脂肪基质细胞脂向分化过程中MicroRNA-134的表达变化

目的 了解脂肪基质细胞（ADSCs）脂向分化过程中miR-134表达变化情况,深入了解ADSCs脂向分化的分子调控机制,为脂肪组织工程的研究和发展奠定基础。 方法 实验于四川大学口腔疾病研究国家重点实验室完成：(1)采取出生30d的雄性体健SD（Sprague-Dawley）幼鼠的腹股沟脂肪组织, 用密度梯度离心结合贴壁培养法分离、纯化后诱导培养大鼠脂肪基质细胞(ADSCs)7d,设置未诱导组以对照。 (2)应用miRNA芯片技术比较诱导组和未诱导组的miR-134表达差异。(3)用实时定量PCR定量验证ADSCs脂向分化前后miR-134表达差异。 结果 (1)成功分离、纯化、培养ADSCs,诱导组培养7d后观察到典型脂肪细胞特征,细胞形态学上表现为细胞相互融合,成片生长,呈细长纺锤形,大量脂滴形成;PPARγ免疫细胞化学染色呈阳性;油红O染色脂滴被染成橙红色。(2)成脂诱导前后miR-134表达明显下调,其中诱导修正值205 4.5与无诱导修正值285 5.25。 (3)实时定量PCR结果亦显示miR-134表达显著下调,与miRNA芯片结果一致。 结论 miR-134在ADSCs脂向分化过程中miR-134表达显著下调,可能参与调控ADSCs的脂向分化。     

微小RNA-200b的异常表达与子宫内膜癌的关系

目的研究微小RNA-200b（microRNA-200b）在子宫内膜癌及子宫正常内膜组织中的表达量,分析microRNA-200b表达量和子宫内膜癌临床病理特征的关系及其子宫内膜癌发生、发展中的意义。方法采用荧光实时定量PCR方法检测47例子宫内膜癌和11例正常子宫内膜组织的microRNA-200b表达量。结果子宫内膜癌组织中microRNA-200b的表达较正常内膜组织明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;各年龄组织分型、临床分期的子宫内膜癌microRNA-200b表达量的差异无统计学意义（均P〉0．05）。结论微小RNA-200b可能参与了子宫内膜癌的发生、发展过程,起到癌基因的作用,其高表达可以作为一个早期筛查的分子标记物。     

病毒性心肌炎儿童112 例血浆外泌体微小RNA-148a 水平的观察

目的观察病毒性心肌炎(VMC)病儿血浆外泌体微小RNA(miR)-148a的水平并分析其意义。方法选择2017年9月至2019年6月郑州大学附属儿童医院收治的VMC病儿112例纳入研究组,另选取同期门诊健康体检正常儿童112例为对照组,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测血浆外泌体miR-148a水平,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测血浆外泌体心肌肌钙蛋白I(cTnI),采用自动化生化仪检测血浆外泌体肌酸激酶同工酶(CK-MB)水平、超敏C反应蛋白(hs-CRP)水平。采用Pearson相关性分析检验VMC病儿血浆外泌体miR-148a与cTnI、CK-MB、hs-CRP水平的相关性。绘制受试者工作特征曲线(ROC)分析血浆外泌体miR-148a对VMC的诊断价值。结果血浆外泌体在透射电镜下呈大小不等、直径约100 nm典型圆形或椭圆形囊泡结构。与对照组比较,研究组血浆外泌体miR-148a水平［(1.01±0.12)比(5.34±1.06)］、血浆cTnI、CK-MB、hs-CRP水平均增加(均P<0.001)。VMC病儿血浆外泌体miR-148a与血浆cTnI、CK-MB、hs-CRP水平均呈正相关(r=0.62、0.64、0.49,均P<0.001)。血浆外泌体miR-148a及血浆cTnI、CK-MB、hs-CRP诊断早期VMC的曲线下面积(AUC)分别为0.94、0.94、0.83、0.86,截断值分别为1.87、0.19 μg/L、56.45 U/L、2.06 mg/L,灵敏度分别为94.60%、92.90%、84.80%、83.90%,特异度分别为92.90%、94.60%、83.90%、83.90%。血浆外泌体miR-148a与血浆cTnI诊断早期VMC的效能一致,均优于血浆CK-MB、hs-CRP。结论VMC病儿血浆外泌体miR-148a水平上调,可能对VMC有一定诊断价值。     

长链非编码 RNA母系表达基因 3、微小 RNA-21表达与冠状动脉钙化的相关性分析

目的探究长链非编码 RNA母系表达基因 3(LncRNA MEG3)、微小 RNA-21(miR-21)与冠状动脉钙化的相关性。方法选取 2018年 6月至 2019年 6月在邯郸市中心医院行冠状动脉造影及 CT检查确诊为冠状动脉钙化病人 189例作为钙化组,另选取同期在该院行冠状动脉造影及 CT检查显示无冠状动脉钙化者 183例作为未钙化组。采用实时荧光定量 PCR(qRT-PCR)法检测血清 LncRNA MEG3、miR-21表达水平,采用 Pearson法分析病人血清 LncRNA MEG3、miR-21水平及与糖化血红蛋白(HbA1c)、高敏 C反应蛋白( hs-CRP)、肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)、白细胞介素 -1β(IL-1β)水平相关性,采用 logistic回归模型分析冠状动脉钙化发生的影响因素,采用 ROC曲线评估血清 LncRNA MEG3、miR-21表达水平对冠状动脉钙化的预测价值。结     

老年重症肺炎病人血清微小 RNA-146a、微小 RNA-223、微小 RNA-21、微小 RNA-124水平及其与预后的关系

目的探究老年重症肺炎病人血清微小 RNA(miR)-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及其与预后的关系。方法选取 2018年 2月至 2020年 3月郑州大学第二附属医院诊治的 128例老年重症肺炎病人、 130例普通肺炎病人分别为重症肺炎组、普通肺炎组,并纳入同期 128例体检健康者为健康组。比较三组血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平及肿瘤坏死因子 -α(TNF-α)水平;分析老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124表达水平与 TNF-α的相关性;比较不同预后老年重症肺炎病人临床资料和血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124水平;分析老年重症肺炎病人死亡的影响因素;分析血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α对老年重症肺炎病人预后的预测价值。结果普通肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 1.67±0.56、1.64±0.55、1.71±0.57、(12.78±4.30)ng/L,重症肺炎组病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水平分别为 2.32±0.78、2.27±0.76、2.39±0.80、(23.64±7.92)ng/L,高于健康组的 1.03±0.35、1.01±0.34、0.99±0.33、(5.43±1.84)ng/L、(P<0.05)普通肺炎组、重症肺炎组血清 miR-124表达水平分别为 0.71±0.24、0.37±0.13,低于健康组的 1.07±0.37(P<0.05);重症肺炎人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平及 TNF-α水组病,平高于普通肺炎组( P<0.05)血清 miR-124表达水平低于普通肺炎组( P<0.05);老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、 miR-21表达水平与 TNF-α呈正,相关( P<0.05)血清 miR-124表达水平与 TNF-α呈负相关( P<0.05);死亡组老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α水平及有,呼吸系统疾病史、吸烟史、机械通气占比高于生存组( P<0.05),血清 miR-124表达水平、氧分压水平低于生存组( P<0.05); miR-146a、miR-223、miR-21、TNF-α、机械通气是老年重症肺炎病人死亡的危险因素( P<0.05);血清 miR-146a、miR-223、miR-21、miR-124、TNF-α预测老年重症肺炎病人预后的曲线下面积( AUC)分别为 0.84、0.88、0.82、0.66、0.68,其灵敏度分别为 72.5%、80.4%、82.4%、60.8%、60.8%,特异度分别为 85.7%、81.8%、79.2%、67.5%、72.4%。结论老年重症肺炎病人血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平较高,与 TNF-α水平呈正相关; miR-124表达水平较低,与 TNF-α水平呈负相关。且测定血清 miR-146a、miR-223、miR-21表达水平有助于临床预测老年重症肺炎病人的预后情况。     

微小 RNA-454、微小 RNA-132、液泡膜 -ATP酶表达与结肠癌临床病理特征关联性分析

目的探讨组织微小 RNA(miR)-454、miR-132、液泡膜 -ATP酶( V-ATPase)表达与结肠癌病人临床病理特征关联性。方法选取 2011年 9月至 2014年 11月新乡医学院第一附属医院行手术切除的 96例结肠癌组织标本、 96例癌旁正常结肠组织标本、 82例良性结肠病变标本为研究对象。以实时荧光定量逆转录聚合酶链反应( qRT-PCR)测定标本中 miR-454、miR-132、 V-ATPase mRNA表达,分析 miR-454、miR-132、V-ATPase mRNA表达与结肠癌病人一般资料、临床病理参数的关系,随访 5年,统计 miR-454、miR-132、V-ATPase高表达、低表达病人 3年、 5年生存率。结果结肠癌组织标本中 miR-454表达 69.86±7.29与 V-ATPase mRNA表达 5.42±0.41高于良性结肠病变组织 10.74±2.03、2.79±0.38、癌旁正常结肠组织标本 1.28±0.74、1.96±0.32, miR-132水平表达 1.46±0.25低于良性结肠病变组织 3.68±0.73、癌旁正常结肠组织标本 4.59±1.24(P<0.05);中低分化、 Ducks分期 C~D期、有淋巴结转移结肠癌病人 miR-454与 V-ATPase mRNA表达高于高分化、 Ducks分期为 A~B期、无淋巴结转移病人, miR-132表达低于高分化、 Ducks分期为 A~B期、无淋巴结转移病人( P<0.05); miR-454、V-ATPase mRNA表达与组织分化程度呈显著负相关,与 Ducks分期、淋巴结转移呈显著正相关, miR-132表达与组织分化程度呈显著正相关,与 Ducks分期、淋巴结转移呈显著负相关( P<0.05); miR-454、V-ATPase mRNA高表达病人 3年( 9.23%、33.85%)、 5年生存率( 44.00%、28.00%)低于低表达( 70.97%、61.29%)、(69.57%、55.10%)病人, miR-132高表达病人 3年、 5年生存率( 70.59%、58.82%)高于低表达病人(48.39%、33.87%)(P<0.05)。结论 miR-454、V-ATPase mRNA表达与组织分化程度呈显著负相关,与 Ducks分期、淋巴结转移呈显著正相关, miR-132表达与组织分化程度呈显著正相关,与 Ducks分期、淋巴结转移呈显著负相关,可为结肠癌恶性化生物学行为特征、病理级别、预后判断提供客观依据。     

MicroRNA-590在急性心肌梗死诊断及预后评估中的价值

目的 研究microRNA-590(miR-590)在急性心肌梗死(AMI)诊断及预后评估中的价值.方法 选择2018年5月至2019年10月安徽省第二人民医院心内科收治的患者162例,根据临床诊断及冠状动脉造影结果,分为对照组(HC组,n=40)、稳定型心绞痛(SAP)组(n=50)和AMI组(n=72),收集临床资...     

miR-25对缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡的作用

目的:探讨微小RNA-25(miR-25)在缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡过程中的作用及机制。方法:构建miR-25高表达H9c2细胞系,行缺氧/复氧损伤处理,real-time PCR检测miR-25及高迁移率族蛋白B1(HMGB1)mRNA的表达,Western blot检测HMGB1及细胞凋亡相关蛋白Bcl-2和cleaved caspase-3的蛋白表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期的变化,明确miR-25的高表达对缺氧/复氧所诱导的H9c2细胞凋亡及HMGB1表达的影响。然后通过双萤光素酶报告基因验证miR-25与HMGB1的靶向关系,并构建转染HMGB1 shRNA的H9c2稳定细胞系,行缺氧/复氧损伤处理,验证HMGB1是否参与缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡的调控。结果:与对照组相比,高表达miR-25组的H9c2细胞在缺氧/复氧诱导后HMGB1表达下调,Bcl-2表达上调,cleaved caspase-3蛋白水平下调,流式细胞术提示处于S期的细胞增多,G1期减少(P0.01)。双萤光素报告基因显示,转染miR-25 mimic+野生型HMGB1-3’UTR报告基因载体组萤光素酶活性明显下降;转染miR-25 inhibitor+野生型HMGB1-3’UTR和转染miR-25 mimic+突变型HMGB1-3’UTR报告基因载体组萤光素酶活性没有变化。转染HMGB1-shRNA的H9c2细胞中抗凋亡蛋白Bcl-2表达上调,凋亡蛋白cleaved caspase-3蛋白水平下调,流式细胞术分析提示细胞凋亡减少,处于S期的细胞增多,G1期减少(P0.05)。结论:miR-25减少缺氧/复氧诱导的H9c2细胞凋亡,期作用机制可能与靶向调控HMGB1表达有关。     

基于HepG2细胞胰岛素抵抗模型探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用

目的:通过体外建立Hep G2细胞胰岛素抵抗模型,检测胰岛素抵抗状态下微小RNA-7-5p(miR-7-5p)及其预测靶基因Itch的差异表达,初步探讨miR-7-5p对Itch基因的靶向作用及其与胰岛素抵抗的关系。方法:采用适宜浓度的软脂酸诱导Hep G2细胞,建立体外胰岛素抵抗模型;基于生物信息学分析预测miR-7-5p可能作用的靶基因及其富集的相关信号通路;运用RT-q PCR和Western blot技术检测在胰岛素抵抗状态下miR-7-5p和Itch的表达变化。结果:0.25 mmol/L的软脂酸作用于Hep G2细胞24 h可诱导细胞产生胰岛素抵抗,RT-q PCR检测表明,与阴性对照组相比,胰岛素抵抗组的miR-7-5p表达下调(P0.01)。生物信息学分析结果表明,miR-7-5p有相当数量的靶基因富集于泛素-蛋白酶体系统,其中E3泛素连接酶Itch基因是与胰岛素抵抗最为相关的靶基因;Western blot结果揭示,在胰岛素抵抗状态下,Hep G2细胞中Itch蛋白表达上调(P0.01)。结论:miR-7-5p可能参与了胰岛素抵抗的病理生理过程,其机制可能通过靶向调控Itch基因的表达,进而直接或间接影响胰岛素信号通路的正常转导。