抗菌肽Alloferon-1串联式重组表达及其表达产物体外抗肿瘤活性的研究

目的:构建串联式表达Alloferon-1的原核重组表达系统,检测合成及重组表达的Alloferon-1体外抗肿瘤细胞活性。方法:采用连接引物PCR法,构建含6×His-EK-8×Alloferon-1-EK-6×His序列的人工融合基因;采用常规分子生物学方法克隆并构建该人工融合基因及其原核表达系统;采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统了解目的重组产物8×rAlloferon-1-EK表达情况和产量;采用Ni-NTA亲和层析及EK酶切和Sephadex G-50层析法提纯8×rAlloferon-1-EK及rAlloferon-1-EK;采用MTT法检测rAlloferon-1-EK体外抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞增殖的作用,并与直接合成的Alloferon-1(sAlloferon-1)和Alloferon-1-EK(sAlloferon-1-EK)的抗肿瘤作用比较。结果:获得了序列正确的目的人工融合基因克隆及其原核表达系统pET42a-8×rAlloferon-1-EK-E.coliBLDE3。在IPTG诱导下,该原核重组表达系统可表达串联式目的重组蛋白8×rAlloferon-1-EK,其产量约为细菌总蛋白的30%。Ni-NTA和Sephadex G-50层析后,可分别获得8×rAlloferon-1-EK和rAlloferon-1-EK。在25~100μg/ml剂量范围内,sAlloferon-1、sAlloferon-1-EK和rAlloferon-1、rAlloferon-1-EK均有明显抑制KB、SGC和HL-60肿瘤细胞生长及增殖的效果(P<0.01),且四者抑制作用无明显差异(P>0.05)。结论:本研究成功构建了串联表达rAlloferon-1的原核表达系统,其表达产物具有与合成的Alloferon-1和Alloferon-1-EK相似的体外抗肿瘤细胞活性。     

六组昆虫抗菌肽的聚丙烯酰胺凝胶电泳

目的分析家蝇成虫、幼虫和蛹,淡色库蚊、美洲大蠊、德国小蠊6组昆虫的抗菌肽成分。方法通过针刺感染大肠杆菌诱导各种昆虫及各虫态产生抗菌肽,再经研磨、离心等步骤提取这些抗菌肽,用改进的聚丙烯凝胶电泳分析其组成。结果淡色库蚊成虫(5条带)、家蝇蛹(4条带)、家蝇成虫(5条带)、家蝇幼虫(7条带)、美洲大蠊和德国小蠊(各3条带)。结论家蝇幼虫的抗菌肽种类较多,可能与其抗菌、抗肿瘤效果有关。     

抗菌肽及其转基因动物的研究进展

抗菌肽是具有广谱抗菌活性的小分子阳离子多肽，不易产生抗性菌，是新一代抗生素的理想候选。利用转基因动物不仅能够进行抗菌肽活性研究，而且能够用来生产抗菌肽，在医学上具有独特的研究和应用价值。本简述了抗菌肽的作用机理和特点、抗菌肽的转基因动物研究进展，并探讨了进一步研究和应用抗菌肽中存在的问题及对策。     

生物消毒剂研究进展

<正> 随着生物技术的迅速发展,多种具有良好杀菌效果、无刺激、无环境污染和毒副作用小的生物制品日益受到重视,在消毒方面展现出令人瞩目的前景、国内外研究人员先后发现了一些纯天然的植物提取液、噬菌体、抗菌肽等具有消毒杀菌功能的物质,近年来又有生物酶应用到消毒     

不同强度超声波对家蝇抗菌物质的诱导研究

昆虫经诱导后，体内能迅速产生或增加许多体液免疫因子，如凝集素、溶菌酶、抗菌肽等，其中抗菌肽是昆虫体液免疫中重要的抗菌因子，不同的诱导源均可诱导昆虫产生抗菌肽。迄今为止，已从多种昆虫体内诱导产生了抗菌肽，它们多数属于全变态类昆虫，研究工作主要集中在鳞翅目昆虫：惜古比天蚕（Hyalophora cecropia）、家蚕（Bombyz mori）、榨蚕（Antheraea pernyi）；双翅目昆虫：棕尾别麻蝇（Sarcophaga peregrina）、伏蝇（Phormia terranovae）、果蝇（Drosophila melanogaster）埃及伊蚊（Aedesaegypti）以及鞘翅目、膜翅目昆虫等，不全变态昆虫诱导产生抗菌物质的报道很少。目前，昆虫抗菌肽研究已成为世界科学家关注的焦点之一，均处于基础研究阶段，主要研究工作在国外进行，国内研究很少。我们课题组先后成功在室内建立了丝光绿蝇和家蝇实验室种群，首次对丝光绿蝇抗菌肽的诱导表达及部分性质进行了研究。本文以不同强度的超声波对家蝇抗菌物质诱导进行了研究探讨，结果报道如下。     

hBD-2在皮肤领域的研究

1概述 在人体对抗外来病原微生物的天然免疫反应中，皮肤及黏膜上皮是第一道防线。新近发现另一防御物质抗菌肽，命名为人类β-防御素-2 （human-β-defensins,hBD-2）。它是一类广泛存在于昆虫，植物、动物及人类体内，具有强力广谱抗病毒、细菌、真菌及螺旋体作用的内源性抗生素肽。它们是参怀宿主天然免疫活动的重要组成部分。     

儿童反复上呼吸道感染与血浆抗菌肽LL-37及维生素D水平的相关性研究

目的 分析人血浆抗菌肽LL-37、25羟维生素D₃与儿童反复上呼吸道感染的相关性,以期为儿童反复上呼吸道感染的防治提供依据。方法 2018年2－8月选取在河北大学附属医院就诊的24例反复上呼吸道感染患儿为实验组,对照组为24例同期健康儿童。两组对象均空腹采血,检测血浆LL-37、25羟维生素D₃含量,同时记录反复呼吸道感染患儿既往1年内发生上呼吸道感染的次数。结果 实验组患儿血浆25羟维生素D₃含量(18.37±5.50) ng/ml与血浆抗菌肽LL-37水平(3.45±0.98) ng/ml明显低于健康对照组(29.24±9.04) ng/ml、(8.93±2.23) ng/ml(P＜0.05)。实验组患儿血浆25羟维生素D₃含量、LL-37水平均与上呼吸道感染次数呈负相关(r=-0.645、-0.560,P＜0.05);血浆25羟维生素D₃含量与血浆LL-37水平呈正相关(r=0.908,P＜0.05)。结论 维生素D缺乏与反复上呼吸道感染发生有关,反复上呼吸道感染患儿血浆LL-37水平下降,且25羟维生素D₃缺乏可能是反复上呼吸道感染患儿血浆LL-37水平下降的重要原因。     

家蝇抗菌肽对细菌感染小鼠外周血多项指标的影响

目的了解在腹腔注射家蝇幼虫分泌物抗菌肽的干预作用下,大肠埃希菌感染小鼠的外周血细胞过氧化物酶及多项血液指标的变化。方法将实验小鼠随机分为空白对照、模型对照、抗菌肽干预3个组,并分别于处理后24 h、48 h、72 h取样分析;外周血细胞过氧化物酶染色采用四甲基联苯胺法,全自动血细胞分析仪检测血红蛋白、血小板、白细胞、红细胞计数及白细胞细胞分类情况。结果在各检测指标中,白细胞数、中性粒细胞绝对值在实验处理间具有显著性差异;感染72 h抗菌肽干预组白细胞数高于模型对照组(P0.05);与空白对照组比较,抗菌肽干预组和模型对照组各检测时间点白细胞数均有显著性差异(P0.05);感染72 h抗菌肽干预组中性粒细胞绝对值显著高于模型对照组(P0.05);血细胞过氧化物酶染色及其余指标在处理因素间无统计学差异。结论腹腔注射家蝇幼虫分泌物抗菌肽对小鼠大肠埃希菌感染具有一定的干预作用。     

新型抗菌肽chrysophsin-1对口腔病原菌和变异链球菌生物膜的作用

口腔龋齿和牙髓疾病是常见的口腔细菌感染疾病。控制和减少致病菌如变异链球菌(Streptococcus mutans)和粪肠球菌(Enterococcus faecalis)是预防和治疗这两种疾病的关键措施。chrysophsin-1是一种阳离子抗菌肽,具有抗革兰阳性和阴     

广东药学院科技工作获重大突破

一、获重大科技奖 广东省科技成果一等奖1项：“中药复方防治高脂血症临床与实验研究”（主持完成人：郭姣）;三等奖2项：“家蝇幼虫抗菌肽基因的克隆筛选及活性研究”（主持完成人：朱家勇）、“医药制剂技术整理研究———130种中药传统剂型的整理研究和展示”（主持完成人：朱盛山）。