Asiaticoside Inhibits TNF‐α‐Induced Endothelial Hyperpermeability of Human Aortic Endothelial Cells

The increase in endothelial permeability often promotes edema formation in various pathological conditions. Tumor necrosis factor‐alpha (TNF‐α), a pro‐atherogenic cytokine, impairs endothelial barrier function and causes endothelial dysfunction in early stage of atherosclerosis. Asiaticoside, one of the triterpenoids derived from Centella asiatica, is known to possess antiinflammatory activity. In order to examine the role of asiaticoside in preserving the endothelial barrier, we assessed its effects on endothelial hyperpermeability and disruption of actin filaments evoked by TNF‐α in human aortic endothelial cells (HAEC). TNF‐α caused an increase in endothelial permeability to fluorescein isothiocyanate (FITC)‐dextran. Asiaticoside pretreatment significantly suppressed TNF‐α‐induced increased permeability. Asiaticoside also prevented TNF‐α‐induced actin redistribution by suppressing stress fiber formation. However, the increased F to G actin ratio stimulated by TNF‐α was not changed by asiaticoside. Cytochalasin D, an actin depolymerizing agent, was used to correlate the anti‐hyperpermeability effect of asiaticoside with actin cytoskeleton. Surprisingly, asiaticoside failed to prevent cytochalasin D‐induced increased permeability. These results suggest that asiaticoside protects against the disruption of endothelial barrier and actin rearrangement triggered by TNF‐α without a significant change in total actin pool. However, asiaticoside seems to work by other mechanisms to maintain the integrity of endothelial barrier rather than stabilizing the F‐actin organization. Copyright © 2015 John Wiley & Sons, Ltd.     

满天星积雪草苷抗鸭乙肝病毒作用

目的 研究满天星积雪草苷抗鸭乙肝病毒的作用.方法 将鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)阳性麻鸭随机分为5组:模型组,阳性对照组(拉米夫定,3TC),满天星积雪草苷高、中、低剂量组,每组10只,各组麻鸭灌胃给药14 d,于用药前、用药7、14 d及停药后3d采血,检测血清鸭乙肝病毒表面抗原/e抗原(DHBsAg/DHBeAg)、DHBV-DNA和谷丙转氨酶/谷草转氨酶(ALT/AST)给药前后的变化,并观察肝组织病理改变.结果 与模型组比较,满天星积雪草皂苷高、中剂量组,阳性对照组用药后血清中DHBV-DNA、HBsAg、HBeAg、ALT、AST水平均明显降低(均P＜0.05);停药后3d,满天星积雪草皂苷高剂量组的DHBV DNA、HBsAg、HBeAg、ALT、AST水平为(1.21 ±0.11)、(0.12±0.01)、(0.11 ±0.01)、(122.4 ±15.5)、(85.2±9.4),模型组为(3.05±0.15)、(0.22±0.01)、(0.17 ±0.02)、(270.4 ±16.4)、(141.9±9.8),均低于模型组(均P＜0.05),阳性对照组为(2.36±0.13)、(0.18±0.01)、(0.15 ±0.01)、(233.5±13.8)、(121.3 ±10.2),出现明显反跳现象;病理分析表明,满天星积雪草苷对肝损伤有明显改善作用.结论 积雪草苷能有效抑制HBV在体内复制,可能是满天星中一个主要的生物活性成分.     

肠内菌群对积雪草苷的代谢转化研究

目的通过离体、在体实验研究大鼠肠道内菌群对积雪草苷的代谢作用,并确定代谢产物的化学结构。方法将积雪草苷加入大鼠肠内细菌的菌酶溶液中,温孵一定时间后,以TLC和LC-M S法检测体外实验代谢产物,LC-M S法检测在体实验大鼠尿、血中的代谢产物。结果发现了3个积雪草苷的代谢产物,鉴定了代谢产物的结构。结论积雪草苷可被大鼠肠内菌群代谢,原形物和代谢产物均为吸收入血成分。     

积雪草苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用以及MAPK通路的影响

目的：研究积雪草苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤及MAPK信号通路的影响。方法：构建大鼠心肌缺血再灌注模型,将大鼠分为对照组、模型组和积雪草苷低（12.5 mg·kg^-1）、中（25 mg·kg^-1）、高（50 mg·kg^-1）治疗组。心脏超声检测心脏功能,HE染色检测心脏组织损伤程度。免疫组化检测心脏组织中ki67阳性细胞率,Western blot检测Bax、Bcl-2、磷酸化-细胞外调节激酶1/2（phosphorylation-extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK1/2）和p-p38丝裂原活化蛋白激酶（p-p38 mitogen-activated protein kinase,p-p38MAPK）的蛋白相对表达量。酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测外周血液中肌酸激酶同工酶（creatine kinase-MB,CK-MB）、肌红蛋白（myoglobin,Mb）、肌钙蛋白（cardiac troponin I,cTnI）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor alpha,TNF-α）、白介素-6（interleukin-6,IL-6）和IL-1β的蛋白相对表达量。结果：与模型组相比,在积雪草苷治疗后,大鼠心率、射血分数、左室收缩压显著上调;心肌酶Mb、cTnl、CK-MB的表达量显著下调,ki67阳性细胞率上调,促炎细胞因子IL-6、TNF-α和IL-1β的表达量下调,Bax/Bcl-2、p-ERK1/2/ERK1/2和p-p38MAPK/p38MAPK的比率显著下调。结论：积雪草苷对大鼠心肌缺血再灌注损伤的保护作用,并抑制MAPK信号通路。     

积雪草甙对实验大鼠乳腺增生的防治

目的：研究积雪草甙对实验大鼠乳腺增生症的预防和治疗作用。方法：应用苯甲酸雌二醇，黄体酮制备大鼠乳腺增生症模型。在制备模型同时或之后，灌服积雪草甙，于给予受试药后第32天测量左右两个乳房直径，高度和乳头直径；放射免疫测定血清雌二醇（E2）和孕酮（P）浓度；镜下观察乳腺增生的病理改变，计算乳腺增生率和增生程度。结果：积雪草甙能显著降低实验性大鼠乳腺增生症的发生率，抑制乳腺增生程度，调节血清E2和P浓度，改善E2／P比值，积雪草甙能降低乳腺增生程度，减少乳腺增生症的发生率，有望成为预防和治疗乳腺增生症的候选药物。     

积雪草苷对脂多糖诱导大鼠发热的预防及对相关炎症因子的影响

目的探索积雪草苷的解热作用。方法雄性SD大鼠56只,随机平均分为正常组、模型组、溶媒对照组、对乙酰氨基酚组和积雪草苷3个剂量组。除正常组外,每只大鼠ip细菌脂多糖(LPS)100μg.kg-1制备大鼠发热模型,连续6h监测大鼠体温变化,6h后取血、肝脏和脑组织标本。积雪草苷3个剂量组造模前连续3dig积雪草苷(5,15和45mg.kg-1),每日1次;正常组和模型组给予等量生理盐水;溶媒对照组给予等量0.5%羧甲基纤维素钠;对乙酰氨基酚组于造模前30min一次性给予对乙酰氨基酚(50mg.kg-1,ip)。肝组织髓过氧化物酶(MPO)活性采用MPO试剂盒检测,肝脏组织血红素氧化酶1(HO-1)和脑组织环氧合酶2(COX-2)蛋白表达采用Western印迹方法测定,血浆前列腺素E2(PGE2)含量用酶联免疫法检测,HO-1活性用Morita法检测。结果注射LPS后,模型组出现3相热,最高升温幅度为2.01℃。积雪草苷5,15和45mg.kg-1组体温明显低于模型组,其中45mg.kg-1组与对乙酰氨基酚组相当。与模型组比较,3个积雪草苷剂量组发热后6h肝组织MPO活性、脑组织COX-2蛋白表达和血浆中PGE2的产生明显降低,肝组织HO-1活性和蛋白表达升高。结论积雪草苷具有预防发热作用,该作用可能与抑制COX-2/PGE2系统,并抑制炎症因子MPO活性、增强炎症保护因子HO-1的活性和表达有关。     

积雪草苷对小鼠胶原诱导性关节炎的抑制作用

研究积雪草苷(asiaticoside)对小鼠胶原诱导性关节炎(collagen-induced arthritis，CIA)的作用，并初步探讨其作用机制。建立CIA模型，检测小鼠足爪炎症的肿胀度，石蜡切片HE染色对关节组织进行病理检查，MTT法检测脾淋巴细胞增殖反应，Western blotting法检测关节软组织中环氧酶-2(cyclooxygenase-2，COX-2)蛋白的表达，EIA法测定关节软组织中前列腺素E₂(prostaglandin E₂，PGE₂)水平，ELISA法检测血清中炎症因子TNF-α、IL-6的水平。积雪草苷(10，20及40 mg·kg^-1)灌胃给药能剂量依赖性地减轻CIA小鼠的关节炎症状，抑制CIA小鼠C II胶原诱导的淋巴细胞增殖反应，减少CIA小鼠踝关节软组织中高水平的COX-2表达及PGE₂含量，降低血清中炎症因子TNF-α和IL-6的水平；同时病理检查发现，可以改善局部关节炎症状，抑制CIA小鼠滑膜细胞增生，减轻炎性细胞浸润。结果表明，积雪草苷对CIA具有抑制作用，其机制可能与抑制淋巴细胞增殖、减少COX-2表达及促进炎症因子TNF-α、IL-6释放等有关。     

外用积雪苷软膏辅助CO2点阵激光治疗妊娠纹临床研究

目的:观察外用积雪苷软膏辅助CO2点阵激光治疗妊娠纹的临床疗效。方法:选取50例妊娠纹患者,随机分成对照组和观察组各25例,两组均采用点阵激光治疗,共治疗3次,两次之间间隔至少2个月。每次激光治疗后外用修复产品至脱痂(通常7 d左右),对照组脱痂后不用任何药物,观察组脱痂后第二天开始外用积雪苷软膏,每天3次,连续使用至下一次治疗。结果:对照组有效率为76.00%,观察组有效率为80.00%,两组有效率比较差异无统计学意义(P0.05)。两组患者色素沉着发生率比较有统计学意义(P0.05),观察组色素沉着发生率明显低于对照组;两组治疗一疗程所需时间比较有统计学意义(P0.05)。结论:点阵激光是治疗妊娠纹安全且有效的治疗方法之一,但术后色素沉着发生率较高,延长治疗周期,影响美观,从而降低患者依从性。辅助外用积雪苷软膏可以明显降低色素沉着的发生率,缩短治疗周期,在短期内达到满意的疗效。     

积雪草人工种植技术的初步研究

目的研究积雪草Centella asiatica人工种植技术。方法以积雪草产量及药材中积雪草苷和羟基积雪草苷的总量为评价指标,考察土壤类型、种植密度、基肥、施肥方式及荫蔽度等不同因素对种植效果的影响。结果积雪草适合种植于泥炭土-珍珠岩(1∶1)中,种植密度为20 cm×20 cm,基肥为有机肥/复合肥(1∶1),基肥用量为7.5 g/m2,定植4个月后施尿素(18 g/m2)、5个月后施复合肥(45 g/m2),适宜荫蔽度为75%。结论本实验研究可为建立积雪草GAP种植基地奠定基础。     

积雪草皂苷与曲安奈德单独及联合治疗兔耳模型瘢痕的疗效

目的：研究积雪草皂苷和曲安奈德单独及联合治疗兔耳模型瘢痕的疗效。方法：在20只新西兰兔的耳朵上造成增生性瘢痕,术后第28天开始治疗,新西兰兔分为4组,第1组使用病灶内曲安奈德（TAC）治疗,第2组使用积雪草皂苷治疗,第3组使用两者联合治疗,第4组为控制组。在术后第56天,处死所有新西兰兔,收集伤疤,并使用苏木精-伊红（HE）染色、马松三色染色和CD34免疫组织化学进行处理。结果：各组的ETI如下：组1、2和3,相比对照组,分别下降61.2%、21%和43.3%。SEI下降如下：组1、2和3,相比对照组,分别为40.3%、18.7%和33.3%。马松染色表明,各研究组胶原纤维减少;更细,更有规律。此外,CD34染色表明,各研究组微脉管形成也均减少,检测各组CD34阳性细胞,检测值如下：组1（10.00±7.04）,组2（32.5±22.15）,组3（20.67±15.83）和组4（43.83±23.95）。结论：TAC比积雪草皂苷和两种药物的联合效果更好,但是两种药物联合比单独使用各个药物表现出更好的胶原排列。