可溶性转化生长因子βⅡ型受体对LOVO细胞体外增殖和抗肿瘤免疫的影响

目的:构建人转化生长因子βⅡ型受体细胞外区(sTGF-βRⅡ)基因的真核表达载体,初步探讨sTGF-βRⅡ对大肠癌LOVO细胞增殖及抗肿瘤免疫的影响。方法:采用DNA重组技术构建sTGF-βRⅡ的表达载体,用脂质体转染技术转染人大肠癌LOVO细胞,以RT-PCR、Western blot法检测目的基因及其蛋白表达。四甲基偶氮唑蓝(MTT)法和平板法集落形成实验检测sTGF-βRⅡ对LOVO细胞增殖的影响。用淋巴细胞提取液提取外周血淋巴细胞,并与转染了sTGF-βRⅡ的大肠癌LOVO细胞共同培养,用流式细胞仪检测各实验对照组T淋巴细胞亚群的表达。结果:sTGF-βRⅡ在LOVO细胞中获得表达,sTGF-βRⅡ可抑制TGF-β1作用下的LOVO细胞增殖(P<0.01),与淋巴细胞共同培养后的转染组T淋巴细胞亚群的CD4阳性T细胞、CD8阳性T细胞较其它实验组均显著增高(P<0.05)。结论:sTGF-βRⅡ可拮抗TGF-β1的信号传导,抑制TGF-β1作用下的LOVO细胞增殖,进而拮抗TGF-β1的抑制肿瘤免疫作用,使宿主T细胞的抗肿瘤免疫功能得到较大恢复,从而达到抗肿瘤的作用。     

Neurodegeneration in autoimmune MRL-lpr mice as revealed by Fluoro Jade B staining

As in many humans suffering from lupus erythematosus, the development of systemic autoimmunity and inflammation in Fas-deficient MRL-lpr mice is accompanied by CNS dysfunction of unknown etiology. Experimental studies revealed infiltration of lymphoid cells into the choroid plexus, reduced neuronal complexity, retarded brain growth, and enlargement of cerebral ventricles. Moreover, an increased presence of cells with nicked-DNA (TUNEL+ cells) in the periventricular areas suggested accelerated apoptosis in brain cells of MRL-lpr mice. However, direct evidence that the dying cells were neurons was lacking. For this purpose, we presently use Fluoro-Jade B (FJB), a novel fluorescent dye which has high affinity for dying neurons (both apoptotic and necrotic). As expected, in comparison to the control groups, the brains of diseased, 5-month-old MRL-lpr mice showed increased numbers of FJB-positive (+) cells in cortical and periventricular regions. The FJB+ cells were significantly more numerous than TUNEL+ cells, and only approximately 7% co-localized with TUNEL. Immunostaining for CD4 and CD8 markers did not correlate with the number of FJB+ cells, suggesting that T-lymphocyte infiltration into the brain tissue is not a reliable predictor of neuronal demise. Conversely, indices of systemic autoimmunity (splenomegaly and high serum anti-nuclear antibody levels) were associated with increased FJB+ cell numbers in brains of autoimmune MRL-lpr mice, supporting the causal link between autoimmunity and neurodegeneration. Taken together, the above results suggest that factors other than T-cell infiltration and cell death mechanisms other than Fas-mediated apoptosis dominate neuronal degeneration in lupus-prone MRL-lpr mice.     

甘草泻心汤治疗复发性阿弗他溃疡的T淋巴细胞亚群变化

目的观察中药甘草泻心汤对复发性阿弗他溃疡患者T淋巴细胞亚群的影响。方法检测31例患者治疗前后外周血T淋巴细胞亚群变化,并与30例健康对照者进行比较。结果中药治疗后,CD3+细胞数量、CD4+细胞数量、CD4+/CD8+比值均升高,CD8+细胞数量下降,与治疗前相比有显著性差异,与健康对照组比较无明显差异。结论中药甘草泻心汤能改善RAU患者外周血T淋巴细胞亚群失衡。     

小剂量罗红霉素对下呼吸道绿脓杆菌感染患者的免疫调节作用

目的:研究小剂量长疗程罗红霉素对下呼吸道绿脓杆菌感染患者外周血T淋巴细胞亚群的影响。方法:将60例下呼吸道绿脓杆菌感染患者随机分为对照组(n=30)和治疗组(n=30),根据药敏结果两组均选用2种敏感抗生素联合抗绿脓杆菌治疗,疗程3~4周,并治疗基础疾病。治疗组在对照组的基础上加罗红霉素胶囊口服0.15 g,2次/d,疗程6个月。观察2组治疗前、6个月后患者外周血T淋巴细胞的变化及6个月后细菌清除率。结果:细菌清除率对照组26.7%(8/30),治疗组71%(20/28),治疗组细菌清除率与对照组相比有显著差异(P<0.01)。与对照组相比,6个月小剂量罗红霉素干预可明显提高绿脓杆菌下呼吸道感染患者外周血T淋巴细胞CD4+亚群数量及CD4+/CD8+比值(P<0.05),下调CD8+亚群数量(P<0.05)。结论:小剂量罗红霉素长疗程干预可改善下呼吸道绿脓杆菌感染患者的细胞免疫力,并有利于抗生素对绿脓杆菌的清除。     

1,25(OH)_2D_3对NOD小鼠1型糖尿病的免疫干预及其机制研究

目的观察1,25(OH)2D3对雌性非肥胖糖尿病(NOD)小鼠糖尿病发病率、胰岛炎的影响,以及外周免疫器官脾脏T淋巴细胞亚群的变化,血清细胞因子干扰素γ(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)及一氧化氮(NO)的水平,从而更好地揭示1,25(OH)2D3的免疫调节机制。方法离乳(21 d龄)的雌性NOD小鼠(80只)随机分为两组:第1组给予1,25(OH)2D3(5μg/kg)隔日1次腹腔注射,共7周,作为实验组。第2组给予等量花生油作为对照组(40只),给药时间、方法同前。10周龄时腹腔注射环磷酰胺以加速糖尿病。加速1周后各取15只通过酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测IFN-γI、L-4水平,生化比色法检测NO水平,流式细胞仪分析脾组织T细胞亚群的变化。其余继续观察。小鼠在被确诊糖尿病或环磷酰胺加速后1个月处死,观察胰腺病理变化、糖尿病发病率及血钙水平。结果实验组发病率(12%)明显低于对照组(56%),P<0.01;实验组胰岛炎症分数较对照组明显降低P<0.01,炎症程度也明显减轻;实验组血清IL-4较对照组明显升高[(52±9)ng/Lvs(33±3)ng/L],P<0.01;IFN-γ、NO较对照组显著降低[(71±16)ng/Lvs(141±11)ng/L,(78±28)ng/Lvs(118±19)ng/L],P均<0.01;脾脏淋巴细胞经流式细胞仪测定,结果显示实验组T细胞CD4+、CD8+亚群较对照组显著升高,CD4+亚群为47±6与35±4(P<0.01),CD8+亚群为11.6±3.6与7.8±1.5(P<0.05),而CD4+/CD8+亚群分别为4.3±0.9与4.6±0.9(P>0.05),两组差异无统计学意义;实验组血钙较对照组稍高,但NOD小鼠可以很好耐受。结论1,25(OH)2D3可以预防环磷酰胺加速的NOD小鼠糖尿病的发生,并可减轻胰岛炎。其机制:①可能与增加Th2型细胞因子的全身表达,降低Th1型细胞因子的全身表达,从而调节Th1/Th2型细胞因子比例失衡有关。②可能与增加抑制性T细胞数目,促进CD4+T细胞由Th1向Th2亚群转化有关。该实验同时证实了NO在糖尿病的发生机制中起一定作用。     

Diphenylhydantoin (DPH) blocks HIV-receptor on T-lymphocyte surface

Summary Previous reports have shown the capacity of diphenylhydantoin (DPH) to attach to the membranes of lymphatic cells as a hapten and thus exert an unspecific influence on their ability to express certain recognition molecules. This led us to the hypothesis, that DPH might as well serve to manipulate the t-helperlymphocytes in a way that the mode of infection of these cells by the HIV might be blocked. In order to verify this hypothesis, we exposed normal control lymphocytes as well as lymphocytes from DPH-treated patients (3×100–150 mg DPH/day, Phenhydan^®, for a minimum of 10 days) to radioactively labeled HIV (¹²⁵I). Remaining radioactivity was assessed using a gamma-counter and measured 64.000–92.000 counts/min (n=24, mean 80.000) for the control lymphocytes, while remaining radioactivity for the DPH-treated lymphocytes ranged between 2000 and 7000 counts/min (n=24, mean 4.000, p<0.001). These results and similar experiments obtained with FITC-labeled HIV led us to the conclusion that DPH inhibits HIV recognition of T-lymphocytes and therefore might be used in therapy and prophylaxis of AIDS.Presented at the 32nd Annual Meeting of the German Society for Hematology and Oncology, October 1986, Tübingen, Federal Republic of Germany     

海洋生物活性成份(HQS-V)对免疫受抑小鼠免疫机能的影响

采用液-液分配色谱等方法对海洋生物-被囊类动物进行萃取分离,得到不同组分的活性提取物,观察HQS-V成分对免疫低下小鼠部分免疫功能指标的影响。通过环磷酰胺造成小鼠免疫功能低下,HQS-V按每日100mg/kg、200mg/kg、400mg/kg分成三组。结果显示100mg/kg及200mg/kg两组对免疫抑制小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬功能影响更明显(模型组OD值为0。070±0.015,100mg/kg组0.417±0.184,20mg/kg组0.348±0.145,400mg/kg组0.168±0.120),而对脾T淋     

射干麻黄汤加减联合脾多肽注射液 对小儿咳嗽变异性哮喘的免疫功能影响及临床疗效观察

目的 探讨射干麻黄汤加减联合脾多肽注射液对小儿咳嗽变异性哮喘的免疫功能影响及临床治疗效果。方法 黑龙江中医药大学附属第一医院2015年2月至2016年12月收治小儿咳嗽变异性哮喘64例,按随机数字表法分成两组。对照组32例,采取中医辨证射干麻黄汤加减,煎至150~200 mL,分2次服;观察组32例,采用射干麻黄汤加减联合脾多肽注射液治疗(每日1次静脉滴注脾多肽注射液1支)。7 d为一个疗程,治疗前后分别采用流式细胞术检测观察组及对照组的外周血T淋巴细胞群,并在一个疗程结束后评定疗效。结果 观察组32例,临床治愈15例,显效10例,有效4例,无效3例,总体有效率90.6%;对照组32例,临床治愈10例,显效9例,有效6例,无效7例,总体有效率78.1%。两组均未发现不良反应。与治疗前相比,两组在治疗后的外周血T淋巴细胞亚群CD3⁺T和CD4⁺T细胞亚群均上升(P=0.000),CD8⁺T及Treg(调节T细胞)亚群均下降(P=0.000);观察组的外周血T淋巴细胞亚群较对照组改变差异有统计学意义(P=0.000)。治疗前观察组和对照组的血清免疫球蛋白水平(IgM、IgG和IgA)差异无统计学意义。治疗后,观察组的血清免疫球蛋白水平(IgM、IgG)较治疗前升高(P=0.000),且高于对照组(P=0.003,P=0.000)。结论 射干麻黄汤加减联合脾多肽注射液应用于小儿CVA疗效显著,副作用小,且能显著改善病儿免疫功能,值得临床推广。     

细菌溶解产物预防支气管哮喘儿童并发呼吸道感染的临床疗效观察

目的观察细菌溶解产物对于支气管哮喘儿童并发急性呼吸道感染的临床疗效和安全性。方法采用前瞻性研究,选取2016年1月至2018年12月上海交通大学医学院附属新华医院收治的120例支气管哮喘缓解期患儿,采用随机方法将患儿平均分为两组:对照组和治疗组,每组各60例。对照组患儿仅采用常规吸入性糖皮质激素治疗,治疗组患儿在常规吸入性糖皮质激素治疗的基础上,给予细菌溶解产物治疗(3.5 mg/d,每月10 d,连续3个月),连续随访1年,比较两组患儿治疗9个月、12个月时急性呼吸道感染发生次数、哮喘累计发作次数、喘息累计发作天数及鼻塞发作次数,记录两组患儿血液淋巴细胞亚群及用药后不良反应发生情况。结果治疗组患儿的急性呼吸道感染发生次数(2.89±1.07、4.30±1.06)低于对照组(3.50±1.282、5.00±1.262),差异具有统计学意义(P<0.01);治疗组患儿哮喘发作次数(0.36±0.65、0.44±0.71)低于对照组(0.68±1.12、1.00±1.62),差异具有统计学意义(P<0.01);治疗组鼻塞发作次数(0.36±0.65、0.45±0.78)低于对照组(0.36±0.65、0.76±0.98),差异具有统计学意义(P<0.01)。治疗组患儿3个月随访患儿血清CD3^+%、CD4^+%、CD4^+/CD8^+水平高于对照组CD3^+%、CD4^+%、CD4^+/CD8^+,差异具有统计学意义(P<0.01),但两组患儿的CD8^+%水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。细菌溶解产物治疗期间共报道5例不良事件,均轻微短暂,未导致受试药品停用。结论应用细菌溶解产物可以预防支气管哮喘儿童并发呼吸道感染,可显著减少患儿呼吸道感染发生次数、喘息发作次数、鼻塞发作次数和喘息累计发作天数,增强细胞免疫机能,且安全性较高。     

结核病患者外周血B细胞及其亚群的检测

目的初步建立B细胞分群技术,并了解健康对照者、结核潜伏感染者、结核患者B细胞亚群的分布情况。方法根据B细胞表面CD19/CD5/CD1d标识将B细胞分为四群。利用流式细胞技术比较健康对照、结核潜伏感染者、结核患者外周血B细胞及B细胞分群表达的差异。结果结核患者外周血B细胞较健康对照者减少,但结果无统计学差异。结核患者外周血CD19+CD5+CD1d+B细胞显著高于健康对照及结核潜伏感染者(P<0.05);CD19+CD5-CD1d+B细胞高于结核潜伏感染者(P<0.05);CD19+CD5-CD1d-B细胞低于结核潜伏感染者(P<0.05)。结论肺结核患者外周血中存在着B细胞亚群的紊乱,尤其是CD19+CD5+CD1d+B细胞增多最为明显,而CD19+CD5-CD1d+B/CD19+CD5-CD1d-B细胞只比结核潜伏感染者显著增多或降低,提示B细胞亚群在结核的发病中起重要作用。