小檗碱诱导产ACT-1型AmpC酶大肠埃希菌蛋白质组学研究

目的研究小檗碱诱导前后产AmpC酶大肠埃希菌的蛋白质谱变化,找出有价值的靶位。方法提取经小檗碱诱导前后的产ACT-1型AmpC酶国内以大肠埃希菌的全菌蛋白,经双向凝胶电泳技术分析、Bluesilver法染色、凝胶图像分析．MALDI-TOF-MS质谱比较等步骤,找出诱导前后的差异蛋白质。结果诱导前后共有8个差异性蛋白,其中外膜蛋白lI、AmpC—β-内酰胺酶、转座酶的表达明显上调,而磷酸转移酶系统的葡萄糖特异性组分ⅡA蛋白、甘油磷酰基二酯酶、抗碲酸盐蛋白、硫醇过氧化物酶、细胞分裂蛋白nsZ等蛋白表达下调。结论该研究筛选出的差异性蛋白与产ACT—1型AmpC酶大肠埃希菌机制相关,可为医学界研发和选择抗菌药物提供有价值的依据。     

头孢美唑和头孢西丁对产与不产超广谱β-内酰胺酶菌株体外抗菌活性比较

目的：测定头孢羡唑和头孢西丁对产与不产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）菌株的体外抗菌活性。方法：收集2004年1月到2004年12月从华西医院各临床科室分离出的大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌520株,采用Kirby-Bauer琼脂扩散法进行体外药敏试验并用表型确证试验检测ESBLs。结果：筛选出产ESBLs菌226株,ESBLs阳性检出率为43．5％,其中大肠埃希菌的ESBLs检出率为45．8％．肺炎克雷伯菌的ESBLs检出率为39．6％。头孢美唑对我院ESBLs阳性菌株体外抗菌活性优于头孢西丁。结论：头霉素类抗生素可作为治疗ESBLs菌株引起的重症感染的可选药物,且对我院分离的产ESBLS犬肠杆菌和肺炎克雷伯菌,头孢美唑体外活性略优于头孢西丁。     

43株奇异变形杆菌检测及其耐药分析

目的检测从临床标本中分离的43株奇异变形杆菌对16种抗菌药物的体外活性,以及这些杆菌产超广谱β-内酰胺酶、AmpC酶、金属β-内酰胺酶的情况,正确指导临床合理使用抗生素。方法用API-20E对菌株进行鉴定,双纸片协同试验和确证试验筛选超广谱β-内酰胺酶,纸片扩散法检测AmpC酶,改良Hodge试验检测金属β-内酰胺酶,药敏试验采用标准的纸片扩散法。结果奇异变形杆菌的产酶率为20．9％(9／43)。其中,超广谱β-内酰胺酶为18．6％(8／43),AmpC酶为2．3％(1／43),金属β-内酰胺酶为0。三代头孢菌素、四代头孢菌素、氨曲南、头孢西啶、亚胺培南、阿米卡星和左氧氟沙星的敏感率均大于80％。结论实验室有必要加强对产β-内酰胺酶奇异变形杆菌的检测。三代头孢菌素、四代头孢菌素、氨曲南、头孢西啶、亚胺培南、阿米卡星和左氧氟沙星是治疗奇异变形杆菌感染的首选药物。     

耐亚胺培南铜绿假单胞菌产金属β-内酰胺酶的研究

目的检测该院2005年4~7月住院患者耐亚胺培南铜绿假单胞菌(PA)产金属β-内酰胺酶(MBL)的情况,为难治性感染治疗提供参考。方法VITEK-60鉴定细菌及测定PA对抗菌药物的耐药性;纸片法检测PA产MBL。结果共检出PA103株,耐亚胺培南PA47株,同时耐头孢他啶16株,其中产MBL的PA8株,占所分离PA的7.8%,占耐亚胺培南PA的17.0%。8株产酶菌株中除1株对左旋氧氟沙星敏感外,对羧苄青霉素、阿米卡星、替卡西林/克拉维酸、头孢哌酮、头孢他啶、头孢吡肟、奈替米星、复方增效磺胺、哌拉西林/他唑巴坦、环丙沙星等抗生素均耐药;非产酶菌株仅有2株对羧苄青霉素敏感,1株对阿米卡星敏感,对其他抗生素均耐药。结论临床感染分离的PA、产酶菌株与非产酶菌株均呈多重耐药性。产MBL是PA对头孢类及碳青酶烯类抗生素耐药的机制之一,实验室对其正确检测可帮助临床合理选用抗菌药物,并减少耐药性的扩散。     

70株鲍曼不动杆菌耐药性及β-内酰胺酶基因型检测

目的调查和研究南京地区70株鲍曼不动杆菌耐药性及β内酰胺酶基因型。方法用KB法测定临床分离的70株鲍曼不动杆菌对5种抗生素的耐药性,采用PCR法检测β-内酰胺酶耐药基因型。结果70株鲍曼不动杆菌对头孢哌酮／舒巴坦耐药率为7．1％,头孢吡肟和头孢他啶的耐药率分别为61．4％和64．3％,头孢唑啉和头孢呋肟的耐药率均在80．0％以上;有40株菌检测到TEM型β-内酰胺酶基因,且均对头孢吡肟等抗生素耐药,2株为GES型,1株是VEB型,未检出CARB、DHA和PER基因。结论南京地区鲍曼不动杆菌以TEM型为主,其对β-内酰胺类的高耐药率与TEM型基因有直接的关系。     

产超广谱β—内酰胺酶的检测及耐药性观察

目的：探讨超广谱β-内酰胺酶（ESβLs)的检测技术及调查产ESβLs细菌的耐药情况。方法：对486株肠肝菌科细菌用双纸片协同法和复合纸片法做表型确证实验进行检测。结果：大肠埃希菌阳性率为31%，克雷伯菌属阳性率为43%，产ESβLs菌对10种常用抗生素耐药率明显高于非产酶菌株，结论：选择准确快速的检测方法提高ESβLs的阳性检出率，具有十分重要的临床意义。     

产超广谱β-内酰胺酶的革兰阴性杆菌检测及其耐药性研究

目的 探讨产超广谱β-内酰胺酶(产ESBLs)的菌群分布及耐药现状.方法 临床分离的Gˉ杆菌采用VITEK32和双纸片法检测ESBLs,NCCLS 2008作药敏试验.结果 大肠杆菌和克雷伯菌等产ES-BLs菌的检出率为43.8％和37.6％,产ESBLs的Gˉ杆菌对常用抗菌药物耐药率明显高于非产ESBLs菌株.结论...     

大环内酯类抗生素对生物被膜菌产β-内酰胺酶的作用

目的 探讨不同浓度阿奇霉素、红霉素、罗红霉素对生物被膜肺炎克雷伯杆菌产β-内酰胺酶的影响.方法 应用改进的平板培养法建立肺炎克雷伯杆菌生物被膜模型,用扫描电镜观察鉴定.取肺炎克雷伯杆菌30株,经37 ℃ 24h孵育,比浊法配制0.5麦氏比浊标准(MCF)菌悬液,分为A组(生物被膜组)、B.组[1最低抑菌浓度(MIC)阿奇霉素生物被膜组]、B2组(1/8 MIC阿奇霉素生物被膜组)、C,组(1 MIC红霉素生物被膜组)、C2组(1/8 MIC红霉素生物被膜组)、D1组(1 MIC罗红霉素生物被膜组)、D2组(1/8 MIC 罗红霉素生物被膜组)七组,每组200μ1.分别检测各组产β-内酰胺酶的活性.结果 A组、B1组、B2组、C1组、C2组、D1组、D2组β-内酰胺酶的活性分别为0.6534、0.3196、0,4260、0.5028、0.5108、0.6524、0.6470 U/mg,B1组、B2组、C1组、C2组β-内酰胺酶活性均明显低于A组,差异有统计学意义(P＜0.05);D1组、D2组β-内酰胺酶活性与A组比较差异无统计学意义(P＞0.05).B1组β-内酰胺酶活性明显低于B2组,差异有统计学意义(P＜0.05);C1组与C2组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 高浓度的阿奇霉素对生物被膜有较强的破坏作用.

Abstract：

Objective To investigate the effect of azithromycin,erythromycin and roxithromyein at varying concentration on the β-lactamase produced in the biofilm of Klebsiella pneumoniae.Methods Models of Klebsiella pneumoniae were built up with the modified flat-board method and identified with the confocal scanning laser microscopy.Thirty Klebsiella pneumoniae were incubated at 37 ℃for 24 h,and allocated into 7 groups:biofilm (group A),by 1 MIC azithromycin (group B1),by 1/8 MIC azithromycin (group B2),by 1 MIC erythromycin (group C1),by 1/8 MIC erythromycin (group C2),by 1 MIC roxithromycin (group D1),and biofilm induced by 1/8 MIC roxithromycin (group D2),with 200 μ1 each.The β-lactamase activity in each group was quantitated.Results The β-lactamase activity in group A,group B1,group B2,group C1,group C2,group D1 and group D2 was 0.6534,0.3196,0.4260,0.5028,0.5108,0.6524 and 0.6470 U/mg respectively.The β-lactamase activity in group B1,group B2,group C1 and group C2 was lower than that in group A,and statistically significant difference was observed (P＜0.05).The B-lactamase activity in group D1 and group D2 was similar to that in group A,and no statistically significant differences was observed between them (P＞0.05).The β-lactamase activity in group B1 was lower than that in group B2,and statistically significant difference was observed (P <0.05).No statistically significant difference was observed between group C1 and group C2 (P＞0.05).Conclusion Azithromycin at higher concentration exerts better effects on biofilm formation than other macrolides.     

铜绿假单胞菌临床分离株β内酰胺类和氨基糖苷类耐药基因分析

目的 了解临床分离的铜绿假单胞菌中β内酰胺类和氨基糖苷类抗生素相关耐药基因的存在状况。方法 从烧伤患者创面分泌物中分离出20株铜绿假单胞菌,经药物敏感试验后将多重耐药菌株挑出,采用PCR检测其16种β内酰胺类抗生素耐药基因TEM、SHV、OXA-10群、PER、VEB、GES、CARB、CTX-M-Ⅰ、IMP、VIM、SPM、GIM、DHA、MOX、FOX和oprD2和aac（3）-Ⅰ、aac（3）-Ⅱ、aac（6′）-Ⅰ、aac（6′）-Ⅱ、ant（3″）-Ⅰ、ant（2″）-Ⅰ等6种氨基糖苷类修饰酶基因的存在情况。结果 20株B内酰胺类耐药基因中TEM阳性20株（100％）、GES阳性20株（100％）,5株oprD2基因缺失（25％）,其余基因均为阴性。氨基糖苷类耐药基因中aac（6′）-Ⅰ阳性20株（100％）、ant（2″）-Ⅰ阳性7株（35％）,其余基因均为阴性。结论 临床分离的铜绿假单胞菌TEM、GES和aae（6′）-Ⅰ基因携带率高,且检出新型基因GES-5,表明烧伤患者铜绿假单胞菌感染耐药性严重。     

哌拉西林-他唑巴坦替换第三代头孢菌素对肠道产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌定植的影响

目的探讨哌拉西林．他唑巴坦替换第三代头孢菌素对肠道产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希茵定植的影响。方法研究为期9个月,分替换前期（Ⅰ期,3个月）和替换期（Ⅱ期,6个月）;Ⅱ期用哌拉西林．他唑巴坦替换第三代头孢菌素;收集Ⅰ期和Ⅱb期（Ⅱ期后3个月）入选患者临床资料,入院24h采集第一份直肠拭子（基线筛查）,并每7天或在出院前48h采集直肠拭子分离大肠埃希茵,双纸片法检测ESBLs;对至少进行过2次直肠拭子检查的患者（ES1人群）和ES1人群中在筛查或住院期间至少有1次未检出ESBLs的患者（ES2人群）分别分析产ESBLs大肠埃希茵获得率;采用非配对t检验、Pearson卡方检验和Fisher精确检验进行比较。结果Ⅱb期抗生素总用量（除哌拉西林-他唑巴坦）较Ⅰ期减少38．40％,第三代头孢菌素用量较Ⅰ期减少70．11％;哌拉西林-他唑巴坦用量增加895．35％;Ⅱb期ES1和ES2人群产ESBLs大肠埃希茵获得率明显低于Ⅰ期（11．4％比24．0％;11．8％比27．9％）。结论哌拉西林-他唑巴坦替换第三代头孢菌素可降低肠道产ESBLs大肠埃希茵定植。