛蕊花糖苷离心萃取工艺

目的 采用离心萃取系统萃取毛蕊花糖苷提取物。方法 通过单因素试验，研究油相中毛蕊花糖苷含量、流量、油水相比、萃取次数、转速、pH对毛蕊花糖苷萃取率的影响。利用响应面Box-Behnken实验设计探究油相中毛蕊花糖苷含量、流量、转速、油水相比对毛蕊花糖苷萃取率的影响并优化最优工艺参数。结果 单因素试验结果表明：萃取最佳条件为油相中毛蕊花糖苷含量为19.20 mg·mL^-1，转速为48 Hz，流量为300 mL·min^-1，油相与水相比=1∶1，乙酸加入量为2%，萃取次数为3次。通过响应面分析发现各因素对毛蕊花糖苷萃取率的影响顺序为油相中毛蕊花糖苷含量>油水相比>流量>转速；在最佳条件下：油相中毛蕊花糖苷含量21.50 mg·mL^-1、转速48 Hz、流量290 mL·min^-1、油水相比1∶1，3次平行试验得到的毛蕊花糖苷萃取率分别达82.49%，79.38%，81.76%，与预测值80.03％的相对误差分别为3.07%，0.81%，2.16%。结论 此方法能够有效对毛蕊花糖苷进行纯化，为毛蕊花糖苷的开发利用提供理论依据。     

经典名方阳和汤指纹图谱及功效关联物质预测分析

目的 基于指纹图谱及网络药理学,建立阳和汤指纹图谱检测方法,并对其功效关联物质进行预测分析,为阳和汤质量控制提供参考依据。方法 采用HPLC建立阳和汤指纹图谱,对共有峰进行归属和指认,并运用网络药理学构建阳和汤“成分-靶点-通路”网络关系图,进一步佐证阳和汤功效成分选择的合理性。结果 阳和汤的HPLC指纹图谱共标定15个共有峰,通过对照品指认出2号峰5-羟甲基糠醛、5号峰芥子碱硫氰酸盐、8号峰甘草苷、9号峰毛蕊花糖苷、11号峰肉桂酸、12号峰桂皮醛、13号峰甘草酸、15号峰盐酸麻黄碱8个共有色谱峰,相似度均>0.83,主要药效物质群可以从药材-饮片-基准样品逐级较为完整的传递,且归属关系清晰明确;采用网络药理学对筛选出的8个活性成分进行“成分-靶点-通路”网络构建与分析,富集的通路中包括癌症信号通路、脂质和动脉粥样硬化信号通路、鞘脂信号通路、甲状腺激素信号通路等。根据成分、靶点以及通路之间的连接度,初步预测甘草酸、甘草苷、桂皮醛、肉桂酸、毛蕊花糖苷、芥子碱硫氰酸盐、盐酸麻黄碱7个活性成分可能通过调节这些信号通路达到温阳补血、散寒通滞的作用。结论 通过HPLC指纹图谱结合网络药理学...     

基于标准汤剂的鲜地黄配方颗粒质量标准研究

目的 建立基于标准汤剂的鲜地黄配方颗粒质量标准,为鲜地黄配方颗粒质量控制提供参考。方法 根据《中药配方颗粒质量控制与标准制定技术要求》,制备25批鲜地黄标准汤剂,测定各批次标准汤剂的出膏率、指标成分梓醇和地黄苷D的含量,构建能全面表征鲜地黄环烯醚萜苷类成分和苯乙醇苷类成分的UPLC特征图谱;基于标准汤剂出膏率、指标成分含量、特征图谱的一致性,制备3批鲜地黄配方颗粒,验证制定标准的合理性。结果 鲜地黄标准汤剂出膏率实测范围为13.93%～20.09%;梓醇和地黄苷D的质量分数分别为36.14～73.37、2.96～5.33 mg/g;环烯醚萜苷类成分特征图谱共标定了10个共有峰,指认峰3、4、6分别为梓醇、地黄苷D、益母草苷;苯乙醇苷类成分特征图谱共标定了8个共有峰,指认峰1、4、5、6分别为洋地黄叶苷C、毛蕊花糖苷、焦地黄苯乙醇苷B1、异毛蕊花糖苷;3批鲜地黄配方颗粒出膏率、指标成分含量、特征图谱均与同批次药材制备的标准汤剂接近,且均在质量标准规定范围内。结论 该研究建立的基于标准汤剂的鲜地黄配方颗粒质量标准科学合理、稳定可行,可为鲜地黄配方颗粒的质量控制提供参考。     

Antihyperalgesic activity of verbascoside in two models of neuropathic pain

Objectives This study reports on the rapid isolation of verbascoside from Lippia citriodora H.B.K. (Verbenaceae), an inexpensive and widespread source, and the evaluation of its antihyperalgesic activity. Methods Isolation of verbascoside was achieved by size exclusion chromatography with Sephadex LH‐20 eluting with 50% EtOH, which is proposed as a fast and efficient method of separation. Key findings The antihyperalgesic activity of verbascoside was tested by in‐vivo assay using the paw‐pressure test in two animal models of neuropathic pain: a peripheral mononeuropathy produced either by a chronic constriction injury of the sciatic nerve (CCI) or by an intra‐articular injection of sodium monoiodoacetate (MIA). Conclusions Verbascoside administered intraperitoneally at a dose of 100 mg/kg reverted the mechanical hyperalgesia in both CCI and MIA treated rats, as evaluated in the paw‐pressure test. Verbascoside was also effective against mechanical hyperalgesia after oral administration at doses of 300 and 600 mg/kg.     

结合逐步敲入策略与制剂工艺过程的肾宝片复杂成分辨识

目的 结合肾宝片处方22味药材组成及其制剂工艺过程,阐明肾宝片提取物(浸膏)的化学成分,为肾宝片质量控制提供依据.方法 采用UPLC分别建立浸膏1与浸膏2的指纹图谱,将浸膏1、2成分与全浸膏对应,按照浸膏1、2逐步敲入的方式,验证全浸膏中的成分,并利用UPLC-Q-TOF-MS快速鉴定各浸膏中的成分.结果 基于UPLC...     

甘肃马先蒿毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷制备工艺研究

目的建立制备甘肃马先蒿中毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷单体的方法。方法以毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷质量分数为考察指标,通过静态吸附和动态解吸附实验,从01A1、D101、HPD100、AB-8、XAD-6、DM130、DM-301、DM-201、YWD06B及YWD06C中筛选出最佳树脂,确定制备甘肃马先蒿总苯乙醇苷的最佳纯化工艺。并以中压柱色谱技术分离制备毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷单体,根据波谱数据鉴定结构。结果最佳纯化工艺为上样溶液含生药20 mg/m L,上样体积流量为3 BV/h,先用3 BV的水除杂,再用5 BV 50%乙醇以2 BV/h的体积流量洗脱,洗脱液减压浓缩,冷冻干燥,得甘肃马先蒿总苯乙醇苷纯化物,该纯化物中毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的质量分数为42.29%和28.51%。经中压柱色谱精制后分离制备的毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷单体质量分数分别为98.33%和99.24%。结论该方法高效快速、经济简单、易于实现,可用于毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷单体的制备。